醛基化海藻多糖复合材料作为人工肝载体的可行性

背景:三维肝细胞体外培养中肝细胞可在支架孔隙中良好生长,但酶消化脱细胞过程严重影响了细胞获得率和活性。目的:制备大孔三维细胞支架N-聚异丙基丙烯酰胺-醛基化海藻多糖,探索其作为人工肝生物反应器细胞载体的可行性。方法:以海藻酸钠为致孔剂合成大孔N-聚异丙基丙烯酰胺,再交联醛基化海藻多糖,制备出大孔三维细胞支架N-聚异丙基丙烯酰胺-醛基化海藻多糖。测定其孔径及孔隙率。①细胞毒性实验:MTT法检测在新鲜细胞培养液、高密度聚乙烯浸提液、高密度聚氯乙烯浸提液及N-聚异丙基丙烯酰胺-醛基化海藻多糖浸提液中培养小鼠成纤维细胞的A值。②非酶脱细胞性能实验:将第3代小鼠成纤维细胞接种到盛有N-聚异丙基丙烯酰胺-醛基化海藻多糖支架的6孔板中,实验组通过降温脱附回收细胞,对照组以胰蛋白酶消化回收细胞。结果与结论:大孔三维细胞支架N-聚异丙基丙烯酰胺-醛基化海藻多糖的孔径为(180.23±62.30)μm,孔隙率为(89.67±2.40)%。细胞毒性实验证明N-聚异丙基丙烯酰胺-醛基化海藻多糖支架无细胞毒性;培养第15天实验组非酶温控脱细胞与对照组酶消化脱细胞相比细胞获得率增加26.24%。表明大孔三维细胞支架N-聚异丙基丙烯酰胺-醛基化海藻多糖具有适宜细胞生长的大孔结构;温度调控脱细胞性能克服了传统酶消化脱细胞对细胞的损伤,可提高细胞培养的数量和质量。