温化蠲痹方对类风湿关节炎患者外周血TNFα-及IL-1β的影响

目的观察中药温化蠲痹方治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的临床疗效及其减少西药用量及稳定病情作用,初步探讨中药温化蠲痹方治疗RA的机制。方法100例RA患者随机分为两组:中药温化蠲痹方加西药治疗组(治疗组)50例,对照组50例,其中对照组口服甲氨喋呤(MTX,每周1次,每次7.5 mg),柳氮磺吡啶片(每天3次,每次0.5g),美洛昔康片(莫比可,每天2次,每次7.5 mg)。治疗组在口服上述西药的同时,加用温化蠲痹方(每天1剂,分两次口服)治疗,疗程3个月。观察两组临床疗效,治疗前后症状、体征及实验室指标包括外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)变化、西药用量和治疗后3个月病情复发情况。结果治疗组总有效率(88.0%)优于对照组(76.0%,P<0.05);在改善症状体征积分〔关节疼痛度(0.61±0.59)分、肿胀度(1.49±1.20)分、压痛度(0.90±0.69)分、活动度(0.68±0.62)分、握力(68.56±6.50)mm Hg、晨僵时间(23.26±9.26)min],与本组治疗前及对照组治疗后比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);治疗组美洛昔康[(108.85±16.13)mg]及MTX[(82.11±11.35)mg]用量、病情复发率显著少于对照组[(189.63±18.44)mg,(94.75±10.23)mg,P<0.05,P<0.01]。两组TNF-α、IL-1β、抗CCP抗体、类风湿因子(RF)、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、血小板(PLT)、免疫球蛋白(Ig)等指标,与本组治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),治疗组治疗后上述指标改善优于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论中药温化蠲痹方加西药治疗RA的疗效优于单独西药治疗,具有减少西药用量,减少病情复发率,稳定病情作用。温化蠲痹方具有抗炎等免疫调节作用,可能是通过抑制TNF-α、IL-1β等细胞因子而达到治疗RA的作用。

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜基因表达谱的影响

目的研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜基因表达谱的影响,探讨其治疗CIA的作用机制。方法选用健康雄性Wistar大鼠40只,采用大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原乳剂的方法建立CIA模型。选取造模成功的16只大鼠随机分为模型组和中药组,每组8只。中药组给予温化蠲痹方22.9g/(kg·d)灌胃,模型组以生理盐水灌胃,均每天1次,连续30天。给药结束后,提取两组大鼠滑膜总RNA,运用Illumina基因表达谱芯片分析每个样本基因变化。结果与模型组比较,温化蠲痹方干预后大鼠滑膜差异表达基因有222条,其中上调基因76条,如防御素3b(RatNP-3b)等;下调基因146条,如血管生成素样蛋白2(Angptl2)、黏蛋白1(Muc1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)等。差异表达基因主要涉及细胞凋亡、血管生成素、防御素基因、细胞因子、信号转导、癌基因等。结论中药温化蠲痹方可能通过对多基因表达进行调控,从而发挥多靶点治疗CIA的作用。

