基于转录组学和网络药理学探究清眩润目饮治疗干眼的作用机制

目的:基于转录组学和网络药理学探究清眩润目饮(QRY)治疗干眼(DE)的作用机制,并通过干眼动物模型对QRY的药效和关键靶点进行实验验证。方法:运用RNA高通量测序(RNA-seq)技术检测干眼小鼠与正常小鼠的差异表达基因(DEGs),通过数据库筛选QRY有效成分及作用靶点,将二者重叠获取关键靶点后进行GO和KEGG富集分析,构建“药物-成分-靶点-信号通路”网络并分析蛋白质-蛋白质相互作用(PPI);自动物实验开始每7 d对小鼠行Schirmer I试验(SⅠt)、泪膜破裂时间检测(BUT)、角膜荧光染色试验(FL)检查;HE染色观察小鼠角膜组织病理变化;ELISA、Western blot、qRT-PCR验证小鼠角膜组织中核心靶点的蛋白和mRNA表达水平。结果:获得DEGs共2234个、QRY有效成分233个及相关靶点457个,获得关键靶点64个,GO与KEGG分析结果提示QRY与炎症反应密切相关,通过PPI网络筛选出白介素-6(IL-6)等19个核心靶点;QRY组的SⅠt、BUT、FL结果与模型组相比有差异(均P<0.05);HE染色结果示模型组角膜上皮细胞分层紊乱且角膜形态发生改变,QRY组可以改善角膜粗糙及分层紊乱的情况,形态接近空白组;ELISA、Western blot、qRT-PCR结果示QRY组的IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白和mRNA表达对比模型组都呈现出下降趋势。结论:清眩润目饮通过多成分、多靶点、多通路联合发挥作用,利用槲皮素等主要成分对IL-6、IL-1β、TNF等靶点进行调控,从而抑制AGE-RAGE/TNF/IL-17等信号通路以实现对干眼的治疗作用。

基于TRAF6/TAK1信号通路探讨清眩润目饮对干眼大鼠的作用机制

目的探究清眩润目饮通过TRAF6/TAK1信号通路对干眼模型大鼠的作用机制。方法将40只雌性大鼠分为空白组、模型组、清眩润目饮组、玻璃酸钠组,模型组、清眩润目饮组、玻璃酸钠组予0.2%BAC滴眼建立干眼模型。造模成功后,清眩润目饮组予中药灌胃+PBS缓冲液滴眼;玻璃酸钠组大鼠予等量生理盐水灌胃+玻璃酸钠滴眼液滴眼,连续2周。给药2周时进行泪液分泌检测(SIT)及角膜荧光素钠评分(FL),处死大鼠并留取角膜组织,采用ELISA检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及MMP9含量,HE染色观察角膜组织病理学变化;免疫组化染色观察TFAF6的蛋白表达,Western blotting检测TRAF6、p-TAK1及TAK1蛋白的表达量。结果与模型组相比,清眩润目饮组及玻璃酸钠组SIT显著增高(P<0.05),FL显著降低(P<0.05)。HE染色结果显示,清眩润目饮组及玻璃酸钠组角膜组织形态得到明显改善。免疫组化结果显示,清眩润目饮组及玻璃酸钠组TFAF6含量显著低于模型组(P<0.05)。Western blotting结果显示,与模型组相比,清眩润目饮组及玻璃酸钠组大鼠TRAF6水平降低(P<0.05),清眩润目饮组p-TAK1/TAK1水平显著降低(P<0.05)。ELISA结果显示,清眩润目饮组及玻璃酸钠组IL-1β、TNF-α及MMP9水平较模型组显著降低(P<0.05)。结论清眩润目饮能够改善干眼大鼠角膜组织损伤,抑制炎症反应的发生,从而缓解干眼大鼠眼部症状,其机制可能是通过抑制TRAF6/TAK1信号通路实现的。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究清眩润目饮对苯扎氯铵诱导的干眼大鼠的作用机制

