丹参多酚酸盐对单核细胞分化为泡沫细胞过程中清道夫受体A表达的干预作用

使用佛波醇酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,将其分为对照组、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组、ox-LDL+丹参多酚酸盐组(低、中、高浓度组),应用流式细胞仪测定巨噬细胞SR-A表达水平。结果镜下观察到单核细胞株THP-1在PMA诱导下转变为泡沫细胞;ox-LDL处理组SR-A蛋白表达水平较对照组明显增加(P<0.01);丹参多酚酸盐组较其他两组均明显减弱(P均<0.01),且随浓度增加SR-A表达明显减弱(P均<0.01)。认为ox-LDL能够明显刺激巨噬细胞表达SR-A,丹参多酚酸盐能够下调ox-LDL刺激的巨噬细胞表达SR-A,可能是其抗动脉粥样硬化斑块形成的机制之一。

清道夫受体AⅠ/Ⅱ对小鼠脂质代谢的影响

目的 :鉴定清道夫受体AⅠ /Ⅱ (SR -AⅠ /Ⅱ )基因敲除小鼠 ,观察SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除对小鼠脂质代谢的影响。方法 :应用SR -AⅠ /ⅡcDNA基因部分序列作探针 ,用Southernblot方法检测SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除小鼠及其同系对照小鼠靶基因敲除结果 ,用生化分析仪检测血脂、载脂蛋白和血肌酐 ,观察SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除和未敲除小鼠分别在普通饮食和高脂饮食情况下脂质代谢的改变情况。结果 :SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除后小鼠的低密度脂蛋白 (LDL)、体重较正常对照小鼠明显增高 (P <0 0 5 ) ,出现了脂质代谢严重失衡 ,在高脂饮食情况下这种失衡更为明显 ,体重、LDL的升高幅度均大于对照组 (P <0 0 1)。结论 :SR -AⅠ /Ⅱ参与对组织和循环中的LDL的摄取和清除 ,有利于保持机体脂质代谢的正常调节。小鼠SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除后脂质代谢发生了明显紊乱 ,机体对脂质代谢的调节功能减弱。

载脂蛋白A-I模拟肽D-4F对巨噬细胞源性泡沫细胞清道夫受体A1的抑制作用

目的:研究载脂蛋白A-I模拟肽D-4F对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,oxLDL)所诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞清道夫受体A1(scavenger receptor A1,SR-A1)的抑制作用及其机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予不同浓度的D-4F(12.5、25和50 mg/L)、紊乱模拟肽sD-4F(50 mmol/L)处理1h或者5 mmol/L内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)抑制剂4-苯丁酸处理30 min后,再加入ox-LDL(100 mg/L)继续培养12 h。另外培养巨噬细胞给予50 mg/L D-4F或sD-4F处理1 h,再加入2 mg/L ERS诱导剂衣霉素(tunicamycin,TM)处理4 h。MTT法检测细胞活力;试剂盒检测细胞内总胆固醇含量;分别采用免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)技术检测SR-A1和ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)蛋白和mRNA表达变化;采用多功能酶标仪检测DiI-ox-LDL摄取情况。结果:D-4F明显减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞损伤和细胞内的胆固醇蓄积。ox-LDL可显著上调SR-A1和GRP78表达,而D-4F对上述变化具有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。D-4F显著抑制TM所诱导的SR-A1和GRP78蛋白水平以及巨噬细胞对ox-LDL的摄取。结论:D-4F可通过抑制SR-A1表达减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞内胆固醇蓄积和细胞损伤,其机制可能与抑制GRP78介导的ERS信号途径有关。

