渗透性低温保护剂玻璃化转变临界降温速率的实验确定

从Boutron结晶动力学半经验公式出发 ,结合他人的修正结果 ,利用差示量热扫描仪 (DSC)的实验数据 ,不必构造TTT和CCT曲线 ,获得了若干常用低温保护剂实现玻璃化转变的临界降温速率 ,测定了渗透性低温保护剂实现玻璃化转变的临界结晶率 ,修正了临界降温速率的计算公式 ,实验还说明了Bourton模型对非渗透性保护剂降温结晶过程的局限性。

人红细胞冻干保护剂配方及浓度的优化

本研究探讨不同红细胞冻干保护剂配方及浓度的变化对红细胞冻干-复水后回收率的影响。应用一系列不同浓度的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、海藻糖及不同渗透性保护剂组成的红细胞冻干保护剂保护冻干红细胞并检测冻干红细胞复冰后红细胞及血红蛋白的回收率。结果显示:荷载海藻糖的红细胞在添加不同浓度保护剂保护下各组的红细胞损失率差异具有显著性(p<0.05或p<0.01),其中以有PVP360的保护液组中的细胞损失最大(0.24%),含有PVP40且胞外海藻糖浓度为150mmol/L时,红细胞的损失最小(0.02%)。海藻糖浓度为150mmol/L与海藻糖浓度为50mmol/L的保护剂组之间存在统计学差异(p<0.01)。冻干红细胞在添加不同PVP40浓度的冻干保护剂作用再水化后红细胞和血红蛋白回收率也不相同。15%PVP40+150mmol/L海藻糖+2%BSA在红细胞冻干中的保护效果最好,红细胞和血红蛋白回收率分别为(61.29±4.93)%,(62.49±5.91)%,与其它各组间存在显著差异(p<0.01)。含有甘油的冻干保护液对红细胞冻干过程中的保护效果最好,红细胞和血红蛋白回收率分别为(65.97±4.52)%和(67.24±5.94)%,与其它渗透性保护剂组相比存在显著性差异(p<0.01)。结论:红细胞冻干保护剂为0.8mol/L甘油+15%PVP40+150mmol/L海藻糖+2%BSA是最佳保护剂浓度配方。

冷冻保护剂对家畜精液冷冻保存的研究进展

家畜精液冷冻保存可以实现在不同时间、不同地点的人工授精,能有效提高优良种公畜的利用率,扩大其基因传播范围,同时也是家畜遗传资源易位保存的主要方法之一。在精液冷冻保存过程中,选择合适的稀释液成分对解冻后精子品质的影响十分重要。精子对低温非常敏感,在稀释液中加入冷冻保护剂可有效提升精子解冻后活力。文章综述了近几年渗透性冷冻保护剂(甘油、乙二醇、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜)和非渗透性冷冻保护剂(卵黄、大豆卵磷脂、蔗糖、脱脂乳)在猪、牛、羊、鸡、兔以及骆驼上的应用与研究,旨在为进一步深入研究家畜精子冻融损伤机制提供理论依据。

酿酒酵母X330高浓度发酵时耐酒精性能的初步研究

在完全合成培养基条件下,就渗透压保护剂和营养物质对一株产高浓度酒精的酿酒酵母X330高浓度发酵时耐酒精性能的影响进行了初步研究。结果表明,与渗透压相比,营养缺乏对酿酒酵母高浓度发酵时酒精耐受性能可能起着更为关键和重要的作用。发酵培养基中各营养元素对耐酒精性能的影响不同,由高到低的顺序是酵母抽提物>蛋白胨>硫酸镁>维生素C=磷酸二氢钾>氯化钙=硫酸铵。渗透压保护剂(甘氨酸和脯氨酸)能有效提高菌体酒精耐受性能。当甘氨酸添加浓度为20mmol/L或脯氨酸添加浓度为10mmol/L时,发酵终点酒精浓度最高,菌体于30℃在18%(V/V)酒精冲击下的存活率最大,且均高于对照组(未添加甘氨酸且未添加脯氨酸)水平,但甘氨酸的促进作用强于脯氨酸。

