温经汤加味对EM肾虚血瘀证大鼠局部微环境MMP-9、TNF-α、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ的影响及其意义

目的探讨子宫内膜异位症(Endometosis,EM)肾虚血瘀证大鼠异位病灶局部MMP-9,TNF-α,CollagenⅠ、CollagenⅢ表达水平,以及温经汤加味对其干预作用及机制。方法SPF级雌性未孕健康SD大鼠设为空白组;构建肾虚血瘀证大鼠模型,造模成功后,设为假手术组(仅开腹);其余大鼠以自体内膜移植法构建EM肾虚血瘀证模型,造模成功后的大鼠分为模型组(不用药物干预)、阳性药(达那唑)组、温经汤加味组(低、中、高3种剂量)。阳性药对照组给予达那唑63 mg·kg^(-1)连续4周灌胃,中药低、中、高剂量组分别以5 g·kg^(-1)、10 g·kg^(-1)、20 g·kg^(-1)连续4周灌胃。取各组大鼠子宫内膜组织观察组织病理变化;免疫组化法(IHC)检测各组大鼠子宫内膜组织MMP-9,TNF-α的蛋白表达;蛋白免疫印迹法(WB)、实时荧光聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测各组大鼠子宫内膜组织MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、CollagenⅢ基因表达。结果与空白组、假手术组比较,EM肾虚血瘀证模型组大鼠在位、异位内膜组织中MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白及其基因表达在模型组子宫内膜组织升高(P<0.01);与模型组比较,阳性药对照组、温经汤加味治疗组大鼠MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白及其基因表达水平均降低(P<0.01或P<0.05)。结论局部微环境免疫抑制微血管新生导致异位内膜侵袭是EM发生、发展过程中的重要病理表现,MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、CollagenⅢ过度表达可能促进了这一过程的发生、发展;温经汤加味通过"逆转"MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、CollagenⅢ等细胞因子异常升高,起到了解除局部微环境免疫抑制、阻断微血管新生的作用,在治疗EM肾虚血瘀证过程中表现出确切的疗效。

针灸辅以温经汤加味治疗子宫腺肌病临床观察

目的:观察艾灸辅以温经汤加味治疗子宫腺肌病的疗效。方法:132例分为对照组和研究组各66例,对照组用温经汤加味内服,研究组用针灸辅以温经汤加味内服。结果:治疗后研究组子宫内膜厚度、体积均低于对照组(P<0.05),治疗后研究组PBAC、VAS评分均低于对照组(P<0.05),治疗后研究组性激素E_(2)、LH、FSH和CA125水平均低于对照组(P<0.05),研究组RI高于对照组,Vmax、Vmin均低于对照组(P<0.05),中医证候评分研究组低于对照组(P<0.05),研究组总有效率高于对照组(P<0.05)。结论:针灸辅以温经汤加味治疗子宫腺肌效果较好。

联用悬灸法与温经汤加味治疗青春期原发性痛经的效果观察

目的 :观察联用悬灸法与温经汤加味治疗青春期原发性痛经的临床效果。方法 :将2013年4月至2017年7月贵州省盘州市中医院门诊收治的56例青春期原发性痛经患者随机分为治疗组(30例)与对照组(26例)。为对照组患者应用扑炎痛进行治疗,为治疗组患者联用悬灸法与温经汤加味进行治疗,然后对比分析两组患者的临床疗效。结果:与对照组患者相比,治疗组患者治疗的总有效率较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 :联用悬灸法与温经汤加味治疗青春期原发性痛经可取得理想的效果,能有效改善患者的临床症状。

