滋肾清肝降糖方对2型糖尿病大鼠蛋白酪氨酸磷酸酶1B及氧化应激的影响

目的:研究滋肾清肝降糖方(ZQJC)对2型糖尿病(T2DM)大鼠糖代谢、蛋白酪氨酸磷酸1B(PTP1B)表达及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和游离脂肪酸(FFA)的影响。方法:70只雄性SD大鼠随机抽取10只大鼠为正常组,其余大鼠采用高脂饲料喂养联合ip 30 mg·kg-1链脲佐菌素(STZ)的方法造T2DM模型,分为模型组、二甲双胍组(Met,0.14 g·kg-1·d-1,ig)、滋肾清肝降糖方低剂量组(0.9 g·kg-1·d-1,ig)、滋肾清肝降糖方中剂量组(1.8 g·kg-1·d-1,ig)及滋肾清肝降糖方高剂量组(3.6 g·kg-1·d-1,ig)。检测药物干预2,4周后各组大鼠空腹血糖(FBG)以及4周后各组大鼠血清中SOD,MDA,FFA的水平及肝细胞匀浆中PTP1B蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组的FBG均升高(P<0.01),PTP1B在肝中的表达增加(P<0.01);与模型组比较,ZQJC各剂量组可显著降低大鼠血清FBG,FFA和MDA的含量(P<0.01,P<0.05),升高血清SOD的活性(P<0.05),ZQJC可降低PTP1B在肝中的表达。结论:滋肾清肝降糖方对2型糖尿病大鼠有调节糖代谢的作用,抑制PTP1B表达及氧化应激反应可能为其作用机制之一。

左归降糖清肝方对小鼠糖尿病合并脂肪肝脂代谢相关基因mRNA表达的影响

目的探讨以滋阴益气、清热利湿、化痰消瘀组方的左归降糖清肝方对高脂饮食2型糖尿病(T2DM)转基因MKR小鼠脂肪肝发生中脂代谢相关基因mRNA表达的影响。方法 30只MKR小鼠随机分为MKR组、MKR高脂组和左归降糖清肝方组,左归降糖清肝方干预治疗高脂饮食诱发脂肪肝的MKR鼠4 w;观察各组小鼠肝脏形态,RT-PCR检测小鼠肝脏脂代谢相关基因mRNA表达变化。结果①MKR高脂组较MKR组小鼠肝脏乙酰辅酶A羧化酶(ACC-α)、脂肪酸合酶(FAS)和内质网甘露糖苷酶样蛋白1(EDEM1)的mRNA表达增加,apoB100 mRNA表达降低;②左归降糖清肝方降低高脂饮食MKR小鼠肝脏ACC-α、FAS和EDEM1的mRNA表达,增加apoB100 mRNA的表达。结论左归降糖清肝方能通过调节肝脏脂代谢相关基因mRNA表达,缓解肝脏脂肪性变。

左归降糖清肝方含药血清对脂肪酸孵育的HepG2细胞脂肪变性的影响

目的探讨左归降糖清肝方含药血清对脂肪酸孵育的人肝细胞株(Hep G2)细胞内甘油三酯(TG)含量的影响。方法用混合脂肪酸孵育的Hep G 2细胞建立细胞脂肪变性模型;将实验分为正常组,模型组,5%、10%、15%含药血清组,油红O染色法检测细胞内脂质沉积,同时定量检测细胞内TG含量。结果 0.5 mmol/L混合脂肪酸孵育Hep G2细胞24 h,可诱导细胞内TG大量沉积,而10%、15%左归降糖清肝方含药血清可抑制脂肪酸这一效应,使细胞内TG含量明显下降(P<0.01)。结论左归降糖清肝方含药血清可改善脂肪酸诱导的Hep G2细胞脂肪变性。