基于多药耐药基因P-糖蛋白表达研究温化蠲痹方治疗类风湿关节炎的增效机制

目的:观察温化蠲痹方治疗类风湿关节炎(RA)的临床疗效,研究其对RA患者耐药基因P-糖蛋白(P-g P)表达影响,探讨温化蠲痹方治疗RA的增效机制。方法:60例RA患者随机分为两组,中药温化蠲痹方加西药治疗组(治疗组)30例,对照组30例,其中对照组口服甲氨蝶呤片(MTX,每周1次,每次7.5 mg),来氟米特片(每天1次,每次10 mg),美洛昔康片(莫比可,每天2次,每次7.5 mg)。治疗组在口服上述西药的同时,加用温化蠲痹汤(每天1剂,分2次口服)治疗,观察12周。观察两组临床疗效,治疗前后症状、体征、实验室指标,包括中医症候疗效分析、健康状况评估(HAQ评分)、疾病活动指数(DAS28)、患者疼痛评估(VAS评分)、晨僵时间、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、血小板计数、P-g P表达、安全性指标等,运用实时定量PCR检测外周血P-g P表达。结果:治疗组总有效率(86.6%)优于对照组(76.6%),差异有统计学意义(P<0.05)。在改善DAS28、HAQ评分、VAS评分、关节肿胀数、关节压痛数、晨僵时间,与本组治疗前和对照组治疗后比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);两组患者P-g P、ESR、CRP、RF、抗CCP抗体、血小板计数等指标,与本组治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),治疗组治疗后上述指标改善优于对照组(P<0.05,P<0.01);两组出现肝酶升高、白细胞下降、胃肠道反应、感染及血压升高等,治疗组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中药温化蠲痹方加西药治疗RA疗效优于单独西药治疗,温化蠲痹方可降低RA患者多药耐药基因P-g P表达,改善患者对DMARDs多药耐药,可能是其治疗RA提高临床疗效机制之一,该方治疗RA患者安全、有效。

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单个核细胞微小RNA-146a表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)微小RNA-146a(miRNA-146a)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法:选用健康雌性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠50只随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方低剂量组(n=10,简称中药1组)、温化蠲痹方中剂量组(n=10,简称中药2组)、温化蠲痹方高剂量组(n=10,简称中药3组)。中药1、2、3组分别给予温化蠲痹方22.9 g/kg·d、45.8 g/kg·d、68.7 g/kg·d灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78 mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30 d。采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度。给药结束后,提取各组大鼠外周单个核细胞,采用实时定量PCR法检测miRNA-146a表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有统计学意义(P<0.01);与MTX组比较,中药1、2、3组大鼠足趾肿胀差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠足趾肿胀减轻,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠PBMC miRNA-146a表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠PBMC miRNA-146a表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与MTX比较,中药1、2、3组大鼠PBMC miRNA-146a表达差异无统计学意义(P>0.05);中药1、2、3组比较,大鼠PBMC miRNA-146a表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CIA大鼠PBMC miRNA-146a表达升高。中药温化蠲痹方下调CIA大鼠PBMC miRNA-146a表达无剂量依赖性,其可能通过下调miRNA-146a表达,而调节免疫细胞分化、信号转导等达到治疗CIA的作用。

Ras-MAPKs信号通路在类风湿关节炎miRNA-146a调控DNMTs中的作用及温化蠲痹方干预作用研究

目的研究ras-MAPKs信号通路在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)微小RNA-146a(miRNA-146a)对DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)调控中的作用,以及温化蠲痹方干预作用。方法提取RA患者、健康受试者PBMCs进行体外培养研究。将18例健康受试者随机分为6组,每组均为3例,分别为正常组,正常转染miRNA-146a组(转染组),正常转染miRNA-146a加中药组(中药1组),正常转染miRNA-146a加MAPKs特异性阻断剂PD98059组(阻断1组)、SB203580组(阻断2组)、SP600125组(阻断3组)。将符合中医辨证为寒热错杂、痰瘀痹阻型的活动期RA患者15例,随机分为5组,每组3例,分别为RA组,RA加中药组(中药2组),RA加MAPKs特异性阻断剂PD98059组(阻断4组)、SB203580组(阻断5组)、SP600125组(阻断6组)。对受试者PBMCs进行体外培养、转染、加通路阻断剂以及含药血清,运用实时定量PCR检测PBMC中miRNA-146a、DNMTs、RASGRP1的表达。结果阻断1~6组miRNA-146a表达降低,DNMTs表达升高,RASGRP1表达降低(均P<0.05)。中药1、2组RSAGRP1表达降低(均P<0.05)。结论ras-MAPKs信号通路可能参与了RA患者miRNA-146a对DNMTs的调控。中药温化蠲痹方可能通过下调RA患者RASGRP1表达作用于ras-MAPKs信号通路,影响miRNA-146a对DNMTs进行调控,达到治疗RA作用。

