肺炎支原体渗透压诱导蛋白C的原核表达、纯化及活性分析

肺炎支原体是最小的原核细胞型微生物,缺乏细胞壁,渗透压的变化对其产生重要的影响。肺炎支原体渗透压诱导蛋白C(OsmC)是针对渗透压的变化而产生的一种蛋白质。本文通过分析肺炎支原体OsmC蛋白的原核表达、纯化及活性,发现肺炎支原体OsmC蛋白通过降解过氧化氢从而产生抗氧化的作用,进而影响人体的免疫平衡,造成机体的损伤。本文为阐明肺炎支原体抗氧化作用奠定机制基础,为其治疗奠定理论基础。

肺炎支原体OsmC蛋白的原核表达及活性分析

目的表达肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)渗透压诱导蛋白C(OsmC)并测定其活性。方法在Mp中找出编码OsmC蛋白的基因,根据Mp OsmC基因序列设计特定引物,PCR扩增OsmC基因。利用EcoRI和XhoI对其进行双酶切,然后连接到表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-MpOsmC,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,采用镍柱亲和层析对重组OsmC蛋白进行纯化,利用氧化铁二甲酚橙试剂(FOX)测定OsmC蛋白的活性。结果肺炎支原体Mpn625基因编码OsmC蛋白。PCR扩增OsmC基因片段大小为426bp,连接到原核表达载体pET28a得到重组质粒pET28a-MpOsmC。重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达分子质量单位为19.4ku的重组Mp OsmC蛋白,与理论值相符。通过亲和层析,得到高纯度的目的蛋白。FOX试剂法测定Mp OsmC具有分解H_2O_2活性。结论重组Mp OsmC蛋白具有氧化酶活性,为探讨肺炎支原体的抗氧化机制提供了理论依据。