温经汤加味对EM肾虚血瘀型大鼠JAK2/STAT3信号通路及其下游因子的影响

目的:探讨温经汤加味对子宫内膜异位症(EM)肾虚血瘀型大鼠的治疗作用及其机制研究。方法:从105只SPF级雌性未孕健康SD大鼠中随机选取10只作为空白组,余采用复合因素法构建肾虚血瘀型大鼠模型,造模成功后随机抽取10只为假手术组,仅开腹,不缝内膜,余采用自体内膜移植法构建EM肾虚血瘀型大鼠模型。从造模成功的56只大鼠中随机选取50只大鼠随机分为模型组、达那唑组(63 mg·kg^(-1))及温经汤加味低、中、高剂量组(5,10,20 g·kg^(-1)),每组10只,每日灌胃1次,连续4周。取各组内膜组织进行苏木素-伊红(HE)染色,观察组织病理变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组血清上清液中白细胞介素-10(IL-10),白细胞介素-17(IL-17)含量;测量治疗前后各造模组异位灶长(D1),宽(D2),高(D3),并计算异位灶体积;免疫组化(IHC)检测各组大鼠内膜组织中Janus激酶2(JAK2),信号转导与转录活化因子3(STAT3),磷酸化STAT3(p-STAT3),血管内皮生长因子(VEGF),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),血小板反应素-1(TSP-1)蛋白表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测VEGF,TNF-α以及TSP-1蛋白表达情况。结果:镜下病理观察可见空白组大鼠子宫内膜腺体细胞排列整齐,腺体及间质细胞生长良好;与空白组比较,模型组子宫内膜结构完整,呈子宫腔状或环形封闭式结构,内有囊肿形成,上皮为立方状或柱状上皮,大部分上皮细胞有分泌现象,间质致密,基质呈少许纤维化,血管增生密集,并可见到少量腺体及炎细胞浸润。与空白组比较,模型组血清中IL-10含量显著降低(P<0.01),IL-17含量显著升高(P<0.01);模型组内膜组织中JAK2,STAT3,p-STAT3,VEGF,TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.05),TSP-1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,温经汤加味各剂量组大鼠血清中IL-10含量显著升高(P<0.01),IL-17含量显著降低(P<0.01),异位灶体积显著减小(P<0.01);温经汤加味高、中剂量组内膜组织中JAK2,STAT3,p-STAT3,TNF-α,VEGF蛋白水平均明显降低(P<0.05),TSP-1蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论:温经汤加味具有抑制EM肾虚血瘀型大鼠异位灶侵袭作用,其机制可能与干预JAK2/STAT3信号通路过度激活所介导的免疫屏障、阻断微血管新生功能有关。

温经汤加味对EM肾虚血瘀证大鼠局部微环境Caspase-8,MMP-9,E-cadherin,N-cadherin的影响

目的:探讨温经汤加味对子宫内膜异位症(EM)肾虚血瘀证大鼠的干预作用及其机制研究。方法:SPF级雌性未孕大鼠随机选出正常组,其余大鼠采用"冰水浸泡+皮下注射盐酸肾上腺素法"进行肾虚血瘀证造模,造模结束后,仅开腹不进行内膜移植大鼠,设为假手术组,其余大鼠以自体内膜移植法进行EM造模,EM肾虚血瘀证造模成功大鼠随机分为阳性药组及温经汤加味(中药)低、中、高剂量组。中药低、中、高剂量组分别以5,10,20 g·kg^(-1)灌胃,每日给药1次,连续4周;阳性药选取达那唑63 mg·kg^(-1)灌胃,每日给药1次,连续4周。4周后,取各组大鼠内膜组织(异位、在位)进行苏木素-伊红(HE)染色,观察其组织病理学变化;免疫组化(IHC)法、蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(Caspase-8),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)及神经钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Caspase-8,MMP-9,E-cadherin,N-cadherin mRNA表达。结果:经IHC法和Western blot法,与假手术组比较,EM肾虚血瘀证模型组大鼠在位、异位内膜组织中MMP-9,N-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.01),Caspase-8,E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,达那唑组、中药低、中、高剂量组大鼠在位、异位内膜组织中MMP-9,N-cadherin蛋白明显降低(P<0.05,P<0.01),Caspase-8,E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。经Real-time PCR法检测,与假手术组大鼠比较,模型组大鼠在位、异位内膜组织中MMP-9,N-cadherin mRNA表达显著升高(P<0.01),Caspase-8,E-cadherin mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组大鼠在位内膜比较,达那唑组、中药高、中剂量组在位、异位内膜组织MMP-9,N-cadherin mRNA表达明显降低,Caspase-8,E-cadherin mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:温经汤加味能够通过调节Caspase-8,MMP-9,E-cadherin,N-cadherin等因子水平异常表达,改善EM肾虚血瘀证大鼠免疫抑制、阻断微血管新生,从而起到治疗EM的作用;以上微观指标的变化有望成为体现疾病(EM),证候(肾虚血瘀证)及病理机制(免疫抑制、微血管新生)的重要标志物。