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新型聚合物单分散温敏色谱固定相的制备及其在生物大分子分离中的应用
被引量:
3
1
作者
欧阳康龙
孙彦璞
龚波林
《分析化学》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期851-854,共4页
以2.5μm的单分散聚苯乙烯为种子,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,甲苯和环己醇为致孔剂,采用"一步种子溶胀聚合法"制备了单分散微球;再以过硫酸钾为引发剂将水溶性温敏单体N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)分子引发聚合到微球表...
以2.5μm的单分散聚苯乙烯为种子,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,甲苯和环己醇为致孔剂,采用"一步种子溶胀聚合法"制备了单分散微球;再以过硫酸钾为引发剂将水溶性温敏单体N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)分子引发聚合到微球表面,制备了粒径为7.0μm、分散系数为0.02的单分散交联温敏色谱填料,温敏单体NIPAM的接枝率为5.2%。考察了该填料对标准蛋白质的分离性能、温敏性能、稳定性和重现性以及动态吸附容量对蛋白保留的影响。实验结果表明,该色谱填料对蛋白的分离性能、温敏性能、稳定性及重现性良好,且对溶菌酶的动态吸附容量为32.3mg/g。在疏水模式下,该填料不但可以同时基线分离5种标准蛋白,而且通过改变温度可以有效地将3种在低温下保留时间重叠的蛋白(细胞色素-C、β-乳球蛋白和核糖核酸酶)完全分离。
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关键词
N-异丙基丙烯酰胺
单分散
温敏色谱
固定相
蛋白质分离
下载PDF
职称材料
色谱技术在抗体分离纯化中的应用进展
2
作者
刘家玮
唐长伟
+1 位作者
夏一然
白泉
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第6期533-543,共11页
抗体作为一类重要的生物药物,在疾病诊断和治疗等方面拥有广阔的前景。抗体药物的需求逐年上升,生产规模不断扩大,下游抗体纯化已经成为抗体药物生产的瓶颈。色谱技术具有选择性好、分离效率高等优点,在抗体纯化领域占据主导地位。抗体...
抗体作为一类重要的生物药物,在疾病诊断和治疗等方面拥有广阔的前景。抗体药物的需求逐年上升,生产规模不断扩大,下游抗体纯化已经成为抗体药物生产的瓶颈。色谱技术具有选择性好、分离效率高等优点,在抗体纯化领域占据主导地位。抗体分离纯化流程一般包括样品的粗提、粗提物精制和抗体精纯3个步骤,每个步骤都涉及色谱分离技术。目前已有多种色谱技术(如亲和色谱、离子交换色谱、疏水作用色谱、混合模式色谱以及新型的温敏色谱等)应用于抗体的分离纯化。本文介绍了近年来国内外各种色谱技术在抗体分离纯化方面所取得的研究进展,并对抗体色谱分离技术的未来发展趋势进行了展望。
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关键词
抗体
色
谱
技术
分离纯化
亲和
色
谱
混合模式
色
谱
温敏色谱
综述
下载PDF
职称材料
嵌段共聚温敏亲和色谱固定相的制备及其对抗体的分离纯化
3
作者
郭冬梅
夏一然
+3 位作者
Mujeeb ur RAHMAN
王建忠
刘家玮
白泉
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第12期1045-1051,共7页
抗体药物在癌症治疗和免疫诊断中起着重要作用,但抗体的分离纯化通常采用酸性洗脱,易导致抗体聚集失活等问题。本研究以硅胶为基质,以温敏嵌段聚合物聚[(N-异丙基丙烯酰胺)-b-4-乙烯基吡啶](P[NIPAM-b-4VP])为间隔臂,以4-巯基乙基吡啶(M...
