清肝益肾祛风复方抗高血压肾损伤作用及机制研究

目的:探究清肝益肾祛风方对自发性高血压大鼠的降压、抗高血压肾损伤作用及其可能的作用机制,以期为临床治疗高血压肾损伤提供科学依据。方法:采用4周龄雄性SHR大鼠作为高血压模式动物,适应性饲养一周后随机分为SHR模型组、坎地沙坦治疗组,清肝益肾祛风方(QYQ)治疗组。正常对照组选用同周龄雄性WKY大鼠。从6周龄开始,QYQ治疗组和坎地沙坦治疗组每天分别给予2 ml的清肝益肾祛风方水煎液和坎地沙坦悬液灌胃。SHR组和WKY组采用同等体积的纯水做为对照,连续灌胃至20周龄。采用小动物无创血压计每2周测量一次血压;连续给药至20周龄后,10%水合氯醛腹1腔注射麻醉、腹主动脉取血后处死动物。留取双侧肾脏、采用离心机分离血清。左肾脱水固定包埋后做石蜡切片,Masson’s trichrome染色观察左侧肾脏组织病理变化;采用全自动生化检测仪检测大鼠血清中尿素、肌酐、尿酸水平;Realtime PCR方法检测右侧肾脏组织氧化应激标志物相关基因的mRNA表达水平、炎症因子基因的mRNA表达水平及胶原相关基因的mRNA表达水平。结果:与WKY组相比,SHR组大鼠血压从6周龄开始显著升高(P<0.05),从12周龄开始达到稳定;与SHR组相比较,清肝益肾祛风方与坎地沙坦均能显著降低SHR大鼠血压(P<0.05);Masson’s trichrome染色结果:WKY组肾脏组织未见病理损伤,SHR组大鼠肾脏组织出现较大面积纤维化。与SHR组相比,QYQ治疗组与坎地沙坦治疗组肾脏组织纤维化面积均显著降低(P<0.05);生化检测结果提示:与WKY组相比,SHR组血清中尿酸、尿素含量显著升高(P<0.05)。与SHR相比较,QYQ治疗组血清尿酸含量显著降低(P<0.05)。Real-time PCR结果:与WKY组相比,SHR组肾脏组织氧化应激相关基因mRNA表达水平显著升高(P<0.05),IL-23,TNF-α及TGF-β1等炎症因子相关基因的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),IL-10基因的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),胶原相关基因的mRNA表达水平显著上升(P<0.05)。与SHR组相比,QYQ组肾脏组织氧化应激相关基因mRNA表达水平显著降低(P<0.05),IL-23,TNF-α等炎症因子相关基因的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),IL-10的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),Col5a2及α-SMA基因的mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论:清肝益肾祛风方能显著降低SHR大鼠血压、显著减轻SHR大鼠肾脏组织纤维化,具有降压、抗高血压肾损伤的作用,其作用机制可能与减轻肾脏组织氧化应激反应、炎症反应及减少肾组织胶原纤维合成相关。

清肝益肾祛风复方对高血压肠道菌群失调的干预效应研究

目的探讨清肝益肾祛风复方对高血压肠道菌群失调的干预效应及可能机制。方法将12只5周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)随机分为模型组及清肝益肾祛风复方组各6只,以6只同周龄WKY雄性大鼠为正常组。从6周龄开始,清肝益肾祛风复方组给予清肝益肾祛风复方浓缩液灌胃,模型组和正常组给予等体积纯净水灌胃,均1次/d,持续至20周龄。采集各组大鼠粪便,进行粪便16s rDNA测序及短链脂肪酸气相色谱分析。结果模型组大鼠粪便16s rDNA测序中Ace指数、Chao指数、Shannon指数及双歧杆菌目、双歧杆菌属相对丰度均显著低于正常组(P均<0.05),清肝益肾祛风复方组以上指标均显著高于模型组(P均<0.05);模型组变形菌门及变形菌纲相对丰度均显著高于正常组(P均<0.05),清肝益肾祛风复方组均显著低于模型组(P均<0.05)。模型组大鼠粪便中乙酸、丙酸、异丁酸相对水平均显著低于正常组(P均<0.05),丁酸、戊酸、异戊酸相对水平与正常组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);清肝益肾祛风复方组大鼠粪便中乙酸、丁酸相对水平均显著高于模型组(P均<0.05),丙酸、异丁酸、戊酸、异戊酸相对水平与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论高血压大鼠存在肠道菌群失调,清肝益肾祛风复方可促进高血压大鼠肠道双歧杆菌的生长,下调变形菌门菌群的丰度及促进肠道中短链脂肪酸乙酸和丁酸的产生,从而改善肠道菌群失调,维持肠道内稳态。

清肝益肾祛风复方对自发性高血压大鼠血压及胸腺的干预作用研究

目的:研究清肝益肾祛风复方对自发性高血压大鼠(SHR)血压治疗作用及胸腺的保护作用,初步探讨清肝益肾祛风复方治疗高血压的相关机制,为高血压病症的治疗提供参考。方法:采用SHR大鼠模型作为实验模型,以Wistar京都种大鼠(WKY)作为正常对照,使用清肝益肾祛风复方灌胃,并以坎地沙坦酯片作为药物对照,使用无创血压计监测血压变化情况,测量大鼠胸腺指数,通过HE染色观察胸腺形态学变化,使用图像分析软件测量计算胸腺髓质及皮质面积。结果:与WKY正常组对比,SHR大鼠在6周龄时血压明显升高,从6至20周龄收缩压均显著高于WKY大鼠(p<0.01),清肝益肾祛风复方能够显著降低SHR大鼠血压水平(p<0.01);随着周龄的增加各组大鼠的胸腺逐渐萎缩,胸腺重量减轻,而清肝益肾祛风复方在8周龄时能够增加胸腺指数,明显高于SHR组和WKY组(p<0.01);与WKY大鼠对比,SHR大鼠胸腺萎缩程度更快,可见其皮质变薄,髓质面积减少以及髓质边界模糊,而清肝益肾祛风复方在8周龄时显著增加了胸腺的皮质面积及总面积,高于SHR模型组大鼠(p<0.01)。结论:清肝益肾祛风复方具有显著的降压效果,同时在一定高血压程度或时间范围内具有保护胸腺的作用。