目的:基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨清眩润目饮对苯扎氯铵(BAC)诱导干眼模型大鼠的作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、清眩润目饮组、玻璃酸钠组,每组10只(20眼)。除空白组外,各组大鼠采用0.2%BAC滴眼,5μL/眼,2次/d,连续14 d,制备大鼠干眼模型。造模后,清眩润目饮组予中药灌胃,同时予磷酸盐缓冲液滴眼;玻璃酸钠组大鼠予等量生理盐水灌胃及玻璃酸钠滴眼液滴眼;空白组和模型组予等量生理盐水灌胃及磷酸盐缓冲液滴眼,2次/d,连续14 d。末次给药1 h后对各组大鼠行泪液分泌量检测(SIT)及角膜荧光素钠染色(FL)评分;透射电镜观察角膜细胞超微结构;HE染色观察结膜组织病理学变化;RT-qPCR检测各组大鼠角膜、结膜及泪腺中TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB p65 m RNA的表达;ELISA检测各组大鼠角膜、结膜及泪腺中磷酸化p65(p-p65)蛋白的表达。结果:造模14 d后,模型组、清眩润目饮组及玻璃酸钠组大鼠SIT低于空白组(P<0.01),FL评分高于空白组(P<0.01)。给药14 d后,清眩润目饮组、玻璃酸钠组大鼠SIT均高于模型组(P<0.01或P<0.05),FL评分均低于模型组(P<0.05)。透射电镜显示模型组大鼠角膜间隙增大,面积增宽,排列不规则;清眩润目饮组及玻璃酸钠组大鼠角膜上皮细胞间隙增宽程度减轻,排列较规则,角膜结构改善。HE染色显示,与模型组比较,清眩润目饮组及玻璃酸钠组大鼠结膜上皮细胞形态及排列恢复,杯状细胞数量上升。模型组大鼠角膜、结膜及泪腺中TLR4 mRNA、MyD88 mRNA相对表达量高于空白组(P<0.01);清眩润目饮组及玻璃酸钠组大鼠角膜、结膜及泪腺中TLR4 mRNA、MyD88 mRNA相对表达量均低于模型组(P<0.01);清眩润目饮组大鼠角膜中TLR4 mRNA及结膜、泪腺中MyD88 mRNA相对表达量均低于玻璃酸钠组(P<0.01)。模型组大鼠角膜、结膜及泪腺中p-p65蛋白表达水平均高于空白组(P<0.01);清眩润目饮组及玻璃酸钠组大鼠角膜、结膜及泪腺中p-p65蛋白表达水平均低于模型组(P<0.01);清眩润目饮组大鼠角膜及结膜中p-p65蛋白表达水平低于玻璃酸钠组(P<0.05)。结论:清眩润目饮可缓解BAC诱导干眼模型大鼠的干眼症状,修复角膜、结膜损伤,其机制可能是抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路。

清眩润目饮治疗干眼症的网络药理学研究

目的:应用网络药理学和分子对接方法深入研究清眩润目饮治疗干眼症(Dry Eye Disease, DED)的作用机制。方法:首先,利用TCMSP、UniProt数据库收集清眩润目饮的活性成分及相关靶点,通过Cytoscape 3.9.1软件进行可视化,检索GeneCards与OMIM数据库获取DED的相关靶点。然后,借助venny 2.1平台绘制韦恩图,利用STRING平台构建蛋白相互作用(PPI)网络,并用Cytoscape进行可视化分析。将靶点信息导入Metascape数据库,进行后续的GO功能和KEGG通路富集分析,通过微生信平台进行可视化。最后使用AutoDock进行分子对接。结果:共获得清眩润目饮活性成分204个,对应靶点574个,DED相关靶点2621个,得到294个交集靶点;网络分析的结果显示TNF、IL-6、TP53、JUN、STAT3和AKT1为清眩润目饮治疗DED的核心靶点,槲皮素、山柰酚、木犀草素、维生素和腺苷为关键活性成分。共富集得到827条GO条目,154条KEGG通路。分子对接结果表明2种核心活性成分与TP53和AKT1均有较好结合活性。结论:清眩润目饮可能通过槲皮素、山柰酚、木犀草素、维生素和腺苷等核心活性成分作用于TP53、AKT1等核心靶点治疗DED,为清眩润目饮治疗DED提供理论依据。

清眩润目饮对干眼模型鼠眼表炎性因子IFN-γ、IL-17、MMP3、MMP9的影响

目的 对雌性C57BL/6J小鼠进行干眼造模,给予中药清眩润目饮治疗,观察其对眼表炎性因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-17(IL-17)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的影响。方法 将健康雌性C57BL/6J小鼠随机分为A组(空白对照组)、B组(模型组)、C组(中药组)、D组(玻璃酸钠组),每组20只。B、C、D组进行干眼造模,C组给予18 mg/(kg·d)的中药灌胃处理,每天2次;D组给予0.1%玻璃酸钠滴眼液,每天2次。实验结束后取小鼠的泪腺、角膜,采用免疫组化法检测IFN-γ、IL-17、MMP3、MMP9水平。结果 在小鼠泪腺组织中,与B组比较,C组IFN-γ及IL-17蛋白表达水平降低(P <0.05),MMP3蛋白表达水平显著降低(P <0.01);与B组比较,D组IFN-γ蛋白表达水平显著降低(P <0.01),MMP9蛋白表达水平降低(P <0.05)。在小鼠角膜组织中,在小鼠角膜组织中,与B组比较,C组MMP3蛋白表达水平降低(P <0.05),MMP9蛋白表达水平显著降低(P <0.01);与B组比较,D组MMP9蛋白表达水平显著降低(P <0.01)。结论 清眩润目饮能够有效下调干眼模型鼠眼表炎性因子IFN-γ、IL-17、MMP3、MMP9水平,减轻干眼眼表损伤。

