新疆规模化牛场温氏支原体(附红细胞体)的调查

为了解新疆两个规模化牛场温氏支原体(附红细胞体)的流行情况,本研究采集了不同年龄段牛(<6月龄犊牛、后备母牛、成年母牛、育肥牛)的血液样品共152份,利用PCR方法扩增血液样品中的温氏支原体16S rRNA部分基因序列,两个牛场各选取3份PCR产物测序后分析其与温氏支原体参考株(AF016546)的同源性并统计温氏支原体的感染情况;采用Mega7.0软件对扩增出的16S rRNA部分基因与Genbank数据库里登录的温氏支原体分离株相应基因序列构建进化树分析其遗传进化关系;利用相关性检验分析牛特征性临床症状与温氏支原体阳性检出率的相关性。结果显示,152份血液样品中有59份样品扩增出约750 bp的目的基因片段。测序分析结果显示本研究获得的16S rRNA基因序列与温氏支原体分离株FJ375309.1、MG948625.1的16S rRNA基因序列同源性达100%,与温氏支原体参考株(AF016546)同源性达99.16%。结果表明,59份血液样品检测到温氏支原体,阳性检出率为38.82%(59/152),A场阳性检出率为65.0%(52/80),B场阳性检出率为9.7%(7/72)。不同年龄段牛的阳性检出率分别为:成年母牛(13.82%,21/152)>后备母牛(13.15%,20/152)>育肥牛(7.89%,12/152)>犊牛(3.95%,6/152)。系统发育树显示,本研究所测的16S rRNA基因序列与温氏支原体中国丰都分离株(FJ375309.1)亲缘关系最近。相关性检测结果显示,温氏支原体阳性检出者与其临床症状(主要是消瘦、贫血)呈弱相关性。阳性检出率较高的成年母牛和后备母牛为温氏支原体在规模化养殖场的持续流行提供了传染源。本研究证实了温氏支原体在新疆规模化牛场的流行。

重庆地区山羊嗜血支原体(附红细胞体)感染率调查及危险性因素评估

为调查山羊嗜血支原体(附红细胞体)在重庆地区的感染率并评估危害其感染的因素,本研究将采集于重庆14个区县的共1191份山羊血液样本,分别采用染色镜检和PCR方法进行检测,并对不同养殖方式和地理条件进行分析。结果显示:山羊嗜血支原体感染率为16.1%,其中丘陵地区感染率(13.7%)低于山区(18.6%),规模化养殖场感染率(14.3%)低于农户散养(17.1%)。危险性因素分析结果显示:山区山羊嗜血支原体感染率是丘陵地区的1.43倍(OR1.43,95%CI1.05-1.95;χ2=5.13,d.f.=1,p=0.02),并且差异显著;农户散养山羊嗜血支原体感染率是规模化养殖的1.23倍(OR1.23,95%CI0.88-1.71;χ2=1.51,d.f.=1,p=0.22),差异不显著。表明不同的地理条件与山羊嗜血支原体感染率密切相关。

牛双芽巴贝斯虫、附红细胞体和支原体混合感染的诊治

为了对贵州省贵定县某种牛养殖场种牛死亡原因进行确诊,采用流行病学调查、临床症状观察、病理剖检、细菌分离培养、寄生虫和支原体检测等方法对发病死亡的种牛进行诊断。结果表明:根据流行病学调查、病理剖检初步诊断送检的病死种牛疑似血液原虫、支原体感染后支原体病原核酸检测出特异性条带;血涂片染色镜检观察到大量附红细胞体,感染率为80%(8/10),且红细胞内有典型双芽巴贝斯虫虫体,感染率为40%(4/10)。确诊造成该种牛养殖场种牛发病死亡的原因为双芽巴贝斯虫、附红细胞体和支原体混合感染。

山羊支原体、革兰氏阳性杆菌、附红细胞体混合感染的实验室诊断

为查明某养殖小区饲养山羊的死亡原因,采集13份病羊的血清、2头病死羊的内脏病料和血涂片进行实验室检测诊断。结果:布鲁氏杆菌虎红平板凝集试验阳性率为0%(0/13);羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体阳性检出率为0%(0/13);山羊痘病毒血清免疫抗体阳性检出率为61.5%(8/13);山羊支原体阳性检出率为100%(2/2);姬姆萨染色镜检可见边缘不整齐的红细胞;细菌分离培养、革兰氏染色镜检出革兰氏阳性杆菌,分离细菌对氟苯尼考、利福平、多西环素敏感。结果表明:养殖小区山羊死亡原因是由山羊支原体、革兰氏阳性杆菌、附红细胞体混合感染所致。

浅析猪附红细胞体与肺炎支原体混合感染的防控

猪附红细胞体病与猪支原体肺炎是养猪业常见疾病，这两种病单独发病时诊断不难，一旦混合感染后，会给诊断和治疗带来很大困难。我们在对黔北黑猪规模化养殖进行流行病学调查研究中，发现了猪附红细胞体与肺炎支原体混合感染的病例，现作如下分析：

