温肾通络方联合经皮椎体后凸成形术治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折临床研究

目的探讨温肾通络方联合经皮椎体后凸成形术(percutaneous kyphoplasty,PKP)对急性骨质疏松性椎体压缩性骨折(osteoporotic vertebral compression fracture,OVCF)肾虚血瘀型患者的临床疗效。方法选取2022年1月—2022年12月在本院骨科接受PKP治疗的80例急性OVCF肾虚血瘀型患者,采用随机数字表法随机分为观察组及对照组,每组40例。对照组予以PKP和抗骨质疏松治疗,观察组则在对照组的基础上联合服用温肾通络方。治疗1个月后,对比2组患者治疗前后的中医证候积分、视觉模拟评分法(visual analogue scale,VAS)、Oswestry功能障碍指数(Oswestry disability index,ODI)、日本骨科协会(Japanese Orthopaedic Association,JOA)评分,血清钙(Calcium,Ca)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和25-羟维生素D_(3)[25-hydroxyvitamin D_(3),25-(OH)D_(3)]水平变化及临床疗效、不良反应发生率。结果治疗后,观察组患者总有效率为95.0%,明显高于对照组的75.0%(P<0.05)。观察组中医证候积分、ODI评分、VAS评分、血清ALP水平明显低于对照组(P<0.05),观察组JOA评分、血清25-(OH)D_(3)水平明显高于对照组(P<0.05)。结论温肾通络方联合PKP治疗急性OVCF肾虚血瘀型患者可显著缓解患者临床症状,减轻腰背疼痛,提高胸腰椎功能,改善骨代谢指标,临床疗效显著。

温肾通络方治疗老年原发性骨质疏松症的临床观察

目的观察温肾通络方治疗老年原发性骨质疏松症的临床疗效。方法选择老年原发性骨质疏松症患者100例,随机分成2组,每组50例,治疗组给予口服温肾通络方;对照组给予口服乐力钙片,12周后观察两组患者骨密度值和中医症候积分变化情况。结果治疗组和对照组的总有效率分别为86%和70%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论温肾通络方治疗老年原发性骨质疏松症疗效肯定。

温肾通络方足浴治疗尿毒症腿不宁综合征30例

目的:观察温肾通络方足浴治疗尿毒症腿不宁综合征(restless leg syndrome,RLS)的临床疗效。方法:将60例尿毒症RLS患者随机分为对照组和治疗组,每组各30例。对照组在一般治疗的基础上针灸足三里、阳陵泉、委中、承山等穴位并结合推拿或按摩下肢,治疗组在一般治疗的基础上使用温肾通络方足浴。观察两组患者的临床疗效及治疗前后临床症状积分变化情况。结果:对照组有效率为73.33%,治疗组有效率为86.67%,两组患者临床疗效比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后积分低于治疗前,且治疗组低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:温肾通络方足浴治疗尿毒症RLS综合征疗效较好,可改善患者的临床症状。

温肾通络方佐治早中期糖尿病肾病30例疗效观察

目的:以温肾通络法为指导,观察自拟温肾通络方在糖尿病肾病早中期患者中的临床疗效。方法:将我院2017年7月—2019年7月收治的糖尿病肾病早中期患者60例随机分为对照组和观察组各30例。对照组给予控制血糖、血压、调脂等常规治疗;观察组在此基础上联合温肾通络方治疗。经治8周后,检测两组患者尿微量白蛋白(mALb)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、内生肌酐清除率(Ccr)等指标,以及中医证候评分改善情况,比较两组临床疗效。结果:经治后,两组患者mAlb、BUN、SCr、CCr均下降,且观察组下降幅度更显著(P<0.05);两组Ccr均升高,且观察组升高更明显(P<0.05);观察组中医证候评分改善优于对照组(P<0.05)。结论:温肾通络方在早中期糖尿病肾病治疗中疗效显著,可明显减少尿蛋白,延缓肾功能恶化,缓解水肿等临床症状。