中药清眩润目饮治疗睑板腺功能障碍致蒸发过强型干眼60例的临床观察

目的：观察中药清眩润目饮治疗睑板腺功能障碍致蒸发过强型干眼的临床疗效并探讨作用机制。方法：收集我院2012年7月～2013年7月门诊就诊的60例（120眼）睑板腺功能障碍致蒸发过强型干眼患者，随机分为治疗组和对照组各30（60眼）例，治疗组给予自拟中药清眩润目饮治疗，对照组予典必殊滴眼液治疗，治疗4周，观察对比两组疗效。结果：治疗组30例（60眼）中治愈18只眼，好转38只眼，有效率93．33％。对照组30例（60眼）中治愈7只眼，好转42只眼，有效率81．67％。经统计学分析，P＜0．05有显著差异。治疗组患者经治疗后在临床症状和体征、泪液分泌、泪膜破裂时间以及角膜荧光染色方面均优于对照组（P＜0．05）。结论：自拟中药清眩润目饮治疗睑板腺功能障碍致蒸发过强型干眼的疗效优于典必殊滴眼液的疗效。

清眩润目饮内外并用治疗干眼症的临床观察

目的:观察清眩润目饮内外并用治疗干眼症的临床疗效。方法:通过临床症状和体征的变化比较临床疗效。结果及结论:清眩润目饮内外并用治疗干眼症疗效确切。

清眩润目饮治疗兔蒸发过强型干眼的作用机制

目的:研究清眩润目饮对蒸发过强型干眼模型兔的作用机制和疗效。方法:将25只雄性健康日本大耳白兔随机分为5组:空白对照组、模型组、西药组、高剂量清眩润目饮组、低剂量清眩润目饮组。空白对照组不做任何处理,采用改良睑板腺口灼烧法制备兔蒸发过强型干眼模型;造模后,高、低剂量组每天分别予27.2mg/kg、6.8mg/kg的清眩润目饮灌胃,模型组每天以等量生理盐水灌胃,西药组以妥布霉素地塞米松眼膏1滴,1次/d点双眼,各组连续给药28d。各组分别在实验前第14d、实验前第7d、造模后当天、造模后第7d、造模后第14d,对全部实验兔行SchirmerⅠ试验(SchirmerⅠtest,SⅠt)和泪膜破裂时间(break-up time,BUT)测定。造模后15d以过量麻醉法处死动物,制备兔角结膜组织切片,采用苏木精-伊红染色法,观察各组兔角膜组织形态变化;采用ELISA法检测兔角结膜中TNF-α、IL-1、IL-6的浓度含量。结果:(1)BUT、SⅠt:造模后7d,西药组、高、低剂量清眩润目饮组的BUT、SⅠt较造模时均有不同程度的改善(P<0.05);西药组、高、低剂量清眩润目饮组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)TNF-α、IL-1、IL-6:ELISA法检测显示,模型组兔角结膜中的TNF-α、IL-1、IL-6浓度含量明显高于空白对照组,西药组和高、低剂量组兔角结膜中的TNF-α、IL-1、IL-6浓度明显低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05),且高剂量组作用优于西药组。(3)病理组织学检查:造模后14d,空白对照组角膜上皮分层好,基底部细胞排列呈柱状,靠近角膜上皮呈鳞状改变,结膜可见完整的上皮层和结膜下组织层,杯状细胞排列紧密;模型组角膜上皮层细胞数减少甚至剥脱缺失,基质层分层紊乱,结膜上皮细胞层不规则脱失,杯状细胞大量减少;西药组、高剂量组兔角膜形态接近正常组,结膜杯状细胞数量与空白对照组无明显差异。结论:清眩润目饮可以通过下调蒸发过强型干眼兔角膜和结膜中TNF-α、IL-1、IL-6的表达而抑制炎症反应,从而改善眼表症状,增加泪液分泌,延长泪膜破裂时间。

