双组分系统resE/resD基因缺失对单增李斯特菌抗渗透压应激能力及致病性的影响

【目的】构建单增李斯特菌双组分系统resE/resD基因缺失株,并探究其抗渗透压应激能力及致病性。【方法】利用同源重组方法构建单增李斯特菌双组分系统resE/resD基因缺失株,通过不同环境生长曲线比较分析单增李斯特菌野生株10403S与缺失株ΔresE/resD的生存性能差异;通过应激存活试验探究resE/resD基因缺失对单增李斯特菌抗渗透压能力的影响;通过对结肠癌细胞Caco-2及胃腺癌细胞MGC803进行细胞黏附、侵袭试验以及小鼠毒力试验,评估resE/resD基因缺失对单增李斯特菌细胞黏附与侵袭能力及小鼠致病性的影响。【结果】生长曲线结果显示,resE/resD基因缺失不影响单增李斯特菌正常生长,在5%NaCl条件下缺失株ΔresE/resD生长能力弱于野生株10403S,平台期抗渗透压应激能力显著降低(P<0.05)。应激存活试验结果表明,在10%NaCl条件下应激处理1 h后,缺失株ΔresE/resD存活率极显著低于野生株10403S(P<0.01)。Caco-2及MGC803细胞侵袭试验结果显示,缺失株ΔresE/resD对细胞黏附能力显著减弱(P<0.05),且细胞侵袭能力极显著降低(P<0.01)。小鼠毒力试验结果显示,缺失株ΔresE/resD小鼠脾脏与肝脏中细菌载量极显著或显著低于野生株10403S(P<0.01;P<0.05)。【结论】双组分系统resE/resD基因缺失不影响单增李斯特菌野生株10403S正常生长,但缺失株ΔresE/resD表现出抗渗透压应激能力下降,且减弱了单增李斯特菌对细胞黏附侵袭力和小鼠致病性。

微囊化对HepG2细胞渗透压调节基因表达影响及调控研究

探讨微囊微环境对HepG2细胞渗透压调节基因表达影响及抗渗透压物质干预效果。静电液滴法制备微囊化细胞,Real-time PCR法检测不同培养方式下钠/肌醇转运蛋白(SMIT)和牛磺酸转运蛋白(TAUT)基因表达;通过MTT法检测细胞活性、ELISA法检测白蛋白含量,比较牛磺酸和海藻糖干预后指标变化。结果表明,不同培养方式间SMIT表达无显著差异;微囊化细胞TAUT表达增高,是平面细胞4.3倍(P<0.01);添加1～1.5 mM牛磺酸后,囊内细胞活性较对照组增加约15%～30%,白蛋白水平增加15%(P<0.05);海藻糖虽在0.1 mM时使囊内细胞活性增加20%～30%(P<0.05),但对白蛋白分泌水平无显著影响。微囊内存在高渗应激因素诱导基因表达改变,牛磺酸和海藻糖能拮抗其对细胞的抑制作用。

压力应激影响烟曲霉致病力的研究进展

烟曲霉是环境中广泛存在的腐生真菌,是重要的机会致病菌。近年来随着免疫受损人群的增多,烟曲霉引起侵袭性曲霉病不断增加,在深部丝状真菌感染中居于首位。由于宿主体内环境与自然环境存在诸多差异,使得烟曲霉孢子适应体内环境条件是其能够生存并致病的前提。研究发现烟曲霉适应宿主环境的能力,如温度、氧化应激、渗透压、缺氧、营养缺乏等,与其致病力密切相关。对压力应激与致病力关系的研究有助于解析烟曲霉的致病机制,可为研发烟曲霉感染诊治的新途径提供理论基础。本文对烟曲霉的压力应激与其致病力的关系进行了综述。