抗体药物在癌症治疗和免疫诊断中起着重要作用,但抗体的分离纯化通常采用酸性洗脱,易导致抗体聚集失活等问题。本研究以硅胶为基质,以温敏嵌段聚合物聚[(N-异丙基丙烯酰胺)-b-4-乙烯基吡啶](P[NIPAM-b-4VP])为间隔臂,以4-巯基乙基吡啶(MEP)为配基,制备了一种嵌段共聚温敏亲和色谱固定相SiO_(2)-P[NIPAM-b-4VP]-MEP,并以牛血清白蛋白(BSA)和γ-球蛋白为模型蛋白,对制备的温敏亲和色谱固定相的色谱性能进行了表征。分别考察了流动相盐浓度和温度对二者分离性能的影响。结果表明,在40℃时该固定相只选择性保留γ-球蛋白,而不保留BSA;在5℃时采用含0.6 mol/L NaCl的Tris-HCl(pH 8.0)缓冲溶液进行洗脱,γ-球蛋白的质量回收率为92.7%。该固定相对γ-球蛋白的吸附量为(71.5±2.1)mg/g(n=3),是传统温敏亲和色谱固定相SiO_(2)-PNIPAM-MEP的2倍。将该固定相用于人血清中IgG的分离纯化,仅通过改变流动相温度和盐浓度即可一步实现对抗体的分离纯化,纯度大于97.4%±0.7%。上述结果表明该温敏亲和色谱固定相不仅对抗体具有特异的选择性,而且洗脱条件温和,绿色环保,从根本上解决了传统亲和色谱采用酸性洗脱易使抗体蛋白变性失活的难题。该技术在抗体药物的分离纯化和工业生产中具有重要的应用价值。
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关键词
温敏色谱
亲和
色
谱
抗体分离
聚(N-异丙基丙烯酰胺)
4-乙烯基吡啶
下载PDF
职称材料
题名
新型聚合物单分散温敏色谱固定相的制备及其在生物大分子分离中的应用
被引量:
3
1
作者
欧阳康龙
孙彦璞
龚波林
机构
宁夏大学能源化工重点实验室
出处
《分析化学》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期851-854,共4页
基金
国家自然科学基金(No.20765004)资助
文摘
以2.5μm的单分散聚苯乙烯为种子,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,甲苯和环己醇为致孔剂,采用"一步种子溶胀聚合法"制备了单分散微球;再以过硫酸钾为引发剂将水溶性温敏单体N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)分子引发聚合到微球表面,制备了粒径为7.0μm、分散系数为0.02的单分散交联温敏色谱填料,温敏单体NIPAM的接枝率为5.2%。考察了该填料对标准蛋白质的分离性能、温敏性能、稳定性和重现性以及动态吸附容量对蛋白保留的影响。实验结果表明,该色谱填料对蛋白的分离性能、温敏性能、稳定性及重现性良好,且对溶菌酶的动态吸附容量为32.3mg/g。在疏水模式下,该填料不但可以同时基线分离5种标准蛋白,而且通过改变温度可以有效地将3种在低温下保留时间重叠的蛋白(细胞色素-C、β-乳球蛋白和核糖核酸酶)完全分离。
关键词
N-异丙基丙烯酰胺
单分散
温敏色谱
固定相
蛋白质分离
Keywords
N-Isopropylacrylamide
Monodisperse thermo-sensitive chromatographic stationary phase
Separation of proteins
分类号
O657.7 [理学—分析化学]
下载PDF
职称材料
题名
色谱技术在抗体分离纯化中的应用进展
2
作者
刘家玮
唐长伟
夏一然
白泉
机构
合成与天然功能分子教育部重点实验室
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第6期533-543,共11页
基金
国家自然科学基金(22174108,21874106)
陕西省自然科学基金(2021JM-310).
