立谷热减毒活疫苗候选株的选育及其弱毒的分子机制

1930年Daubuey等首次从绵羊中分离出立谷热(RVF)病毒,为该病的防治提供了前提。几十年来有关RVF疫苗的研究工作一直在进行之中,兽用灭活疫苗和减毒活疫苗早已应用于流行区的预防接种,人用灭活疫苗也正在进行扩大人群观察。1949年Smithburn等发现RVF病毒Ent株经小鼠脑内连续传170代后对很多实验动物的毒力明显减弱,但同时也伴有对神经组织的亲和力增强,而且对家畜可致畸和引起流产等,故有些学者预言发展人用RVF减毒活疫苗是比较困难的。但近年来有关这方面研究已有较成功的报道,

霍乱弧菌减毒活疫苗候选株IEM109的构建

目的 构建保护性抗原基因整合于染色体上的霍乱弧菌活疫苗候选株 ,减弱毒力和增强其遗传稳定性。方法 以我们筛选的天然不含霍乱毒素的疫苗候选株IEM1 0 1为出发株 ,通过基因重组技术将IEM1 0 1染色体上与噬菌体复制整合有关的TLC因子、attRS位点及具细胞毒作用的RTX基因簇同时进行缺失 ,并插入具免疫原性的ctxB基因及介导噬菌体免疫的rstR基因 ,构建疫苗候选株IEM1 0 9。GM1 ELISA法检测IEM1 0 9中ctxB基因的表达情况。细胞培养观察候选株对哺乳动物细胞Hep 2的毒性作用。结果 PCR及原位杂交均证实霍乱弧菌疫苗候选株IEM1 0 9中TLC因子、attRS位点、rtxA、rtxC基因被缺失 ,而ctxB、rstR基因整合入染色体DNA。GM1 ELISA示ctxB基因表达良好。IEM1 0 9对Hep 2细胞的毒性作用消失。结论 构建了出发株染色体上毒力相关基因簇被保护性抗原基因替换的重组改造菌株 ,可作为候选株进行进一步的免疫效果考核。

鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株SKLZΔspiC对非靶动物(鼠)的致病性

目的评价鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株SKLZΔspiC对非靶动物(鼠)的致病性。方法采用鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株SKLZΔspi C[1×10~7、1×10~9 CFU/(0. 1 mL·只)]及鸡白痢沙门菌S06004(Nal^R)[1×10~7 CFU/(0. 1 mL·只)],分别经肌肉注射和口服感染小鼠,同时设空白对照组(未感染)。观察小鼠的临床症状、病理、体重、脏器内菌体载量、粪便排菌及脾脏细胞因子水平,分析鸡白痢沙门菌减毒疫苗候选株对小鼠的致病性。结果与空白对照组比较,各组小鼠均未出现任何临床症状,肝脏、脾脏、盲肠病理观察均未见任何病变,体重变化差异无统计学意义(P> 0. 05)。与鸡白痢沙门菌S06004(Nal R)感染组比较,减毒活疫苗候选株感染组小鼠肝脏、脾脏、盲肠内及小鼠粪便载菌量均降低。各感染组小鼠脾脏中炎性因子IL-1β、IFNγ、IL-12、IL-6表达量均较低,仅引起小鼠轻微短暂的炎症反应。结论鸡白痢沙门菌减毒疫苗候选株SKLZΔspiC对非靶动物(鼠)无致病性,符合公共卫生安全要求。

流感病毒减毒活疫苗的研究进展

目前,疫苗接种仍是预防流感最有效的途径,流感疫苗主要有三价灭活疫苗和减毒活疫苗。灭活疫苗虽安全有效,但其抗原用量大,生产过程复杂,生产周期长,且黏膜免疫力弱;而流感病毒减毒活疫苗不仅能诱导机体产生抗体,同时可引起包括黏膜免疫和细胞免疫在内的一系列适应性免疫反应,因此,认为其免疫效果优于灭活疫苗。本文就流感减毒活疫苗的研究历史及现状、疫苗候选株的获得及基于细胞的流感减毒活疫苗的研发作一综述。

A型流感病毒持续感染细胞系来源的IVpi-189病毒生物学性状的初步研究

为明确E61-24-P15 A型重组流感病毒的第189代传代子病毒(IVpi-189)是否具备流感病毒温度敏感减毒活疫苗候选株的特点,将IVpi-189病毒感染MDCK细胞,并于不同培养温度条件下培养,观察其致细胞病变效应,病毒合成、释放情况,以及不同温度条件下病毒存活时间。结果显示32℃培养温度下,IVpi-189病毒具有等同于亲代野生病毒株的诱导细胞病变能力,而当培养温度上调至38℃,IVpi-189病毒致细胞病变效果出现缓慢且程度明显减轻。空斑形成单位实验发现IVpi-189病毒在38℃培养条件下增殖能力明显下降,其原因与病毒灭活速度及子病毒释放无关,但与感染细胞病毒合成能力下降有关。上述实验结果初步证实流感病毒持续感染细胞系来源的IVpi-189病毒具有温度敏感减毒活疫苗的生物学特性,在许可培养温度条件下具有良好的增殖能力,而在非许可培养温度下,病毒增殖活性受到明显抑制。本研究为流感病毒减毒活疫苗的开发研制提供实验佐证。