温化蠲痹方作用于鸟嘌呤释放蛋白1影响微小RNA-146a对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单个核细胞DNA甲基化调控作用研究

目的:研究鸟嘌呤释放蛋白1(RASGRP1)在中药温化蠲痹方影响微小RNA-146a(miRNA-146a)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)DNA甲基化调控中的作用,探讨温化蠲痹方治疗CIA作用机制。方法:随机将健康雌性Wistar大鼠分为造模组和正常对照组(n=10,正常组),造模组在大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原乳剂,建立胶原诱导性关节炎模型。30只造模成功大鼠随机分组如下:模型组(n=10)、甲氨蝶呤组(n=10,MTX组)及中药温化蠲痹方组(n=10,中药组)。中药组大鼠按22.9 g/(kg·d)灌胃中药温化蠲痹方,模型组给予生理盐水灌胃,两组大鼠都是每天1次,MTX组灌胃MTX混悬液(0.78 mg/kg),每周1次,共观察30 d。采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度。给药结束后,对正常组、模型组PBMC细胞培养,模型组加入ras-MARKs阻断剂,阻断剂①SB230580、阻断剂②PD98059、阻断剂③SP600125,模型组加中药,正常组转染miRNA-146a,模型组转染反义miRNA-146a。采用实时定量PCR法检测miRNA-146a、DNMTs(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)表达水平,Western Blot检测RASGRP1表达。结果:(1)与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有统计学意义(P<0.01);MTX组与中药组比较,大鼠足趾肿胀差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀减轻,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)体内实验:与正常组比较,模型组大鼠外周血RASGRP1表达升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,中药组、MTX组RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。中药组、MTX组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。体外实验:与正常组比较,模型组、正常转染miRNA-146a组PBMC RASGRP1表达升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,模型加中药组、模型转染反义miRNA-146a组RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,模型加阻断剂①组、加阻断剂②组、加阻断剂③组PBMC RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)相关性分析:模型组、模型加阻②、③、加中药组、转染miRNA-146a组、转染反义miRNA-146a组大鼠PBMC miRNA-146a表达水平与DNMT1、DNMT3a、DNMT3b呈显著负相关。结论:温化蠲痹方可能作用于RASGRP1影响ras-MARKs通路,发挥对微小RNA-146a调控CIA大鼠PBMC DNA甲基化作用,是其治疗胶原诱导性关节炎作用机制之一。

温化蠲痹方诱导胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的研究

目的:研究中药温化蠲痹方诱导胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞凋亡作用。方法:选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组(n=10,简称正常组)、造模组,造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。造模成功后随机分为模型组(n=10)、温化蠲痹方组(n=10,简称中药组)、MTX组(n=10)。正常组、模型组、中药组按22.9g·kg-1·d-1剂量分别灌胃生理盐水、温化蠲痹方,均每日1次,MTX组按0.78mg·kg-1·w-1剂量灌胃MTX混悬液,每周1次。给药30天后,运用透射电镜和流式细胞术检测大鼠滑膜细胞凋亡。结果:与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数(AI)评分明显降低(P<0.01);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低(P<0.01)。透射电镜显示,中药组大鼠滑膜细胞凋亡较模型组大鼠滑膜细胞凋亡明显。流式细胞术检测显示,与正常组比较,模型组大鼠滑膜细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与模型组大鼠比较,中药组和MTX组大鼠滑膜细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:CIA大鼠滑膜细胞凋亡减少,诱导滑膜细胞凋亡可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。