肝组织清道夫受体A在急性重症胆管炎时的表达与内毒素性肝损伤的关系

目的:研究急性重症型胆管炎(ACST)时大鼠内毒素性肝损伤与肝组织中清道夫受体A(SR-A)表达水平的关系.方法:Wistar大鼠随机分为2组,第1组(急性胆道感染组,AOC组),胆总管予以结扎并注入大肠杆菌O111B4建立ACST动物模型,第2组(胆总管结扎组,BDL组),结扎胆总管并注射等量生理盐水.于术后0、4、8、16、24h分别采用Western blot和RT-PCR检测肝组织中SR-A蛋白和基因表达水平;以鲎试验和ELISA测定血浆内毒素和白介素-6(IL-6);光镜观察肝组织病理变化并测定血浆ALT、TB含量.结果:在ACST时随着病程的延长、血浆内毒素浓度逐渐升高(0-24h:0.058±0.009,0.207±0.024,0.433±0.049,0.645±0.077,0.784±0.097,P<0.01),血浆IL-6、ALT和TB含量明显增加(均P<0.01),肝功能减损,同时肝细胞变性、坏死等病理改变逐渐加重,而AOC组SR-A在术后4h,表达已开始下降(P<0.01),随着病程延长其表达逐渐下降,至24h与BDL比较有明显显著性差异(蛋白:0.156±0.014vs0.809±0.107,P<0.01;mRNA:0.138±0.019vs0.578±0.068,P<0.01).结论:ACST时,内毒素性肝损伤与肝组织SR-A表达水平的进行性下调有关.随着枯否细胞清除内毒素的防御能力下降,肝组织内毒素性损伤进行性加重.

洛伐他汀对THP-1细胞分化成泡沫细胞过程中清道夫受体A表达及MCP-1、TNF-α水平的影响

目的观察洛伐他汀对THP-1细胞株分化成泡沫细胞过程中清道夫受体A(SRA)表达及MCP-1和TNF-α的水平的影响。方法培养THP-1细胞,佛波脂(PAM)使之巨噬化,氧化型低密度脂蛋白使巨噬细胞形成泡沫细胞,将其分为巨噬细胞组(对照组)、泡沫细胞组、泡沫细胞+洛伐他汀组,各组细胞孵育24 h,用ELISA法检测各组细胞培养液中MCP-1、TNF-α水平。将SRA特异性配体D iI-Ac-LDL与细胞孵育6 h,用荧光显微镜观察各组细胞SRA的表达。结果 THP-1细胞经佛波脂和氧化型低密度脂蛋白孵育后,有大量泡沫细胞形成。与对照组相比,泡沫细胞组,SRA蛋白活性及MCP-1、TNF-α水平明显升高(P<0.05),洛伐他汀干预后,其水平较泡沫细胞组显著降低(P<0.05)。结论 SRA、MCP-1及TNF-α在THP-1细胞分化成泡沫细胞过程中发挥着重要作用;洛伐他汀可抑制SRA、MCP-1及TNF-α的表达,这可能为其抗动脉粥样硬化的机制之一。

小凹蛋白在清道夫受体AI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用

目的:研究小凹蛋白在清道夫受体AI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用.方法:用75mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)与巨噬细胞共同孵育不同时间.清道夫受体AI反义寡核苷酸、P38阻断剂SB202190预处理巨噬细胞,然后给予75mg/Lox-LDL处理24h.Western blot法检测清道夫受体AI和小凹蛋白的表达.高效液相色谱法检测细胞内胆固醇的含量,油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况.结果:经75mg/Lox-LDL处理巨噬细胞不同时间,ox-LDL呈时间依赖性促进清道夫受体AI的表达,而呈时间依赖性抑制小凹蛋白的表达.用清道夫受体AI反义寡核苷酸抑制清道夫受体AI的表达,小凹蛋白的表达明显增加.该组细胞内胆固醇含量为(119±7)mg/g,与ox-LDL处理组比较显著减少(P<0.01),细胞内脂滴亦明显减少.P38MAPK抑制剂SB202190能明显抑制清道夫受体AI的表达,而增加小凹蛋白的表达.SB202190处理组细胞内胆固醇含量为(173±14)mg/g,与ox-LDL处理组比较显著减少(P<0.01),细胞内脂滴亦明显减少.结论:小凹蛋白与清道夫受体AI协同参与了ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化的形成过程.

中药粉防己碱对高脂饮食兔脂代谢和主动脉壁血管细胞清道夫受体A mRNA表达的影响

目的观察中药粉防己碱对高脂饮食兔脂质代谢和主动脉壁血管细胞清道夫受体A(SR A)表达的影响,进一步探讨粉防己碱抗动脉粥样硬化的机制。方法将18只雄性日本大耳白兔随机分为正常对照组(C组)、高脂模型组(CH组)和粉防己碱组(Tet组)。喂养12周后处死动物,常规生化检测血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(HDL C);取胸主动脉连续切片,常规苏木精伊红染色,脂质苏丹Ⅳ染色,对血管壁形态和脂质沉积定性观察;采用逆转录聚合酶链式反应对血管壁细胞SR AmRNA表达定量分析。结果CH和Tet组血脂水平显著高于C组(P<0.01),而CH组与Tet组比较差异无显著性意义(P>0.05);CH组血管壁脂质沉积明显高于C组和Tet组,C组和Tet组间无明显差别;各组均有SR AmRNA表达,CH组显著高于C组和Tet组(P<0.01),而C组与Tet组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论粉防己碱抗兔胸主动脉粥样硬化作用可能与其抑制SR A表达,减少血管壁脂质沉积有关,而与降脂作用无关。