文摘
抗体作为一类重要的生物药物,在疾病诊断和治疗等方面拥有广阔的前景。抗体药物的需求逐年上升,生产规模不断扩大,下游抗体纯化已经成为抗体药物生产的瓶颈。色谱技术具有选择性好、分离效率高等优点,在抗体纯化领域占据主导地位。抗体分离纯化流程一般包括样品的粗提、粗提物精制和抗体精纯3个步骤,每个步骤都涉及色谱分离技术。目前已有多种色谱技术(如亲和色谱、离子交换色谱、疏水作用色谱、混合模式色谱以及新型的温敏色谱等)应用于抗体的分离纯化。本文介绍了近年来国内外各种色谱技术在抗体分离纯化方面所取得的研究进展,并对抗体色谱分离技术的未来发展趋势进行了展望。
关键词
抗体
色
谱
技术
分离纯化
亲和
色
谱
混合模式
色
谱
温敏色谱
综述
Keywords
antibody
chromatographic techniques
separation and purification
affinity chromatography
mixed-mode chromatography
temperature-responsive chromatography
review
分类号
O658 [理学—分析化学]
下载PDF
职称材料
题名
嵌段共聚温敏亲和色谱固定相的制备及其对抗体的分离纯化
3
作者
郭冬梅
夏一然
Mujeeb ur RAHMAN
王建忠
刘家玮
白泉
机构
合成与天然功能分子教育部重点实验室
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第12期1045-1051,共7页
基金
国家自然科学基金(22174108,21874106)
陕西省自然科学基金(2021JM-310).
文摘
抗体药物在癌症治疗和免疫诊断中起着重要作用,但抗体的分离纯化通常采用酸性洗脱,易导致抗体聚集失活等问题。本研究以硅胶为基质,以温敏嵌段聚合物聚[(N-异丙基丙烯酰胺)-b-4-乙烯基吡啶](P[NIPAM-b-4VP])为间隔臂,以4-巯基乙基吡啶(MEP)为配基,制备了一种嵌段共聚温敏亲和色谱固定相SiO_(2)-P[NIPAM-b-4VP]-MEP,并以牛血清白蛋白(BSA)和γ-球蛋白为模型蛋白,对制备的温敏亲和色谱固定相的色谱性能进行了表征。分别考察了流动相盐浓度和温度对二者分离性能的影响。结果表明,在40℃时该固定相只选择性保留γ-球蛋白,而不保留BSA;在5℃时采用含0.6 mol/L NaCl的Tris-HCl(pH 8.0)缓冲溶液进行洗脱,γ-球蛋白的质量回收率为92.7%。该固定相对γ-球蛋白的吸附量为(71.5±2.1)mg/g(n=3),是传统温敏亲和色谱固定相SiO_(2)-PNIPAM-MEP的2倍。将该固定相用于人血清中IgG的分离纯化,仅通过改变流动相温度和盐浓度即可一步实现对抗体的分离纯化,纯度大于97.4%±0.7%。上述结果表明该温敏亲和色谱固定相不仅对抗体具有特异的选择性,而且洗脱条件温和,绿色环保,从根本上解决了传统亲和色谱采用酸性洗脱易使抗体蛋白变性失活的难题。该技术在抗体药物的分离纯化和工业生产中具有重要的应用价值。
关键词
温敏色谱
亲和
色
谱
抗体分离
聚(N-异丙基丙烯酰胺)
4-乙烯基吡啶
Keywords
temperature-responsive chromatography
affinity chromatography
antibody separation
poly(N-isopropylacrylamide)
4-vinylpyridine
分类号
O658 [理学—分析化学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
新型聚合物单分散温敏色谱固定相的制备及其在生物大分子分离中的应用
欧阳康龙
孙彦璞
龚波林
《分析化学》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
下载PDF
职称材料
2
色谱技术在抗体分离纯化中的应用进展
刘家玮
唐长伟
夏一然
白泉
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
下载PDF
职称材料
3
嵌段共聚温敏亲和色谱固定相的制备及其对抗体的分离纯化
郭冬梅
夏一然
Mujeeb ur RAHMAN
王建忠
刘家玮
白泉
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
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