无渗透性冷冻保护剂的精子玻璃化冷冻研究进展

精子冷冻保存技术已经广泛应用于人类辅助生殖。近十余年来,国内外学者开始探索无冷冻保护剂的精子玻璃化冷冻,并获得了一定的成功[1]。多项研究资料显示[2],使用无冷冻保护剂的玻璃化冷冻正常精液标本可取得与常规慢速冷冻相同的临床效果。但在这些报道的无冷冻保护剂的精子玻璃化冷冻研究中,实际上均存在一些非渗透性的冷冻保护剂,而所谓的无冷冻保护剂是指无渗透性冷冻保护剂。本文将对无渗透性冷冻保护剂的精子玻璃化冷冻的可行性、具体实施方法、面临的问题及可能的应对策略进行综述,以期为未来临床常规开展无渗透性冷冻保护剂的精子玻璃化冷冻技术提供指导。

山羊精液冷冻保存研究现状、存在问题及展望

山羊精液的冷冻保存对于山羊遗传资源的长期保存和辅助繁殖技术研究具有重要的意义。我国山羊冻精技术的研究是从80年代才开始,到目前为止,在大多数的试验中,山羊冻精解冻后的活率不能稳定地超过50%[1]。山羊精液在冷冻过程中要面临诸多挑战,主要包括温度变化冲击、渗透损伤、化学毒性损伤、氧化损伤、细胞凋亡、细胞内外冰晶的机械损伤等。另外,山羊精液中含有一种EYCE,这种酶可以和蛋黄发生相互作用,并最终导致精子的死亡,而其他家畜,如牛。

家畜胚胎冷冻保存研究现状

1低温生物学原理Sanuel Hearne的日记讲述了1769～1772年他在北极的探险之中曾提及一只被冻僵的青蛙复活。Scholander等1957年研究报道北极鱼可以在-18℃的水中生存。研究者们通过对耐冻动物所利用的机制研究发现,哺乳动物卵母细胞和胚胎的常规冷冻程序和不同种耐冻动物抵抗低温的机制是明显相似的。多数耐冻动物能在冷冻中存活的关键原因是:它们产生大量的低分子防冻剂,例如葡萄糖、甘油以及许多其它醇类和糖类,这些渗透性化合物通过在冷冻和解冻过程中阻止冰晶的形成来保护细胞结构。

乙二醇联合丙二醇用于猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究

本实验以猪GV期卵母细胞为模型,旨在研究乙二醇(EG)联合丙二醇(PROH)作为渗透性冷冻保护剂的冷冻保存方案。将卵母细胞在室温(25℃)和生理温度(39℃)2种冷冻操作条件下,采用2.5%EG+2.5%PROH直接处理10 min(预平衡方式Ⅰ)或分步以3.75%EG+3.75%PROH、7.5%EG+7.5%PROH 2种溶液各处理2.5 min(预平衡方式Ⅱ)进行预平衡,然后Cryotop法玻璃化冷冻保存,解冻后分析其存活、体外成熟及孤雌发育能力。结果表明:在2种温度下,预平衡方式Ⅰ组卵母细胞解冻后2 h的存活率均显著高于预平衡方式Ⅱ组(P<0.05),但存活卵母细胞成熟培养后,在各冷冻组间的存活率无明显差异(P>0.05);冷冻组卵母细胞的核成熟也与新鲜卵母细胞无显著性差异(P>0.05);在相同温度下,预平衡方式Ⅰ组的卵裂率和囊胚发育率均显著高于预平衡方式Ⅱ组(P<0.05);当采用同一预平衡方式时,39℃的冷冻操作条件所获卵裂率和囊胚发育率显著低于25℃(P<0.05);此外,各组间囊胚细胞数均无明显差异(P>0.05)。综上所述,EG联合PROH用于猪GV期卵母细胞的Cryotop法玻璃化冷冻保存时,25℃冷冻操作条件下,采用预平衡方式Ⅰ可获得较高的冷冻存活率及囊胚发育率。