FIZZ1对平滑肌细胞清道夫受体A表达的影响

背景FIZZ1是一个与炎症相关的有丝分裂因子,具有刺激肺动脉平滑肌增殖、收缩血管、促进血管新生等作用。我们曾经报道FIZZ1在动脉粥样硬化中的作用,但对其作用机制尚未进一步探讨。目的探讨FIZZ1对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的小鼠平滑肌细胞清道夫受体A(SR-A)表达的影响。方法用ox-LDL以及终浓度分别为3×10-6、9×10-6、2.7×10-5mmol/L的FIZZ1刺激培养的平滑肌细胞,激光共聚焦显微镜对SR-A表达进行定位,流式细胞术检测不同剂量的重组FIZZ1对ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达的影响。结果ox-LDL能诱导平滑肌细胞SR-A表达,SR-A表达主要位于细胞膜,重组FIZZ1能明显剂量相关地促进ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达(与对照组比较,P<0.01)。结论FIZZ1明显促进ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达,提示FIZZ1可能通过促进平滑肌细胞SR-A表达促进动脉粥样硬化进展。

阻断清道夫受体AⅠ对巨噬细胞源泡沫细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达的影响

为探讨巨噬细胞源泡沫细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制剂的表达及活性与清道夫受体AⅠ的关系 ,应用油红O染色、高效液相色谱法检测巨噬细胞的泡沫化 ,逆转录聚合酶链反应检测细胞清道夫受体AⅠ的表达 ,Westernblot、明胶酶谱法观测巨噬细胞泡沫化后阻断清道夫受体AⅠ对THP 1细胞基质金属蛋白酶 2、基质金属蛋白酶 9、组织型基质金属蛋白酶抑制剂 1及组织型基质金属蛋白酶抑制剂 2表达的影响。结果发现 ,THP 1细胞在佛波酯处理 2 4h后有清道夫受体AⅠ的表达 ,清道夫受体AⅠ反义寡核苷酸及其抗体能显著降低基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶 9的蛋白表达和活性 ,并增加组织型基质金属蛋白酶抑制剂 1和组织型基质金属蛋白酶抑制剂 2的表达。结果提示 ,阻断清道夫受体AⅠ有助于基质金属蛋白酶与组织型基质金属蛋白酶抑制剂的平衡维持 。

氧化型低密度脂蛋白对骨髓源性平滑肌样细胞小凹蛋白1表达的抑制作用及其与清道夫受体A的关系

目的建立骨髓间质干细胞(BMSC)分化的平滑肌细胞模型,探讨平滑肌源性泡沫细胞小凹蛋白1表达及其与清道夫受体A的关系。方法采用贴壁法从SD大鼠骨髓中分离BMSC,并诱导BMSC分化,80 mg/L ox-LDL处理BMSC分化的平滑肌细胞72 h,蛋白免疫印记法检测细胞清道夫受体SR-A、胆固醇逆转运蛋白ABCA1和小凹蛋白Caveolin-1的表达变化。结果 BMSC-SMC能大量蓄积胆固醇酯,形成泡沫细胞。经80 mg/L ox-LDL处理72 h后,BMSC-SMC中SR-A表达明显增加,ABCA1和caveolin-1显著减少。结论在ox-LDL作用下,骨髓细胞干细胞分化的平滑肌细胞能大量蓄积胆固醇酯,形成泡沫细胞,这一机制可能与细胞清道夫受体SR-A表达上调以及胆固醇逆转运蛋白ABCA1和小凹蛋白Caveolin-1表达下调相关。