温肾通络方加减联合环磷酰胺治疗特发性膜性肾病对患者Klotho蛋白、HO-1的影响

目的:观察温肾通络方加减联合环磷酰胺治疗特发性膜性肾病对患者Klotho蛋白、血红素氧合酶-1(HO-1)的影响。方法:选取我院于2018年5月~2020年5月收治的特发性膜性肾病患者120例,根据治疗方法分为两组,每组60例。两组患者均给予糖皮质激素治疗,对照组给予环磷酰胺治疗,观察组给予温肾通络方加减联合环磷酰胺治疗。记录两组中医症候积分、免疫指标、Klotho蛋白、HO-1、24h尿蛋白定量(24h-UTP)、白蛋白(ALB)的变化,并统计两组总有效率。结果:观察组的总有效率为95.00%,高于对照组的83.33%,组间比较发现,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后进行组内比较发现,两组Treg/Th17比值逐渐上升(P<0.05),Th17比例逐渐下降(P<0.05),进一步组间比较发现,观察组Treg/Th17比值高于对照组(P<0.05),Th17比例低于对照组(P<0.05)。治疗后进行组内比较发现,两组ALB逐渐上升(P<0.05),HO-1、24h-UTP逐渐下降(P<0.05),观察组Klotho蛋白较治疗前逐渐上升(P<0.05),进一步组间比较发现,观察组ALB高于对照组(P<0.05),HO-1、24h-UTP低于对照组(P<0.05),Klotho蛋白与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后进行组内比较发现,两组中医症状积分逐渐下降(P<0.05),进一步组间比较发现,观察组中医症状积分低于对照组(P<0.05)。结论:温肾通络方加减联合环磷酰胺治疗特发性膜性肾病可改善免疫功能指标,降低HO-1、24h-UTP的表达,减轻症状,提高疗效。

自拟温肾通络方治疗原发性痛经的临床观察

目的分析自拟温肾通络方治疗原发性痛经的临床效果。方法选取64例原发性痛经患者,随机分为观察组和对照组,每组32例。观察组患者给予自拟温肾通络方进行治疗,对照组患者采用布洛芬缓释片进行治疗。比较两组患者治疗效果及治疗前后症状评分、月经血中前列腺素F2α(PGF2α)水平。结果观察组患者的治疗总有效率100.00%显著高于对照组的81.25%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组症状评分为(2.14±1.05)分,对照组症状评分为(4.65±2.74)分;两组症状评分均显著低于治疗前,且观察组显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组月经血中PGF2α为(2.14±1.05)μg/ml,对照组月经血中PGF2α为(4.65±2.74)μg/ml;两组月经血中PGF2α水平均低于治疗前,且观察组显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论自拟温肾通络方治疗原发性痛经的临床效果较好,可有缓解患者痛经等症状,临床应用价值较高。

温肾通络止痛方抑制巨噬细胞衰老改善BMSC成骨分化和老年性骨质疏松模型小鼠骨丢失的研究

目的探讨温肾通络止痛方调控巨噬细胞衰老对老年性骨质疏松症(Senile osteoporosis,SOP)的干预作用。方法利用过氧化氢制备衰老巨噬细胞模型并随机分为对照组、模型组、含药血清低剂量组、含药血清高剂量组。β-半乳糖苷酶染色以及qPCR、Western blot检测衰老指标p21和p53的mRNA及蛋白表达水平,探讨含药血清对巨噬细胞衰老的影响。使用活性氧(Reactive oxygen species,ROS)染色和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测巨噬细胞线粒体功能。qPCR检测巨噬细胞极化相关分子白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)、CD206、一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)的mRNA水平,免疫荧光检测巨噬细胞极化相关分子精氨酸酶(Arginase,ARG1)和iNOS的蛋白表达,评估含药血清对巨噬细胞极化的影响。qPCR检测成骨相关指标骨钙蛋白(Osteocalcin,OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen typeⅠα1,Col1a1)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)的mRNA水平以及ALP染色和茜素红染色,评估含药血清处理的巨噬细胞条件培养基对骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)成骨分化的影响。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、温肾通络止痛方低剂量组、温肾通络止痛方高剂量组,D-半乳糖制备SOP小鼠模型。Micro-CT分析小鼠股骨微结构,HE染色检测小鼠股骨病理变化,Western blot检测小鼠胫骨衰老相关分子p21、p53和成骨相关指标OCN、Runx2蛋白表达水平,qPCR检测小鼠胫骨衰老相关分子p21、p53 mRNA和巨噬细胞极化相关分子IL-6、iNOS、CD206、IL-10 mRNA的表达水平,评估温肾通络止痛方对小鼠SOP模型的影响。结果与模型组相比,温肾通络止痛方含药血清干预后,衰老阳性细胞数量明显减少,p21和p53 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。此外,含药血清可显著抑制H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞ROS的产生(P<0.05,P<0.001)、线粒体膜电位下降(P<0.05)。含药血清处理后,巨噬细胞M1相关基因iNOS的mRNA表达下调(P<0.01),M2相关基因CD163和CD206 mRNA表达上调(P<0.05),iNOS荧光强度显著降低(P<0.01),ARG1的荧光强度显著增加(P<0.05)。含药血清处理的巨噬细胞条件培养基可增加ALP阳性细胞数(P<0.01,P<0.001)、茜素红阳性面积(P<0.05),以及升高成骨相关基因Runx2、Col1a1和OCN mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。Micro-CT结果显示,与模型组相比,温肾通络止痛方组小鼠股骨BMD、BV/TV、Tb.N显著增加(P<0.05,P<0.01,P<0.001),Tb.Sp显著降低(P<0.05,P<0.01);HE结果显示,骨小梁明显改善,数量增多变宽。此外,温肾通络止痛方可显著抑制D-半乳糖诱导的小鼠胫骨衰老相关基因p21和p53 mRNA和蛋白上调(P<0.05,P<0.001,P<0.0001),促进成骨相关指标OCN、Runx2蛋白表达(P<0.01,P<0.0001),促进M1相关基因IL-6和iNOS下调(P<0.05),同时可促进M2相关基因IL-10和CD206表达(P<0.05,P<0.01)。结论温肾通络止痛方可能通过抑制巨噬细胞衰老,促进BMSC成骨分化,从而发挥抗骨质疏松效应。