血清学和分子生物学流行病学调查揭示了微小支原体/附红细胞体是海南岛主要猪嗜血支原体

猪支原体Mycoplasma suis和微小支原体M.parvum是猪附红细胞体病的两种常见病原。迄今为此,海南省未见猪附红细胞体病的病原类型和流行病学的报道。本研究为了调查海南省猪附红细胞体病的流行情况和病原类型,利用普通PCR、实时定量PCR和免疫诊断快速检测试纸条对猪附红细胞体病进行了检测。利用通用引物对附红细胞体/支原体的16S rRNA和23S rRNA基因进行PCR扩增和测序,并做进一步的系统发育树分析,以此鉴定猪附红细胞体/支原体的种类。结果表明,海南的样品中6.4%(15/233)的猪感染了M.parvum,而中国大陆地区如北京、贵州、福建省感染的猪附红细胞体/支原体种类为M.suis,感染率分别为2.1%(2/95)、0.4%(1/218)和4.2%(2/47),海南岛猪感染的猪附红细胞体/支原体的优势种类与中国其他地区的优势种类不同。三种诊断方法中,实时定量PCR和免疫诊断快速检测试纸条检测比普通PCR检测更为灵敏。然而,尽管鉴定了海南省的猪携带了M.parvum,但需要进一步的研究来了解该病原的进化、致病性和疾病传播特性。

牛附红细胞体与支原体混合感染的诊治

为了确诊某养牛场牛死亡的原因,根据发病情况、临床症状,结合实验室检查结果:血涂片吉姆萨染色镜检发现附红细胞体,支原体核酸检测呈阳性,诊断牛发病死亡的原因为附红细胞体与支原体混合感染。

牛支原体与附红细胞体混合感染病例的实验室诊断

为查明贵州省安顺市某养殖场牛群发病死亡的原因,采集病料进行支原体核酸检测、血液原虫检查以及细菌分离培养。结果:肺脏样品PCR扩增出351 bp的牛支原体目的基因条带,血液样品姬姆萨染色镜检观察到大量附红细胞体,未分离培养出细菌。结论:根据病牛临床症状、病理变化和实验室检测结果,确诊为牛支原体与附红细胞体混合感染。

温氏附红细胞体16S rRNA基因的序列测定和分析

从自然感染附红细胞体的湖北黄牛无菌采集血液,分离附红细胞体并提取病原基因组,用血营养菌的16SrRNA基因的通用引物进行PCR扩增,得到长约1.5 kb的扩增片段,将其克隆到pMD18-T载体后进行测序和分析。结果表明该片段全长为1 471 bp(GenBank收录号为AY946266),同源性分析表明该序列与Neimark公布的温氏附红细胞体(AF016546)的16S rRNA基因序列同源性达到98.7%,证实该病原为温氏附红细胞体,从分子生物学水平证实了温氏附红细胞体在湖北省的存在。将该序列与5种支原体、14种血营养菌及边缘无浆体等的相应序列进行比较,建立系统发育树,结果表明温氏附红细胞体同边缘无浆体的关系较远,而与肺炎支原体组的亲缘关系较近。

羊肺炎支原体与附红细胞体混合感染的诊治

羊肺炎支原体病是由支原体引起羊的一种高度接触性传染病,以发热、咳嗽、浆液性和纤维蛋白渗出性肺炎以及胸膜炎为特征.羊附红细胞体病是由附红细胞体寄生于羊红细胞和血浆中而引起的一种以贫血、黄疸和发热为主要症状的传染病.这两种病不同品种、年龄的羊只均易感发病,尤以3岁以下羊只最易感,发病无明显季节性,气候骤变、寒冷潮湿、营养缺乏、羊群拥挤、饲养管理和卫生条件不良,常促使本病的发生与流行.这两种病单独发病时诊断不难,混合感染后给诊断和治疗带来一定困难.一年多来,笔者共诊治31起发病,经流行病学调查,临床诊断、病理剖检,结合实验室诊断,确诊为羊肺炎支原体与附红细胞体混合感染,报告如下.

温氏附红细胞体部分16S rRNA基因的序列测定和分析

从确诊为附红细胞体感染的黄牛无菌采集血样,抽提附红细胞体基因组DNA,用实验设计的能扩增多种动物血营养菌部分16SrRNA基因的通用引物进行PCR扩增,结果扩增出大小约为370bp的DNA片段。PCR产物序列测定和系统进化分析显示,实验获得的核苷酸序列为温氏附红细胞体的16SrRNA基因,与国外报道的温氏附红细胞体的同源性为97%。反映出不同地理株的温氏附红细胞体存在一定的遗传差异,为牛附红细胞体病的诊断和分子流行病学研究提供科学依据。

温氏附红细胞体病PCR诊断方法的建立及其应用

为建立特异、敏感、快速的温氏附红细胞体诊断方法,根据温氏附红细胞体16S rRNA基因序列(GenBank登录号为AY946266),设计1对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法能特异性地扩增温氏附红细胞体16S rRNA基因序列的特异性片段,检测温氏附红细胞体最低DNA量为0.178 fg。利用该方法对湖北省、江苏省和黑龙江省温氏附红细胞体病感染情况进行了流行病学调查,结果显示阳性感染率分别为10.3%、5.3%、45.8%,说明温氏附红细胞体在湖北省、江苏省和黑龙江省均存在,流行病学调查显示湖北省感染率较高、流行较广。