温化蠲痹方对胶原诱导性大鼠滑膜缺氧诱导因子表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜缺氧诱导因子(HIF)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA作用机理。方法:选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组(n=10,简称正常组)和造模组。造模组采用颈、背部5个部位皮内多点注射BCⅡ乳剂的方法进行免疫,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠30只随机分为模型组(n=10)、温化蠲痹方组(中药组,n=10)和MTX组(n=10)。采用容积法(排水体积)和计分法分别评价足趾肿胀度和关节炎症程度。分别灌胃给药:中药组给予温化蠲痹方,剂量为22.9 g/kg,每天1次;正常组和模型组给予等量生理盐水,每天1次;MTX组给予MTX混悬液,剂量为0.78 mg/kg,每周1次。治疗30 d后处死,取各组膝关节滑膜及血清。采用免疫组化法检测滑膜HIF表达水平。结果:1AI评分显示:与正常组比较,模型组、中药组大鼠AI评分明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,在第18天,中药组大鼠AI评分差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较,33 d后中药组大鼠AI评分明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。2与正常组比较,模型组大鼠滑膜HIF表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,中药组、MTX组HIF表达显著减少,差异有统计学意义(P<0.01)。中药组和MTX组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CIA大鼠滑膜HIF表达水平升高,温化蠲痹方可能通过下调HIF表达,而抑制CIA大鼠血管翳生成,从而治疗CIA。

温化蠲痹方对胶原诱导性大鼠滑膜血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法:选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠30只随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方组(10只,简称中药组)。中药组给予温化蠲痹方22.9 g/(kg·d)灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30天。给药结束后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜VEGF水平。结果:与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数(AI)评分明显降低(P<0.01);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜VEGF表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜VEGF表达水平明显降低(P<0.01),中药组和MTX组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中药温化蠲痹方可能通过下调CIA大鼠滑膜VEGF水平,抑制血管翳形成而治疗CIA。

温化蠲痹方对胶原诱导性大鼠滑膜IL-1β、IL-8表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜白细胞介素-1β(IL-1β)、膜白细胞介素-8(IL–8)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法:选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠30只随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方组(10只,简称中药组)。中药组给予温化蠲痹方22.9 g/kg·d灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78 mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30 d。给药结束后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜IL-1β、IL–8表达水平。结果:与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数(AI)评分明显降低(P<0.01);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜IL-1β、IL–8表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜IL-1β、IL–8表达水平明显降低(P<0.01),中药组和MTX组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中药温化蠲痹方可能通过下调CIA大鼠滑膜IL-1β、IL–8水平达到而治疗CIA目的。

温化蠲痹方对CIA大鼠外周血TNF-α IL-1β的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血TNF-α、IL-1β的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法:选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再把造模组随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方组(10只,简称中药组)。正常组、模型组、中药组按22.9g/kg剂量分别灌胃生理盐水、温化蠲痹方,均每日1次,MTX组按0.78mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次。给药30天后,运用ELISA法检测大鼠外周血TNF-α、IL-1β水平。结果:与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数(AI)评分明显降低(P<0.01);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠外周血TNF-α、IL-1水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠外周血TNF-α、IL-1水平明显降低(P<0.01),两组之间比较差异无显著性(P>0.05)。结论:CIA大鼠外周血TNF-α、IL-1水平升高,降低CIA大鼠外周血TNF-α、IL-1水平可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。

温化蠲痹方治疗膝骨性关节炎临床研究

目的:观察温化蠲痹方治疗膝骨性关节炎的临床疗效。方法:将90例患者随机分为2组各45例,对照组采用美络昔康片和盐酸氨基葡萄糖胶囊口服,治疗组在对照组治疗的基础上加用温化蠲痹方治疗,均治疗3月。结果:总有效率治疗组为93.33%,对照组为84.44%,2组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。2组治疗前后疼痛、关节僵硬、生理功能、指数总积分等骨关节指数积分比较,差异均有显著性意义(P<0.05);治疗后治疗组上述各项评分较对照组改善更显著,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:温化蠲痹方治疗膝骨性关节炎疗效好,疗效肯定。