温肾通络止痛方对小鼠H型骨微血管内皮细胞/骨髓间充质干细胞共培养体系的影响

背景:骨骼依赖血管与骨细胞之间的密切连接来维持完整性,骨骼处在生理低氧环境中,因此在低氧环境下研究血管生成与骨生成具有重要意义。目的:探究在低氧环境下温肾通络止痛方对H型骨微血管内皮细胞/骨髓间充质干细胞共培养体系的影响及相关机制。方法:运用酶消化法及流式分选技术,分选小鼠H型血管特异型骨微血管内皮细胞;应用骨髓贴壁法分离获取小鼠骨髓间充质干细胞;采用Transwell小室以及缺氧培养工作站建立两种细胞低氧共培养体系,使用50,100μg/m L质量浓度温肾通络止痛方冻干粉进行干预;通过划痕迁移实验与管形成实验评估共培养体系内H型骨微血管内皮细胞的成血管功能;通过碱性磷酸酶染色与茜素红染色评估共培养体系内骨髓间充质干细胞的成骨分化能力;使用Western Blotting与q-PCR检测共培养体系内H型骨微血管内皮细胞中PDGF/PI3K/AKT信号轴相关分子的蛋白表达及mRNA表达。结果与结论:(1)与常氧组相比,低氧组H型骨微血管内皮细胞划痕迁移率及新生血管长度均显著升高(P<0.05),骨髓间充质干细胞成骨分化能力增强(P<0.05);PDGF/PI3K/AKT信号轴相关分子的蛋白、mRNA表达升高(P<0.05);(2)与低氧组相比,经不同质量浓度温肾通络止痛方干预后H型骨微血管内皮细胞划痕迁移率及新生血管长度进一步提高(P<0.05),骨髓间充质干细胞成骨分化能力更强(P<0.05),PDGF/PI3K/AKT信号轴相关分子的蛋白、mRNA表达也进一步升高(P<0.05)。结果表明:低氧条件下H型血管生成及骨生成可能与PDGF/PI3K/AKT信号轴有关,而温肾通络止痛方可能通过激活PDGF/PI3K/AKT信号轴促进“H型血管生成-骨生成”作用从而防治骨质疏松症。