温氏附红细胞体生物学特性研究

以自然感染温氏附红细胞体(E.wenyoni)的牛血作为试验材料,采用镜检法观察了E.wenyoni的形态学特征,应用SDS-PAGE和免疫印迹技术分析了E.wenyoni的抗原蛋白组成。结果显示,E.wenyoni呈多形性,具有折光性,游离于血浆中的E.wenyoni具有运动性,附着于红细胞上似乎停止运动,但实际上却能使红细胞发生震颤;SDS-PAGE结果显示,E.wenyoni主要由9种蛋白组成,分子量范围为24ku～150ku,应用免疫印迹试验筛选出了3种特异性蛋白质,分子量分别为147.31ku,49.03ku和35.72ku。本试验为准确诊断牛附红细胞体感染提供了可靠依据。

猪附红细胞体病与支原体肺炎混合感染的诊治报告

猪附红细胞体病是由附红细胞体引起的一种传染病,而猪支原体肺炎(猪气喘病)是由猪肺炎支原体引起的以气喘、咳嗽为主要发病特征的慢性、接触性呼吸道传染病,两者混合感染猪后诊治难度加大,给养殖业造成巨大的经济损失。本文基于实践案例,对这两种病原混合感染的诊治进行综述,以期为广大养殖户提供参考。

8种药物对温氏附红细胞体的体外杀灭效果

为确定药物对温氏附红细胞体病的体外杀灭效果,在70 mL RPMI-1640培养液中添加30 mL新生牛血清,2.0 g葡萄糖,0.20 g NaHCO3,37℃,体积分数为0.05的CO2条件下,进行了咪唑苯脲、磷酸伯氨喹、盐酸多西环素、敌百虫、延胡索酸泰妙菌素、依沙吖啶、三氮眯、大蒜素注射液等8种药物对温氏附红细胞体的体外药物杀灭试验。结果表明,咪唑苯脲、磷酸伯氨喹的杀灭效果最好,且在有效浓度范围内对红细胞的影响较轻微;敌百虫、依沙吖啶的杀灭效果也很好,但是对红细胞的损伤较咪唑苯脲和磷酸伯氨喹重。因此,治疗温氏附红细胞体病应首选咪唑苯脲或磷酸伯氨喹,其次为敌百虫和依沙吖啶。

猪附红细胞体病与猪支原体肺炎混合感染的诊治

猪附红细胞体病是由附红细胞体寄生于猪红细胞和血浆中而引起的一种以贫血、黄疸和发热为主要症状的人畜共患的传染病。而猪支原体肺炎又叫猪霉形体肺炎或猪气喘病,是猪肺炎支原体引起的一种慢性呼吸道病,以咳嗽和气喘为主要症状,不同品种、年龄的猪只均易感病,尤以哺乳仔猪和幼猪易感,发病无明显季节性,气候骤变、猪群拥挤、饲养管理和卫生条件不良,常促使本病的发生与流行。这两种病单独发病时诊断不难,一旦混合感染后,会给诊断和治疗带来很大困难,现将一起猪附红细胞体病与猪气喘病混合感染的诊治介绍如下。

温氏附红细胞体对奶牛免疫水平的影响

选择5头感染温氏附红细胞体的奶牛和5头健康奶牛,分别进行红细胞C3b受体花环率、免疫复合物花环率、B淋巴细胞EA花环率、外周血中T淋巴细胞百分率、淋巴细胞转化率的测定。结果表明,感染温氏附红细胞体的奶牛其红细胞C3b受体花环率、免疫复合物花环率、B淋巴细胞EA花环率、外周血中T淋巴细胞百分率、淋巴细胞转化率明显低于健康奶牛,且二者在0.01水平上有差异。这说明温氏附红细胞体对奶牛的免疫水平有明显的抑制作用。

温氏附红细胞体PCR检测方法的建立

本研究旨在建立1种快速准确检测温氏附红细胞体感染的分子生物学诊断方法。根据温氏附红细胞体的16S rRNA基因参考序列的保守区,利用软件Primer Premier 5.0设计合成了1对特异性引物,对温氏附红细胞体的基因组DNA进行PCR检测。结果表明,扩增出1段985bp的DNA序列,EcoRⅠ酶切鉴定得到2条500bp左右的条带,与预期结果一致,说明该方法扩增出了温氏附红细胞体的特异性条带。通过敏感性、特异性、重复性和临床样品检测试验证明,该方法具有特异、灵敏、快速的优点。结果提示,所建立的方法具有较高的特异性和灵敏性,可用于牛附红细胞体病诊断和流行情况监测。

肉牛传染性支原体与附红细胞体混合感染的诊治

本文总结了肉牛传染性支原体与附红细胞体混合感染的流行病学调查、临床症状、病理剖检、临床检查和病原的分离鉴定,并提出了改善牛群引进的监督管理措施、坚持“自繁自养”的饲养管理原则和做好牛只的疾病预防工作等措施。