温化蠲痹方治疗类风湿关节炎的临床效果及对患者骨代谢、外周血miRNA-146a及P-gp表达水平的影响

目的探究温化蠲痹方治疗类风湿关节炎(RA)的临床效果及对患者骨代谢、外周血miRNA-146a及P-糖蛋白(P-gp)表达水平的影响。方法选取本院收治的102例RA患者作为研究对象,按照随机数字表法将其分为研究组(51例,西药+温化蠲痹方治疗)与对照组(51例,西药治疗)。比较两组患者的治疗效果。结果研究组的治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后4、8、12周,研究组的DAS28评分低于对照组(P<0.05)。治疗后,研究组的PⅠNP、OC、25(OH)D水平高于对照组,β-CTX、TRAP水平低于对照组(P<0.05)。治疗后4、8、12周,研究组的外周血miRNA-146a及P-gp的相对表达量均低于对照组(P<0.05)。结论温化蠲痹方治疗RA的临床效果显著,可改善患者骨代谢情况,降低外周血miRNA-146a及P-gp表达。

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠N6-甲基腺苷甲基化的影响

目的研究温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠炎症及N6-甲基腺苷(m6A)甲基化的影响。方法选用雌性Wistar大鼠50只,随机分为正常组(n=10)和造模组(n=40)。采用尾部皮内多点注射乳化剂的方法建立CIA模型。采用容积法(排水体积)和关节炎指数(AI)评分法对模型进行评估,足肿胀体积>1.6 mL、AI评分≥4分视为造模成功。将造模成功的30只CIA大鼠随机分为模型组(n=10)、温化蠲痹方组(中药组,n=10)、甲氨蝶呤(MTX)组(n=10)。中药组给予温化蠲痹方,剂量为22.9 g·kg^(-1)·d^(-1);MTX组给予甲氨蝶呤混悬液,剂量为0.78 mg·kg^(-1),每周1次;正常组和模型组给予等量质量分数为0.9%的氯化钠溶液,每日1次。治疗30 d取各组大鼠膝关节滑膜。采用HE染色法检测滑膜病理情况,以realtime PCR法检测滑膜中甲基转移酶样蛋白3(Mettl3)、甲基转移酶样蛋白14(Mettl14)、肥胖相关蛋白(Fto)、Alkb同系物5(Alkbh5)、Yth N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(Ythdf1)、Yth N6-甲基腺苷RNA结合蛋白2(Ythdf2)基因表达及关节炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)基因表达水平,并采用Western blot法检测Mettl3、Fto蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠足肿胀体积、AI评分明显升高,Mettl3、Mettl14、Fto、Alkbh5、Ythdf1基因表达增加,Ythdf2基因表达降低,TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增加,Mettl3、Fto蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,中药组和MTX组足肿胀体积、AI评分均随时间延长逐渐降低,Mettl3、Mettl14、Fto、Alkbh5、Ythdf1基因表达降低,Ythdf2基因表达增加,TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达降低,Mettl3、Fto蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与MTX组比较,中药组Mettl3、Mettl14、Fto、Alkbh5、Ythdf1基因表达降低,Ythdf2基因表达增加,TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达降低,Mettl3、Fto蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论中药温化蠲痹方可能通过影响m6A甲基化来发挥抗炎作用,从而对CIA起到治疗效果。

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠VEGF表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗胶原诱导性关节炎(CIA)的作用机制。方法:健康雄性大鼠随机分为造模组(60只)、正常对照组(简称正常组,10只),造模组采用牛Ⅱ型胶原(BCⅡ)乳剂于大鼠尾根部及颈背部多点注射,建立CIA模型。造模成功后,选取30只造模成功大鼠随机分为模型组(10只)、甲氨喋呤(MTX)组(10只)、温化蠲痹方组(简称中药组,10只)。给药30天后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜VEGF水平,观察各组大鼠足趾肿胀度。结果:与正常组比较,模型组、中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显,差异均有非常显著性意义(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异均有显著性意义(P<0.01);中药组与MTX组比较,差异无显著性意义(P>0.05);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有非常显著性意义(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜VEGF表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜VEGF表达水平明显降低(P<0.01),中药组与MTX组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:降低CIA大鼠滑膜VEGF水平可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。