左归降糖清肝方对糖尿病性脂肪肝小鼠PGC-1α和DNMT3A表达的影响

目的探讨左归降糖清肝方对高脂饮食2型糖尿病转基因MKR鼠脂肪肝发生中过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferation-activated receptor-γ-coactivator 1α,PGC-1α)和DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)表达的影响。方法24只MKR鼠随机分为对照组、高脂模型组和左归降糖清肝方(中药方)组;高脂模型组和中药方组均以高脂饲料喂养8周,对照组以基础饲料喂养;中药方组高脂饲料喂养4周后,以中药汤剂灌胃干预治疗4周,其他组灌胃等量的蒸馏水。采用电化学法检测空腹血糖;试剂盒测定肝组织甘油三酯(triglyceride,TG)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量;HE染色观察肝组织形态结构及病理变化;qRT-PCR检测小鼠肝组织PGC-1α、线粒体转录因子A(mitochondrial transcriptionfactor A,TFAM)、核呼吸因子-1(nuclear respiratory factor 1,NRF1)和DNMT3A mRNA表达;Western blot和免疫组织化学检测PGC-1α和DNMT3A蛋白表达。结果高脂饮食诱发MKR鼠形成糖尿病性脂肪肝,肝细胞有大小不一的脂滴,呈脂肪性变;与对照组比较,高脂模型组小鼠血糖、肝指数和肝组织TG和FFA含量显著上升(P<0.01),肝脏PGC-1α、NRF1和TFAM的mRNA及PGC-1α蛋白表达显著下降(P<0.01),而DNMT3A mRNA和蛋白表达均显著上升(P<0.01)。与高脂模型组比较,左归降糖清肝方降低了高脂饮食MKR鼠血糖、肝指数和肝组织TG和FFA含量(P<0.01),上调了肝脏PGC-1α、NRF1和TFAM的mRNA表达,以及PGC-1α蛋白表达(P<0.01),下调了DNMT3A的mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论左归降糖清肝方通过调节肝脏PGC-1α及其通路相关基因表达,缓解糖尿病性脂肪肝小鼠肝脏脂肪性变,其机制可能通过抑制DNA甲基转移酶3A表达,减少PGC-1αDNA的甲基化相关。

左归降糖清肝方对db/db小鼠2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病脂质代谢的影响

基于INSR/AMPK/SREBP⁃2信号通路,观察左归降糖清肝方对db/db小鼠2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)合并非酒精性脂肪肝病(non⁃alcoholic fatty liver disease,NAFLD)脂质代谢的影响,探讨其治疗T2DM合并NAFLD的作用机制。随机将24只db/db小鼠分为4组:模型组,阳性药物组,左归降糖清肝方低、高剂量组。采用6只C57小鼠作为空白组。左归降糖清肝方高、低剂量组分别予左归降糖清肝方15、7.5 g·kg^(-1)灌胃,阳性药物组予二甲双胍0.067 g·kg^(-1)灌胃,空白组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续6周。灌胃结束后,检测小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),进行口服葡萄糖耐量实验以及血脂、肝功能水平,肝组织病理学分析脂质蓄积情况。Western blot检测胰岛素受体(insulin receptor,INSR)、AMP依赖的蛋白激酶[adenosine 5′⁃monophosphate(AMP)⁃activated protein kinase,AMPK]、p⁃AMPK、甾醇调节元件结合蛋白2(sterol⁃regulatory element⁃binding protein 2,SREBP⁃2)蛋白表达。结果显示,与模型组相比,经左归降糖清肝方治疗的小鼠体质量、肝重系数、空腹血糖、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)和低密度脂蛋白(low⁃density lipopro⁃tein,LDL)以及肝功能水平降低。肝组织病理学显示,与模型组相比,经左归降糖清肝方治疗的小鼠肝组织脂滴空泡明显减少、紫红色糖原颗粒明显增加。Western blot检测结果表明,与空白组比较,模型组INSR、p⁃AMPK/AMPK蛋白表达水平均显著下调,SREBP⁃2蛋白表达水平均显著上调。与模型组比较,左归降糖清肝方高剂量组INSR、p⁃AMPK/AMPK蛋白表达水平均显著上调,SREBP⁃2蛋白表达水平显著下调;左归降糖清肝方低剂量组INSR、p⁃AMPK/AMPK蛋白表达水平有上调趋势,SREBP⁃2蛋白表达水平有下调趋势,但差异无统计学意义。上述研究表明,左归降糖清肝方可能通过激活INSR/AMPK/SREBP⁃2信号通路,改善db/db小鼠胰岛素抵抗和脂质代谢。