β受体介导肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞清道夫受体AI与ABCA1基因表达的影响

目的探讨肾上腺素对THP-1源巨噬细胞ATP结合盒转运体A1与清道夫受体AI mRNA表达影响的β受体介导作用。方法分别用β1受体拮抗剂美托洛尔(10 nmol/L～100μmol/L)和β2受体拮抗剂丁氧胺(2.5nmol/L～25μmol/L)预处理细胞1 h,再加入终浓度为1μmol/L肾上腺素继续孵育24 h,检测受试基因的表达。结果1μmol/L的肾上腺素上调清道夫受体AI mRNA水平和下调ATP结合盒转运体A1 mRNA水平,与各自对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。而终浓度为1μmol/L肾上腺素分别与不同浓度的β肾上腺素能受体拮抗剂美托洛尔和丁氧胺联合作用时,随着美托洛尔和丁氧胺浓度加大,各组ATP结合盒转运体A1 mRNA的表达升高而清道夫受体AI mRNA的表达随浓度升高呈下降趋势,与1μmol/L肾上腺素组比较差异有统计学意义(P<0.05),且丁氧胺对肾上腺素的拮抗作用在2.5μmol/L达到平台期。结论肾上腺素可能通过β1和β2肾上腺素能受体介导从而上调THP-1源性巨噬细胞清道夫受体AI mRNA水平和下调ATP结合盒转运体A1 mRNA水平。

阿霉素肾病大鼠肾脏清道夫受体A基因的表达

目的:探讨阿霉素肾病(AN)大鼠肾脏清道夫受体A(SR-A)基因表达水平与脂质代谢及肾脏病理之间的关系。方法:采用一次性尾静脉注射阿霉素法制备AN大鼠模型,RT-PCR法检测大鼠肾脏SR-A基因表达水平。结果:与正常组比较,AN大鼠尿中蛋白排泄量明显增加(P<0.05),血清白蛋白和总蛋白水平降低(P<0.05),血脂水平升高(P<0.05),AN组大鼠肾脏SR-A基因表达水平(1.17±0.13)亦高于正常组(0.74±0.14)(P<0.05)。电镜下AN大鼠肾小球上皮细胞足突融合,内皮细胞增生,严重者肾小球基膜增厚,模糊不清,内皮细胞呈连拱状。结论:正常大鼠肾脏有低水平SR-A基因表达,AN大鼠肾脏SR-A过度表达与肾脏脂质代谢异常有关,也是造成肾脏病理改变的主要原因之一。

清道夫受体A基因敲除对小鼠肝脏代谢及胆囊结石形成的影响

目的探讨清道夫受体A(scavenger receptor class A,SRA)基因敲除对小鼠肝脏代谢及胆囊结石形成的影响。方法 SRAKO小鼠以及C57BL/6野生型小鼠分别给予成石饲料(lithogenic diet,LD)和普通饲料(Chow)喂养8周后,观察胆囊成石情况,并采集肝脏和胆囊组织。采用免疫荧光染色法测定小鼠肝脏巨噬细胞标记F4/80的表达,Western印迹法测定小鼠肝脏SRA表达,QT-PCR法检测肝脏脂质代谢相关基因及炎症因子的表达,胆固醇试剂盒测定胆囊和肝脏组织胆固醇含量。结果 LD喂养8周后,SRAKO小鼠和C57BL/6野生型小鼠成石率均为100%,而普通饲料喂养均不成石;LD喂养的小鼠肝脏脂质沉积增加,炎性细胞和巨噬细胞浸润增加;LD喂养的C57BL/6野生型小鼠肝脏SRA蛋白表达较普通饲料增高,胆固醇代谢相关基因ABCG5、ABCG8和炎症因子IL-1、TNF-α表达增加(P<0.05)。LD喂养的SRAKO组小鼠胆固醇代谢基因ABCG8、胆汁酸磷脂基因ABCB4和炎症因子TNF-α表达均增加(P<0.05);LD喂养的小鼠胆囊组织中胆固醇酯和游离胆固醇含量均较普通饲料增加(P<0.05)。结论敲除SRA基因不改变小鼠胆囊结石形成率,高胆固醇可能更易导致胆囊结石的形成。

清道夫受体A与动脉粥样硬化

清道夫受体A是一种细胞表面的糖蛋白,主要分布在巨噬细胞上,具有广泛的配体识别谱,最初是作为脂蛋白受体被发现的,可以内吞修饰的脂蛋白,促进动脉粥样硬化斑块的形成。近年研究发现,清道夫受体A还在介导巨噬细胞对内毒素清除及凋亡细胞的识别、细胞黏附以宿主防御等起重要作用。与对清道夫受体A的分子结构,表达调空和生物学功能等做一综述。