温肾通络止痛方治疗骨质疏松症临床分析

目的观察温肾通络止痛方治疗骨质疏松症的临床效果,总结分析其组方特点,进一步指导临床。方法方便选取2018年1月-2019年12月于南京市江宁医院门诊就诊的100例骨质疏松症患者,依据治疗方案的不同,分为两组,每组50例,对照组应用钙尔奇D联合阿法骨化醇治疗,观察组在对照组的基础上服用温肾通络止痛方治疗,比较两组临床效果、中医症候积分及治疗前后骨密度(BMD)及疼痛视觉模拟评分(VAS)。结果观察组有效率84%,明显高于对照组的64%,差异有统计学意义(χ^2=5.198,P=0.023);治疗后观察组患者的中医证候积分(10.54±0.51)分,对照组(16.25±0.41)分,两组较治疗前中医证候积分均显著下降(对照组:t=81.821,P<0.01;观察组:t=77.254,P<0.01),观察组与对照组相比较差异有统计学意义(t=61.702,P<0.01);治疗后观察组患者的BMD值(0.76±0.03)g/cm^3,对照组(0.69±0.12)g/cm^2,观察组较治疗前有明显提高,差异有统计学意义(t=6.420,P<0.01),与对照组相比差异有统计学意义(t=4.002,P<0.01);治疗后观察组VAS评分(1.25±0.41)分,对照组(3.53±0.56)分,两组较治疗前均有明显下降,差异有统计学意义(对照组:t=37.691,P<0.01;观察组:t=31.327,P<0.01),且观察组较对照组结果更加显著,差异有统计学意义(t=23.230,P<0.01)。结论温肾通络止痛方治疗骨质疏松症,能够提高患者骨密度,改善患者疼痛,缓解患者症状,具有良好的临床疗效。

“温肾通络止痛方”治疗原发性骨质疏松症的疗效观察及处方优化

目的:评价"温肾通络止痛方"3种方剂组成治疗骨质疏松症的临床疗效及安全性,筛选出最优处方。方法:采用多中心、随机、对照、盲态评价的原则,选择符合纳入标准的原发性骨质疏松症患者75例,随机分为A、B、C3组各25例,分别予以"温肾通络止痛方"试验A方、试验B方、试验C方治疗。3组治疗时间均为2个月,对3组治疗前、治疗后2个月的临床症状、骨密度及骨代谢生化指标进行比较,以观察临床疗效;疗程结束后,比较治疗前后的血、尿、粪常规、肝、肾功能、心电图等安全性指标的变化,以观察其安全性。结果:(1)3组"温肾通络止痛方"在改善骨质疏松患者临床症状方面均有显著效果,其中试验B组最佳。(2)3组"温肾通络止痛方"在疗程内无法明显改善骨质疏松患者骨密度。(3)3组"温肾通络止痛方"血清骨钙素水平未明显变化,试验C组血清降钙素水平未明显变化,试验A组与试验B组血清降钙素水平较治疗前升高,3组甲状旁腺激素水平均较治疗前降低。(4)安全性指标方面,一般情况良好,未观察到明显全身毒性等反应,血、尿、粪及心电图检查均无明显异常改变。结论:"温肾通络止痛方"A、B、C三方治疗骨质疏松症有明显疗效,能改善临床症状,无明显不良反应,能有效防治骨质疏松症。方剂优化筛选结果提示"温肾通络止痛方"B方剂疗效最佳。

基于网络药理学及体内实验探讨温肾通络止痛方对原发性骨质疏松症小鼠MAPK信号通路的调节作用

目的:采用网络药理学和体内实验验证的方法探讨温肾通络止痛方治疗原发性骨质疏松症的潜在作用机制。方法:选择TCMSP、TCMID、BATMAN-TCM与OMIM、GeneCards数据库筛选温肾通络止痛方治疗原发性骨质疏松症的有效活性成分及靶标基因;利用Cytoscape 3.7.2建立其网络关系图;通过STRING在线分析平台构建PPI网络并运用NetworkAnalyzer拓扑学分析进一步筛选核心靶点;借助DAVID进行GO和KEGG富集分析,筛选具有统计学差异的GO过程与KEGG通路(P<0.05)。以去卵巢的方式建立原发性骨质疏松症模型,21只SPF级C57BL/6J雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、温肾通络止痛方组,假手术组切除卵巢周围相等质量的脂肪组织,模型组和温肾通络止痛方组切除双侧卵巢;灌胃相应药物8周后,苏木素-伊红(HE)染色观察股骨组织形态学变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠血清IL-6、TNF-α的表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-timePCR)检测IL-6、TNF-α、Runx2 mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测p-ERK、ERK、p-JNK、JNK的蛋白表达。结果:网络药理学方法筛选出温肾通络止痛方防治原发性骨质疏松症的有效活性成分包括山柰酚、槲皮素、木犀草素等203个,靶标基因包括IL-6、TNF-α、MAPK8等154个。KEGG富集分析预测温肾通络止痛方主要通过PI3K/Akt、TNF、MAPK等信号通路发挥抗骨质疏松作用。HE染色结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠骨小梁稀疏,骨髓腔间隙较大,温肾通络止痛方可改善模型小鼠骨小梁密度,减小骨髓腔间隙。与模型组比较,温肾通络止痛方能够降低模型小鼠血清中IL-6、TNF-α的表达水平(P<0.01),降低IL-6、TNF-αmRNA表达(P<0.01),升高Runx2的mRNA的表达(P<0.01),并同时降低p-ERK/ERK、p-JNK/JNK的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:温肾通络止痛方治疗原发性骨质疏松症具有多成分、多靶点、多途径的特点,可能通过IL-6、TNF-α靶点调控MAPK信号通路影响炎症反应等来发挥防治原发性骨质疏松症的作用。