左归降糖清肝方对MKR鼠2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝损伤的影响

目的探讨左归降糖清肝方对2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病MKR鼠肝组织FOXO1、FASL表达的影响,进一步证实左归降糖清肝方治疗糖尿病非酒精性脂肪肝病变的科学依据。方法选取8周龄高脂饲养的MKR小鼠40只,雌雄各半,随机分为模型组(Model组)、左归降糖清肝方低剂量组(ZGJTQGF-L组:左归降糖清肝方7.4 g·kg^(-1))、左归降糖清肝方高剂量组(ZGJTQGF-H组:左归降糖清肝方14.8 g·kg^(-1))、二甲双胍组(Met组:二甲双胍67×10^(-3)g·kg^(-1)),每组10只,另设10只FVB小鼠作为正常组(Control组),予普通饲料喂养。药物干预治疗28 d后,检测空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),HE染色及电镜观察肝组织形态结构及病理变化,Western Blot检测肝组织FOXO1、FASL的蛋白表达水平,PCR定量检测肝组织FASL、FOXO1的mRNA表达含量。结果与正常组比较,模型组FBG、ALT、AST、TG、TC显著升高;与正常组比较,模型组FASL、FOXO1蛋白表达量显著升高,FASL mRNA表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,中药组与西药组血糖显著降低(P<0.05);中药组与西药组之间差异无统计学意义(P>0.05),中药组与西药组ALT、AST显著降低(P<0.05);中药组高、低剂量之间差异无统计学意义(P>0.05),中药组与西药组TG、TC显著降低(P<0.05),中药组与西药组FASL、FOXO1蛋白表达量显著降低(P<0.01),中药组与西药组FASL、FOXO1的mRNA表达量显著降低(P<0.01),中药组与西药组之间FOXO1 mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果:与正常组比较,模型组肝细胞弥漫性脂肪变性,肝组织纤维化变化;与模型组比较,中药组与西药组均未出现明显的脂肪空泡现象,肿胀和纤维化的程度降低。电镜结果:与正常组比较,模型组肝细胞内积有很多脂肪,溶酶体被大量的脂肪颗粒包围;与模型组比较,西药组及中药组溶酶体外围均有少量或无脂肪颗粒,脂肪堆积显著减少。结论左归降糖清肝方通过下调FOXO1蛋白,降低FASL的蛋白表达,肝细胞凋亡率减少,延缓肝损伤,从而起到保护肝脏,治疗T2DM合并NAFLD的作用。

左归降糖清肝方通过调控FoxO1/MTP/APOB信号通路改善2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝糖脂代谢

旨在探讨左归降糖清肝方对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)合并非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)糖脂代谢的影响及作用机制。以MKR小鼠(T2DM小鼠)为研究对象,采用高脂饮食诱导NAFLD,建立T2DM合并NAFLD模型,随机将40只小鼠分为模型组,二甲双胍组(0.067 g·kg^(-1)),左归降糖清肝方高、低剂量组(29.64、14.82 g·kg^(-1)),每组10只,以同龄FVB小鼠作为正常组。除正常组和模型组外,其他各组连续灌胃给药4周后采集血清和肝组织标本,检测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting lisulin,FINS)水平;采用GPO-PAP单试剂微板法检测总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)水平;酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测极低密度脂蛋白(very low-density lipoprotein,VLDL)水平;赖式微板法检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和油红O染色观察肝脏病理学形态变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏中叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)、微粒体甘油三酯转移蛋白(microsomal triglyceride transfer protein,MTP)和载脂蛋白B(apolipoproteins B,APOB)的基因和蛋白表达情况。结果显示,高剂量左归降糖清肝方能显著降低T2DM合并NAFLD小鼠的FBG、FINS水平(P<0.05,P<0.01),改善葡萄糖耐受和胰岛素抵抗(P<0.05,P<0.01);并能缓解高脂饮食导致的肝脏损伤,表现在改善T2DM合并NAFLD小鼠肝脏脂肪变性程度,显著降低血清中TC、TG、LDL、VLDL、ALT及AST水平(P<0.05,P<0.01);同时研究发现,高剂量左归降糖清肝方干预后肝脏中FoxO1、MTP和APOB的基因和蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01)。上述研究表明,左归降糖清肝方能有效改善T2DM合并NAFLD的糖脂代谢,其机制可能与调控FoxO1/MTP/APOB信号通路密切相关。

左归降糖清肝方通过改善肠道菌群稳态促进2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病小鼠肠黏膜屏障的修复

研究左归降糖清肝方对高脂饮食诱导的2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的肠道菌群稳态调节及肠黏膜屏障的修复作用。以MKR转基因小鼠(T2DM小鼠)为研究对象,使用高脂饮食(HFD)来诱导NAFLD,然后用左归降糖清肝方(7.5、15 g·kg^(-1))、二甲双胍(0.067 g·kg^(-1))对小鼠进行8周的治疗。取血清进行肝功能、甘油三酯的检测分析;肝脏组织行HE、Masson染色,肠组织进行HE、AB-PAS染色;利用16S rRNA测序观察各组小鼠肠道菌群的变化;采用免疫荧光、PCR法检测小鼠肠道黏膜屏障关键蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1及其基因(mRNA)的表达水平。结果显示,左归降糖清肝方可改善T2DM合并NAFLD小鼠体质量,降低肝脏指数,下调肝功能及血脂异常的血清生物标志物ALT、AST、TG,增加胰岛素敏感性,并改善葡萄糖耐受的情况。16S rRNA测序结果表明,左归降糖清肝方的治疗改变了肠道微生物群的组成和丰度,增加了Muribaculaceae、Lactobacillaceae、Lactobacillus、Akkermansia、Bacteroidota的相对丰度,降低了Lachnospiraceae、Firmicutes、Desulfobacterota、Proteobacteria、Desulfovibrionaceae的相对丰度。肠黏膜病理分析显示左归降糖清肝方可增加紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的表达水平,并促进肠道黏膜的修复,保护肠道绒毛,增加肠黏膜绒毛的高度及杯状细胞的数量。左归降糖清肝方可通过调节肠道微生物群稳态、促进肠道黏膜屏障的修复改善T2DM合并NAFLD诱导的肠黏膜损伤。