清眩润目饮对蒸发过强型干眼模型鼠角结膜炎症因子表达的影响

目的探讨清眩润目饮对蒸发过强型干眼模型鼠角、结膜炎症因子表达的影响。方法将18只SD大鼠随机分为3组,空白对照组、模型组、清眩润目饮组,空白对照组不做任何处理,其余2组采用纤维电针改良的灼烧器直接灼烧模型鼠睑板腺开口造模;清眩润目饮组予中药清眩润目饮灌胃qd,模型组以等量生理盐水灌胃qd,连续灌胃28 d。各组分别于造模前、造模后即刻、造模后4 w行角膜荧光素染色(CFS)、泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌量检查(SIT)。造模后28 d处死动物,并进行角、结膜炎性因子水平及相关蛋白含量测定及用光镜观察角、结膜组织病理学改变。结果 (1)CFS、BUT、SIT:造模后4 w,清眩润目饮组的CFS评分、BUT、SIT均优于模型组(P<0.05),且结果与同期空白对照组接近(P>0.05)。(2)各组大鼠结膜组织炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达量比较:模型组大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α较空白对照组大鼠数值明显升高(P<0.01);清眩润目饮组较模型组IL-1β、IL-6、TNF-α降低(P<0.01);清眩润目饮组较空白对照组,无统计学显著性(P>0.05)。(3)各组大鼠结膜组织TLR4和MYD88蛋白表达量比较:模型组大鼠TLR4、MyD88蛋白较空白对照组大鼠数值明显升高(P<0.01);清眩润目饮组较模型组降低(P<0.01)。(4)病理组织学检查:空白对照组实验鼠角、结膜组织内未见明显炎性细胞浸润;模型组、清眩润目饮组实验鼠角、结膜组织中均有不同程度的炎性细胞的表达,中药清眩润目饮组角、结膜炎性细胞表达明显弱于模型组。结论清眩润目饮可以减轻睑板腺功能障碍所致蒸发过强型干眼角、结膜的炎性反应,降低炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,影响TLR4、MyD88蛋白质在角、结膜中的表达,其对干眼的治疗作用可能与此有关。

清眩润目饮结合角膜吸氧对自身免疫性干眼症的治疗效果

目的观察清眩润目饮结合角膜吸氧对自身免疫性干眼症的治疗效果。方法选取自身免疫性干眼症患者100例,随机分为观察组与对照组各50例。对照组给予0.1%玻璃酸钠滴眼液,观察组采用清眩润目饮结合角膜吸氧治疗。连续治疗8周后,评价患者临床疗效,比较2组泪腺分泌试验(SIT)、泪膜破裂时间(BUT)、角膜荧光素钠染色(CFS)评分及睑板腺分泌状态、睑板腺缺失状况评分,ELISA检测泪液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)水平,评价视觉相关生存质量。结果治疗8周后,观察组临床总有效率明显高于对照组,观察组SIT、BUT值及视觉相关生存质量评分明显高于对照组(P<0.05),CFS评分、睑板腺分泌状态、睑板腺缺失状况评分较对照组显著降低(P<0.05),同时显著下调了泪液TNF-α、IL-6、IL-17、IFN-γ水平(P<0.05)。结论清眩润目饮结合角膜吸氧可有效提高自身免疫性干眼症患者泪膜稳定性,改善睑板腺功能和视觉生存质量,并通过调节炎症因子异常表达以恢复眼表免疫稳态。

姚靖运用养阴清热法治疗睑板腺功能障碍型干眼经验

姚靖教授指出肺、脾两脏功能失调是导致睑板腺功能障碍型(MGD)干眼发病的主要病因,由此创立“养阴清热法”用于治疗MGD干眼。养阴清热法以养阴润肺生津、清热健脾祛湿为主要治疗原则,治疗方法包括清眩润目饮内服及外用熏目、针刺治疗、太阳穴刺络放血拔罐治疗。养阴清热法能够有效改善MGD干眼患者眼部症状及全身症候。本文将从病因病机、方药组成、针刺治疗、验案举隅等方面对姚靖教授采用养阴清热法的中医理论内涵及临床应用进行介绍,以期能够指导临床。