温肾通络止痛方通过AMPK/mTOR信号通路调控自噬对老年性骨质疏松模型小鼠的干预作用

目的探讨温肾通络止痛方对老年性骨质疏松(SOP)小鼠模型的干预作用和机制。方法将60只6月龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、复方低、中、高剂量组及阿仑膦酸钠组,每组10只。采用腹腔注射D-半乳糖(每天150 mg/kg,8周)制备SOP小鼠模型,8周后复方低、中、高剂量组每天灌胃0.105、0.210、0.420 g/10 kg温肾通络止痛方,对照组及模型组灌胃等体积生理盐水,阿仑膦酸钠组每周灌胃1.53 mg/kg阿仑膦酸钠,共12周。酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清中骨保护素(OPG)和β-骨胶原交联(β-CTX)的水平,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察胫骨组织病理学变化,micro-CT检测小鼠股骨骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁(TB)数、TB厚度和TB分离度;Western Blot法检测小鼠股骨骨髓中p16、p53、哺乳动物ATG6同源蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、AMPK、磷酸化哺乳动物雷帕霉菌靶蛋白(p-m TOR)、m TOR的蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组小鼠血清中OPG水平显著下降,β-CTX水平升高(P<0.05,P<0.01);小鼠TB数量减少,间隙增宽变细多断裂;Micro-CT扫描结果显示,模型组小鼠股骨组织中TB数量、TB厚度、BMD、BV/TV、TB模式因子均显著降低(P<0.05,P<0.01),TB分离度显著升高(P<0.01);模型组小鼠股骨中的衰老相关标记蛋白p16、p53、p-mTOR/mTOR的比值表达均显著升高(P<0.05),自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ、p-AMPK/AMPK比值下降均降低(P<0.01)。与模型组比较,复方中、高剂量组及阿仑膦酸钠组SOP模型小鼠血清中OPG水平增高,β-CTX水平下降(P<0.05,P<0.01);股骨中的衰老相关标记蛋白p16、p53蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);复方高剂量组及阿仑膦酸钠组TB数量、TB厚度、BMD、BV/TV、TB模式因子均显著增加(P<0.05),TB分离度显著降低(P<0.05)。p-AMPK/AMPK比值明显升高,p-m TOR/m TOR的比值降低(P<0.01)。结论温肾通络止痛方能够提高SOP小鼠的BMD,改善骨微结构,促进骨形成,其机制可能与调节AMPK/m TOR信号通路从而提高自噬水平有关。

温肾通络止痛方通过SENP1-SIRT3通路调控巨噬细胞极化改善骨髓间充质干细胞成骨分化和去睾丸小鼠的骨丢失

目的:探讨温肾通络止痛方是否通过巨噬细胞极化促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化从而发挥抗骨质疏松效应。方法:Micro-CT分析小鼠股骨的骨微结构,HE染色检测小鼠股骨病理变化,免疫组化检测小鼠股骨中OCN、CD86、CD206、SIRT3蛋白表达量,免疫荧光检测小鼠股骨中CD206、F4/80蛋白的表达量。免疫荧光检测RAW264.7细胞iNOS、CD206的荧光强度。qPCR检测RAW264.7细胞CD206、IL-6、iNOS mRNA表达水平。Western Blot检测SENP1、SIRT3蛋白表达量。ALP染色和茜素红染色评估含药血清处理的巨噬细胞条件培养基对BMSCs成骨分化的影响。免疫荧光和Real-time qPCR检测巨噬细胞极化水平。结果:与模型组比较,复方和阿仑膦酸钠处理后BMD、BV/TV增加(P<0.01),OCN阳性细胞数量增加(P<0.05),而脂多糖(LPS)激活M1巨噬细胞后可逆转以上作用(P<0.05,P<0.01)。与对照组比较,模型组CD86阳性细胞数目增加,CD206阳性细胞数目减少(P<0.01);复方和阿仑膦酸钠干预之后,CD86表达减少,CD206表达增加(P<0.01),而LPS干预逆转了复方对巨噬细胞极化的影响(P<0.01)。与模型组比较,含药血清组iNOS、IL-6表达下调(P<0.05,P<0.01),CD206表达上调(P<0.05,P<0.01)。含药血清处理的巨噬细胞条件培养基可增加ALP阳性细胞数、钙化结节数量。复方及其含药血清可促进巨噬细胞SENP1、SIRT3蛋白表达(P<0.05,P<0.01)、小鼠股骨SIRT3的荧光强度(P<0.05)。SENP1抑制剂Momordin Ic可阻断复方对M2标志分子CD206的影响(P<0.05)。结论:温肾通络止痛方可能通过SENP1-SIRT3通路调控巨噬细胞极化改善BMSCs成骨分化从而发挥抗骨质疏松效应。