针刺联合温化蠲痹方治疗膝骨性关节炎临床观察

目的:观察针刺联合温化蠲痹方治疗膝骨性关节炎患者的临床疗效。方法:将膝骨性关节炎患者70例分成2组,观察组患者进行针刺联合温化蠲痹方治疗,对照组患者仅进行针刺疗法。观察并记录患者关节疼痛、晨僵、肿胀等评分,将总疗效及临床症状总积分作为主要指标,评价临床效果。结果:总有效率观察组94.3%,对照组77.1%。2组临床疗效比较,差异有显著性意义(P<0.05)。治疗后,2组疼痛、晨僵、肿胀、临床证候总积分分别比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:针刺联合温化蠲痹方及仅用针刺疗法治疗膝骨性关节炎均有效,但前者疗效更优,治疗后症状较后者轻,适合推广使用。

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎小鼠滑膜增殖、凋亡及Hotair/Wnt1/β-catenin通路的影响

目的以胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠为实验对象进行体内实验,从Hotair/Wnt1/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的角度,分析温化蠲痹方(WHJBD)对类风湿关节炎(RA)的干预机制。方法选用雄性DBA/1J小鼠建立CIA模型,将造模成功小鼠按随机数字表法分为4组:模型组(CIA组)、温化蠲痹方组(WHJBD组)、甲氨蝶呤组(MTX组)、WHJBD+MTX组,每组6只。并随机选取同一批次的正常小鼠6只作为正常组。WHJBD组每天予WHJBD灌胃(25.78 g/kg)、MTX组每周予MTX灌胃(1.288 mg/kg)、WHJBD+MTX组同时予WHJBD及MTX灌胃,正常组及CIA组予同等剂量生理盐水灌胃,均持续4周。采用游标卡尺测量足掌和踝关节的肿胀程度并计算关节肿胀度,实时荧光定量PCR法检测各组Hotair、Wnt抑制因子1(WIF1)、C-myc、G1/S-特异性周期蛋白(CyclinD1)表达水平,免疫组化法检测Wnt1、β-catenin、肿瘤增殖抗原抗体(Ki-67)、Caspase3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果与CIA组比较,WHJBD、MTX、WHJBD+MTX组干预后小鼠关节肿胀度随着干预时间的增加逐渐降低;增殖相关蛋白Ki-67表达减少,凋亡相关蛋白Caspasse3、Bax表达增加,Bcl2表达减少;Hotair、WIF1基因表达增加,C-myc、CyclinD1基因表达减少;通路蛋白Wnt1、β-catenin表达减少;差异均有统计学意义(P<0.05)。结论WHJBD具有减轻CIA小鼠足掌和踝关节肿胀度和关节炎程度,调节Hotair/Wnt1/β-catenin通路和滑膜组织的增殖、凋亡,发挥治疗CIA小鼠作用。