左归降糖清肝方对2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病MKR小鼠糖脂代谢的影响

目的:探讨左归降糖清肝方改善2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体功能缺失(MKR)小鼠糖脂代谢的作用机制。方法:以MKR小鼠为研究对象,高脂饲料喂养8周诱导形成NAFLD,随机分为模型组、二甲双胍组(0.067 g·kg^(-1))、左归降糖清肝方高、低剂量组(14.8、7.4 g·kg^(-1)),同龄FVB小鼠10只作为正常组。分别药物治疗8周后,予以糖耐量测试(OGTT),取血清检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC),称取小鼠肝脏湿重,取肝组织进行苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色观察组织病理形态变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织叉头框蛋白O1(FoxO1)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)、载脂蛋白C3(ApoC-Ⅲ)的mRNA表达及其蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组小鼠空腹血糖、肝脏指数、血清TG、血清TC、OGTT水平显著上升(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍组及左归降糖清肝方组小鼠空腹血糖、肝脏指数显著下降(P<0.01),左归降糖清肝方高剂量组血清的TG、TC水平均明显下降(P<0.05,P<0.01),二甲双胍组及左归降糖清肝方高剂量组可以降低OGTT水平(P<0.05);在组织病理上,与正常组比较,模型组小鼠可见肝组织脂滴及肝细胞内空泡减少,体积变大;与模型组比较,左归降糖清肝方组和二甲双胍组可见肝组织脂滴减少,肝细胞内空泡减少,体积变小;在分子层面,与正常组比较,模型组小鼠肝组织FoxO1、PEPCK、G6Pase、ApoC-Ⅲ的mRNA水平显著上调(P<0.01),FoxO1、PEPCK、G6Pase、ApoC-Ⅲ的蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型组比较,左归降糖清肝方组FoxO1、PEPCK、G6Pase、ApoC-Ⅲ的mRNA水平显著下调(P<0.01),FoxO1、PEPCK、G6Pase、ApoC-Ⅲ的蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:左归降糖清肝方能改善T2DM合并NAFLD糖脂代谢并能修复肝脏病理损伤,可能是通过调控肝组织FoxO1、PEPCK、G6Pase、ApoC-Ⅲ相关蛋白的表达,达到调脂、降糖及延缓肝脏脂肪病变的作用。

中西医结合治疗2型糖尿病临床观察

目的:观察中西医结合治疗2型糖尿病的疗效。方法:将83例2型糖尿病患者随机分为两组,其中治疗组43例,对照组40例。两组均采用糖尿病强化治疗方案,口服以美吡达为主的降糖药,治疗组在此基础上加服中药清肝降糖方。结果:治疗组控制理想21例,控制良好19例,控制差3例,总有效率93.0%;对照组控制理想12例,控制良好19例,控制差9例,总有效率77.5%。两组疗效比较,总有效率无显著性差异(P>0.05),但治疗组控制理想率优于对照组(P<0.05)。治疗组美吡达用量少于对照组(P<0.05)。两组治疗后空腹血糖、餐后2h血糖、HbAlc、HOMA-IR均明显降低(均为P<0.01),治疗后胰岛素抵抗指数治疗组低于对照组(P<0.05)。结论:采用中医清肝疏泄法结合西医常规治疗2型糖尿病,能明显改善患者的临床症状,更有效地改善胰岛素抵抗状态,增加胰岛素的敏感性,并在一定程度上可减少口服降糖药的用量,值得临床推广。

滋阴益气活血解毒法治疗32例2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝的临床观察

目的:观察以滋阴益气活血解毒立法的左归降糖清肝方对2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者的临床疗效。方法:将64例患者随机分为对照组和治疗组,各32例,均给予基础治疗。对照组在基础治疗的同时服用肝旨清胶囊,治疗组在基础治疗的同时给予左归降糖清肝方治疗,两组疗程均为5个月,评定治疗后的临床疗效。结果:两组患者治疗前各项检查指标比较,无统计学差异;治疗后,两组空腹血糖、餐后2h血糖、血脂、肝功能和脂肪肝等级与治疗前比较,差异具有统计学意义(P<0.05);除空腹血糖外,治疗组各项检查指标及总体疗效优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:滋阴益气活血解毒立法的左归降糖清肝方对T2DM合并NAFLD患者有良好临床疗效。