温肾通络止痛方调控巨噬细胞极化对破骨细胞分化的影响

目的观察温肾通络止痛方对巨噬细胞极化的作用,探讨其对破骨细胞分化的影响。方法利用脂多糖建立炎性巨噬细胞模型,小鼠骨髓单核细胞体外建立破骨细胞诱导模型。通过CCK8法检测不同浓度温肾通络止痛方冻干粉对巨噬细胞增殖的影响。将实验分为正常组、模型组、中药组,通过ELISA检测巨噬细胞培养基上清中IL-6、TNF-α、TGF-β、IL-10的表达,利用蛋白免疫印迹法检测NF-κB信号通路相关蛋白及INOS、TNF-α蛋白的表达。采用TRAP染色及F-actin免疫荧光检测温肾通络止痛方对破骨细胞分化的影响。结果CCK8结果显示温肾通络止痛方冻干粉48h 125μg/mL对巨噬细胞的增殖效果最好(P<0.01)。酶联免疫法检测结果表明,与正常组比较,模型组巨噬细胞上清液中IL-6、TNF-α的表达升高,IL-10、TGF-β的表达降低;经温肾通络止痛方干预后IL-6、TNF-α的表达降低,IL-10、TGF-β的表达升高,且各组间差异具有统计学意义(P<0.01)。蛋白免疫印迹法结果表明,与正常组比较,模型组中p-p65/p65、TNF-α、INOS蛋白表达升高(P<0.01),IκBα的表达降低(P<0.01),与模型组比较,中药组中p-p65/p65、TNFα(P<0.01)、INOS(P<0.01)的蛋白表达降低,IκBα的表达升高(P<0.05)。TRAP和F-actin检测结果显示,各中药组均能减少破骨细胞数目,减小F-actin环面积,并减少环的数目,且各组之间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论温肾通络止痛方可能通过抑制NF-κB信号通路的相关蛋白的表达,抑制巨噬细胞M1极化,从而抑制破骨细胞的分化。

温肾通络止痛方对炎性骨丢失小鼠MAPK信号通路的影响

目的:观察温肾通络止痛方对炎性骨丢失小鼠骨微结构和骨吸收的影响,探讨其抗炎性骨丢失的作用机制。方法:将50只小鼠随机分为正常组,模型组,阿仑膦酸钠组,温肾通络止痛方低、高剂量组,每组10只。腹腔注射脂多糖(5 mg/kg,1次/周)构建小鼠炎性骨丢失模型。采用HE和Micro CT方法观察股骨结构,ELISA法检测血清中IL-6、IL-1β、ALP、TRAP的表达量,RT-PCR法检测胫骨组织中NFATC1、CTSK mRNA的表达,Western blot法检测胫骨组织中JNK、ERK、p38、NFATC1、CTSK蛋白表达。结果:与模型组比较,温肾通络止痛方高、低剂量组均可改善骨小梁密度,减小骨髓腔间隙,缓解小鼠骨质流失;增加3D BMD、BV/TV、Tb.Th,降低Tb.Sp;降低血清中IL-1β、IL-6、ALP、TRAP的表达(P<0.01);降低NFATC1、CTSK mRNA的表达水平(P<0.05),并抑制NFATC1、CTSK、p38、ERK、JNK蛋白表达(P<0.01)。结论:温肾通络止痛方能够显著改善炎性介导的小鼠骨质流失,其作用机制可能与MAPK信号通路有关。