冠心康对高脂饮食兔脂代谢和主动脉壁血管细胞清道夫受体AmRNA表达的影响

目的:观察中药复方制剂(冠心康)对高脂饮食兔脂质代谢和主动脉壁血管细胞清道夫受体A(SR-A)表达的影响,进一步探讨复方制剂(冠心康)抗动脉粥样硬化的机制。方法:将18只雄性日本大耳白兔随机分为正常对照组(C组)、高脂模型组(CH组)和复方制剂(冠心康)组(GXK组)。喂养12周后处死动物,常规生化检测血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(HDL-C);取胸主动脉连续切片,常规苏木精2伊红染色,脂质苏丹Ⅳ染色,对血管壁形态和脂质沉积定性观察;采用逆转录聚合酶链式反应对血管壁细胞SR-AmRNA表达定量分析。结果:CH和GXK组血脂水平显著高于C组(P<0·01),而CH组与GXK组比较差异无显著性意义(P>0·05);CH组血管壁脂质沉积明显高于C组和GXK组,C组和GXK组间无明显差别;各组均有SR-AmRNA表达,CH组显著高于C组和GXK组(P<0·01),而C组与GXK组比较差异无显著性意义(P>0·05)。结论:复方制剂(冠心康)抗兔胸主动脉粥样硬化作用可能与其抑制SR-A表达,减少血管壁脂质沉积有关,而与降脂作用无关。

清道夫受体A在动脉粥样硬化中的作用

许多心脑血管疾病的主要病理基础是动脉粥样硬化。近年来的研究表明,清道夫受体在动脉粥样硬化的发病过程中起着重要的作用,且与动脉粥样硬化病变中泡沫细胞的形成有着密切的关系。清道夫受体包括很多种,本文主要是对清道夫受体A(SR-A)在动脉粥样硬化中的作用作一综述。

清道夫受体A的研究进展

清道夫受体A(SR-A)是一种跨膜糖蛋白受体,有三种亚型,表达于巨噬细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞,与之结合的配体主要有修饰化的脂蛋白(ac-LDL,ox-LDL等)、多聚核苷酸(Poly I和PolyG)、脂多糖、阴离子磷脂、磷壁酸、糖酐酯以及原核生物的细胞壁成分等。SR-A与配体结合后参与宿主的防御、吞噬凋亡细胞和促进细胞等多种生物学功能,并在动脉粥样硬化(As)的发生发展中发挥重要作用。本文综述了近年有关SR-A的结构、表达调控、主要生理功能以及与As关系的最新研究进展,为人们进一步认识SR-A提供参考资料。

清道夫受体A基因的表达与肠癌侵袭转移密切相关

目的:研究清道夫受体A(SR-A)在结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌侵袭、转移之间的关系。方法:采用实时荧光定量PCR法,检测SR-A基因在33例结直肠癌组织和相应切缘正常组织中的表达。结果:SR-A基因在结直肠癌组织中的表达明显高于正常切缘组织。SR-A基因的表达与结直肠癌患者的性别、肿瘤大小、浸润深度以及TNM分期有关(均P<0.05),而与患者的年龄、肠癌的部位、分化程度、淋巴结转移及病理组织学类型无关(均P>0.05)。结论:SR-A基因的高表达与结直肠癌的侵袭、转移明显相关。

肺炎衣原体通过上调清道夫受体A1诱导THP-1源性泡沫细胞形成

目的观察清道夫受体A1和CD36在肺炎衣原体诱导THP-1源性泡沫细胞形成中的作用。方法给予不同浓度的肺炎衣原体(1×105～1×106IFU)感染THP-1源性巨噬细胞0～72h。运用油红O染色观察细胞质内脂滴的变化,酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化。分别运用逆转录聚合酶链反应和Western-Blot检测清道夫受体A1和CD36的mRNA和蛋白表达。结果高浓度的肺炎衣原体(5×105和1×106IFU)感染负荷低密度脂蛋白的THP-1源性巨噬细胞48h后,细胞质内的脂滴明显增多,胆固醇酯占总胆固醇百分比明显增加(>50%)。在负荷低密度脂蛋白的THP-1源性巨噬细胞上,肺炎衣原体感染呈浓度和时间依赖性地上调道夫受体A1 mRNA和蛋白表达,但不影响CD36 mRNA和蛋白表达。结论清道夫受体A1表达上调是肺炎衣原体诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制之一,这可能为进一步阐明肺炎衣原体感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据。