清肺通络开玄法对呼吸道合胞病毒诱发幼龄大鼠肺炎性损伤肺组织HMGB1/RAGE轴的影响

目的探讨清肺通络开玄法对呼吸道合胞病毒(RSV)诱发幼龄大鼠肺炎性损伤肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)轴的影响。方法将24只3周龄雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、清肺通络开玄法组和清肺通络组,每组6只。除正常组外,其余各组采用RSV滴鼻法复制大鼠肺炎性损伤模型。第3天滴鼻接种病毒后,清肺通络开玄法组给予黄芩、大黄和大蒜贴膏贴敷于背部脊柱两侧,清肺通络组给予黄芩和大黄贴膏贴敷于背部脊柱两侧,1次/d,连续5 d;正常组和模型组不给予干预。干预5 d后,HE染色观察大鼠肺组织病理学改变,荧光定量PCR法检测肺组织中HMGB1和RAGE mRNA表达情况,免疫组化法检测肺组织中HMGB1和RAGE蛋白表达情况,酶联免疫吸附法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果干预5 d后,正常组大鼠未见肺组织病理损伤;模型组大鼠见明显肺炎性损伤;清肺通络开玄法组及清肺通络组大鼠肺炎性损伤程度较模型组轻,清肺通络开玄法组损伤更轻。模型组大鼠肺组织中HMGB1和RAGE mRNA相对表达量和蛋白表达平均光密度值均明显高于正常组(P均<0.05);清肺通络开玄法组及清肺通络组大鼠肺组织中RAGE mRNA相对表达量和HMGB1蛋白表达平均光密度值均明显低于模型组(P均<0.05),且清肺通络开玄法组RAGE mRNA相对表达量和HMGB1蛋白表达平均光密度值均明显低于清肺通络组(P均<0.05);清肺通络开玄法组大鼠肺组织中HMGB1 mRNA相对表达量和RAGE蛋白表达平均光密度值均明显低于模型组(P均<0.05),而清肺通络组HMGB1 mRNA相对表达量和RAGE蛋白表达平均光密度值与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。模型组大鼠血清TNF-α、IL-6水平均明显高于正常组(P均<0.05);清肺通络开玄法组大鼠血清TNF-α、IL-6水平及清肺通络组大鼠血清IL-6水平均明显低于模型组(P均<0.05),且清肺通络开玄法组血清IL-6水平明显低于清肺通络组(P<0.05)。结论清肺通络开玄法能调控HMGB1/RAGE轴,抑制TNF-α、IL-6释放,减轻肺炎性组织损伤。

清肺通络开玄法对RSV诱发幼龄大鼠肺损伤肺组织ERK1/2信号通路的影响

目的探讨清肺通络开玄法对呼吸道合胞病毒(RSV)诱发幼龄大鼠肺炎肺组织ERK1/2信号通路的影响。方法通过10(TCID50)RSV病毒液滴鼻建立RSV肺炎模型。实验设置对照组,模型组,清肺通络开玄法组,清肺通络法组,共四组。清肺通络开玄法组给予黄芩、大黄和大蒜贴膏干预,清肺通络法组给予黄芩和大黄贴膏进行干预。于感染后第5日取材用蛋白免疫印迹法(Western blot)检验ERK1/2信号通路相关蛋白磷酸化表达情况,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-8(IL-8)水平。结果与对照组比较,模型组RSV大量复制,肺组织切片观察到典型的炎性损伤,ERK1/2磷酸化蛋白的表达水平显著提高(P<0.05),同时细胞上清中释放大量的炎症因子IL-6、IL-8(P<0.05);与模型组相比,清肺通络开玄法可显著下调ERK1/2磷酸化蛋白的表达(P<0.05),并显著降低细胞上清中炎症因子IL-6、IL-8的表达水平(P<0.05);同时清肺通络开玄法比清肺通络法对于ERK1/2磷酸化蛋白的表达(P<0.05)与细胞上清中炎症因子IL-6的的表达水平(P<0.05)的下调更为显著。结论清肺通络开玄法与清肺通络法皆能够减轻RSV感染所致的肺的炎性损伤,其机制可能与下调ERK1/2磷酸化蛋白水平及降低炎症因子的表达有关,清肺通络开玄法更优。