清眩润目饮颗粒治疗糖尿病干眼患者的临床研究

目的探讨清眩润目饮颗粒联合玻璃酸钠滴眼液对糖尿病干眼患者临床疗效及眼表炎性因子的影响。方法选取糖尿病干眼的患者作为研究对象,对照组在常规治疗的基础上加用玻璃酸钠滴眼液进行治疗,试验组患者在对照组的基础上加用清眩润目饮颗粒制剂口服。比较2组患者的疗效、干眼评分、泪膜破裂时间、泪液中的炎性因子以及药物不良反应发生情况。结果本研究共入组90例,其中试验组44例,对照组46例。试验组因患者中途退出脱落2例,对照组因患者中途退出原因脱落3例,最终试验组和对照组分别纳入42和43例。治疗后,对照组和试验组的总有效率分别为65.12%和88.10%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗1个月,对照组和试验组的干眼症评分分别为6.15±1.58和3.06±0.51,泪膜破裂时间(BUT)评分分别为7.18±1.68和8.06±2.01,基础泪液分泌量(SIT)评分分别为7.18±1.68和8.06±2.01,治疗3个月后,对照组和试验组的干眼症评分分别为4.67±1.26和1.23±0.36,BUT评分分别为8.69±2.06和10.23±2.66;SIT评分分别为8.09±1.35和10.23±1.96。试验组上述指标与对照组组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组患者总药物不良反应发生率为11.63%(5例/43例),试验组患者总药物不良反应发生率为11.90%(5例/42例),差异无统计学意义(P>0.05)。结论清眩润目饮可以辅助改善糖尿病干眼患者的干眼不适症状,并且相对安全,值得临床推广应用。

清肝止眩饮联合西药治疗梅尼埃病致眩晕的效果及对患者眩晕症状及听力功能的影响

分析在常规常规治疗及对症治疗、甲磺酸倍他司汀片的基础上,清肝止眩饮联合西药治疗梅尼埃病致眩晕的临床疗效,并进一步深入探讨对患者眩晕症状及听力功能的影响。方法: 选择2017年12月~2019年6月河北省邢台市清河县中医院耳鼻喉科和河北省邢台市第三医院耳鼻喉科收治的梅尼埃病致眩晕患者100例,采用随机双盲法进行分组,可以将患者分为西药组与中西药联合组各50例。西药组患者给予常规治疗及对症治疗,另给予甲磺酸倍他司汀片,中西药联合组患者在常规常规治疗及对症治疗、甲磺酸倍他司汀片的基础上给予中药清肝止眩饮治疗。比较两组患者临床疗效,治疗前、治疗14天后听力功能指标、眩晕程度评分(DHI)及不良反应。结果: 中西药联合组梅尼埃病致眩晕患者总有效率为90.00%(45/50),高于西药组患者的66.00%(33/60)(X2= 8.392,P= 0.004 )。治疗14天后,2组梅尼埃病致眩晕患者的声导纳值、外耳道容积均大于治疗前,中耳共振频率高于治疗前,DHI评分均低于治疗前,且中西药联合组声导纳值、外耳道容积均大于西药组,中耳共振频率均高于西药组,DHI评分低于西药组(P<0.01)。中西药联合组和西药组梅尼埃病致眩晕患者不良反应总发生率为14.00%、8.00%,组件比较差异无统计学意义(X2=0.919,P=0.338)。结论: 在常规常规治疗及对症治疗、甲磺酸倍他司汀片的基础上,给予梅尼埃病致眩晕患者清肝止眩饮治疗,各数据结果证实效果显著,可有效改善患者眩晕症状及听力功能,安全性高。

中医综合疗法治疗睑板腺功能障碍致蒸发过强型干眼疗效观察

目的:观察中医综合疗法(中药清眩润目饮内外并用、刺络放血拔罐、睑板腺按摩)治疗睑板腺功能障碍致蒸发过强型干眼的临床疗效。方法:回顾性总结分析2013年1月—2014年1月56例(112只眼)于我院门诊就诊的睑板腺功能障碍致蒸发过强型干眼患者,随机分为治疗组28例(56只眼)采用中医综合疗法进行治疗,对照组28例(56只眼)以0.1%氟米龙滴眼液点双眼,疗程4周,比较2组治疗前后患者主观症状积分、睑缘异常评分、泪膜破裂时间的变化,进行统计学分析。结果:治疗组28例(56只眼)中治愈20只眼,好转32只眼,有效率92.9%。对照组28例(56只眼)中治愈8只眼,好转34只眼,有效率75.0%,经统计学分析,P<0.05具有显著差异。治疗组患者经治疗后在主观症状积分、睑缘异常评分、泪膜破裂时间方面均优于对照组(P<0.05)。结论:中医综合疗法治疗睑板腺功能障碍致蒸发过强型干眼可明显改善患者症状,疗效确切。

中西医结合治疗梅尼埃病

梅尼埃病在西医中是指膜迷路积水所致的内耳眩晕症，呈旋转性眩晕，以突发性眩晕、耳鸣、耳聋或眼球震颤为主要临床表现，眩晕有明显的发作期和间歇期。