温化蠲痹方对类风湿关节炎患者外周血单个核细胞微小RNA-146a、DNA甲基化转移酶表达的影响

目的观察温化蠲痹方对活动期类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)微小RNA-146a (miRNA-146a)、DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)表达影响及miRNA-146a与DNMTs表达的相关性。方法采用随机数字表法,将60例RA患者随机分为两组:中药温化蠲痹方加西药治疗组(简称治疗组,30例)及对照组(30例)。其中对照组口服甲氨蝶呤片(MTX,每周1次,每次7.5 mg),来氟米特片(LEF,每天1次,每次10 mg),美洛昔康片(每天1次,每次7.5 mg)。治疗组在对照组治疗的基础上,加用温化蠲痹方,每天1剂,分2次口服,疗程12周。观察两组临床疗效、治疗前后症状、体征,包括中医证候疗效分析、健康状况评估(HAQ评分)、疾病活动指数(DAS28)、患者疼痛评估(VAS评分)、晨僵时间等,检测血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、血小板(PLT)计数,运用实时定量PCR方法检测外周血miRNA-146a与DNMTs表达。结果治疗组总有效率[90.0%(27/30)]优于对照组[80.0%(24/30),P<0.05]。与对照组比较,治疗组ACR20、ACR50达标率(分别为43.3%、36.7%)高于对照组(33.3%、26.7%,P<0.05);治疗组DAS28、HAQ评分、VAS评分降低,关节肿胀数、关节压痛数减少、晨僵时间缩短(P<0.05,P<0.01);miRNA-146a、DNMTs、ESR、CRP、RF、抗CCP抗体、PLT计数差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);活动期RA患者PBMCs DNMTs表达水平降低(P<0.01)、miRNA-146a表达水平升高(P<0.01),miRNA-146a表达水平与DNMT1(r=-0.362,P=0.04)、DNMT3a(r=-0.566,P=0.01)、DNMT3b(r=-0.382,P=0.03)呈负相关。治疗组出现肝酶升高、胃肠道反应等不良反应明显降低(P<0.05)。结论 中药温化蠲痹方加西药治疗RA疗效优于单纯西药治疗组,其机制可能与下调活动期RA患者miRNA-146a表达、上调DNMTs表达有关。

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单核细胞DNA甲基化转移酶表达的影响

目的观察温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(collagen-inducing arthritis,CIA)大鼠外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)DNA甲基化转移酶(DNA methyltrsansferases,DNMTs)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法将90只Wistar大鼠随机分为造模组(80只)及正常对照组(10只,简称正常组)。造模组在大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原乳剂制备CIA模型。将造模成功的50只大鼠随机分为模型组、甲氨喋呤组(MTX)、温化蠲痹方低、中、高剂量组(简称中药低、中、高剂量组),每组10只。模型组给予生理盐水灌胃;中药低、中、高剂量组分别给予温化蠲痹方22.9、45.8、68.7 g/(kg·d)灌胃,均每日1次;MTX组按0.78 mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30日。采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度。给药干预后提取各组大鼠PBMCs,采用实时定量PCR法检测PBMCs DNMTs(DNMT1、DNMT3a及DNMT3b)mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠足趾明显肿胀(P<0.01);与模型组比较,中药低、中、高剂量组及MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻(P<0.01)。与本组治疗前比较,中药各剂量组及MTX组大鼠足趾肿胀减轻(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠PBMCs DNMT1、DNMT3a及DNMT3b表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,中药各剂量组及MTX组DNMT1、DNMT3a及DNMT3b表达水平明显升高(均P<0.01);中药各剂量组DNMT1、DNMT3a及DNMT3b表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CIA大鼠PBMCs DNMTs表达降低。温化蠲痹方上调CIA大鼠PBMCs DNMTs表达无明显剂量依赖性。通过上调DNMTs表达,调节CIA大鼠甲基化状态可能是其治疗CIA作用机制之一。

温化蠲痹方对CIA大鼠滑膜Ang-2和ANGPTL2表达的影响

目的以胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠为研究对象,测定大鼠滑膜血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)、血管生成素样蛋白2(angiopoietin-like proteins 2,ANGPTL2)表达水平,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法选用Wistar大鼠,随机分为造模组(50只)、正常组(10只),造模组于大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原(typeⅡcollegan of bovine,BCⅡ)乳剂,建立CIA模型。选取30只造模成功大鼠随机分为温化蠲痹方组、甲氨蝶呤组、模型组。给药30 d后,运用实时real time PCR检测大鼠膝关节滑膜Ang-2mRNA、ANGPTL2mRNA的表达。结果温化蠲痹方组和甲氨蝶呤组大鼠滑膜Ang-2 mRNA、ANGPTL2 mRNA表达水平均低于模型组(P<0.05),与甲氨蝶呤组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论温化蠲痹方可有效抑制CIA大鼠滑膜Ang-2mRNA、ANGPTL2mRNA表达,达到抑制血管翳形成而治疗CIA的作用。