温肾健脾活血泄浊方对慢性肾脏病大鼠肾脏转化生长因子-β1-Smad2/3信号通路的作用

目的探讨金洪元教授温肾健脾活血泄浊方对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)实验大鼠的肾脏组织内转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1-Smad2/3信号通路的作用。方法将56只大鼠随机分为空白组13只,其余43只大鼠灌服腺嘌呤溶液制备CKD大鼠模型,经造模鉴定后,取10只空白组大鼠作为空白对照组,40只造模成功大鼠随机分为模型组、中药低、中、高剂量组,每组10只。中药低、中、高剂量组分别给予的灌服浓度为9.18 g/(kg·d)、18.36 g/(kg·d)、36.72 g/(kg·d),空白对照组及模型组大鼠均灌服等体积生理盐水,连续灌服4周。经干预后,观察大鼠一般情况;运用酶联免疫吸附法检测大鼠尿液24小时尿蛋白定量、肌酐、TGF-β1及血清TGF-β1、胱抑素-C及肌酐定量水平;苏木精—伊红染色、马松(Masson)染色观察大鼠肾脏病理改变;蛋白质免疫印迹法检测大鼠肾组织内TGF-β1、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、Smad7的蛋白表达水平。结果各组大鼠经温肾健脾活血泄浊方干预后,与模型组相比,中药低、中、高剂量组大鼠尿液中TGF-β1、肌酐、24小时尿蛋白定量水平显著下降(P<0.05);血清中TGF-β1、胱抑素-C及肌酐定量显著降低,且中药低、中、高剂量组大鼠血清TGF-β1、胱抑素-C及肌酐定量水平均随着中药剂量增加而降低,具有负相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,中药低、中、高剂量组大鼠肾组织中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白定量显著降低,且随着中药剂量增加而降低,但差异无统计学意义;Smad7随中药剂量增加而升高,且差异有统计学意义(P<0.05),具有正相关性。苏木精—伊红染色结果示:中药各剂量组大鼠肾小管病变程度较模型组显著降低,纤维化面积较模型组明显减少;中药低、中、高剂量组较模型组大鼠肾组织结构紊乱程度降低,肾间质炎性细胞浸润减少,纤维组织减少;中药中、高剂量组较中药低剂量组大鼠肾组织炎性细胞浸润稍显减少,肾组织结构稍显整齐。马松染色结果示:中药低、中、高剂量组较模型组大鼠肾脏间质纤维组织增生程度均降低,纤维化比例减少,但组间肾脏间质纤维组织增生程度差异不明显。结论温肾健脾活血泄浊方可有效逆转CKD大鼠肾组织损伤,并且可能是通过TGF-β1-Smad2/3通路下调TGF-β1的水平来发挥作用,进而改善CKD大鼠肾组织纤维化。