基于“脑-肠轴”理论探究温脾开窍通络方治疗老年性痴呆的临床疗效及与肠道菌群的相关性

目的基于“脑-肠轴”理论探究温脾开窍通络方治疗老年性痴呆的临床疗效及与肠道菌群的相关性。方法选择2020年5月—2022年7月门诊治疗收集的40例老年性痴呆患者,以随机数字表法分为治疗组(20例)与对照组(20例)。对照组接受常规西医治疗,治疗组在对照组基础上接受温脾通络开窍方治疗。两组均治疗8周,对比两组中医证候评分、认知功能、肠道菌群相关指标、炎症反应、不良反应及临床疗效。结果治疗后,两组主症、次症及总评分均降低(P<0.05),且治疗组更低(P<0.05)。治疗后,两组简易智能精神状态检查量表(Mini-mentalstateexamination,MMSE)评分均升高(P<0.05),但两组MMSE评分比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组血浆5-羟色胺水平均升高(P<0.05),但两组治疗后血浆5-羟色胺水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组血清白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactorα,TNF-α)水平均降低(P<0.05),且治疗组更低(P<0.05)。两组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组总有效率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于“脑-肠轴”理论探究温脾开窍通络方可改善老年性痴呆患者的认知功能,疗效显著,减轻炎症反应,调节肠道菌群,且安全性良好。

基于线粒体功能探讨温脾通络开窍方治疗阿尔茨海默病的分子机制

目的基于生物信息学、网络药理学、免疫浸润分析和机器学习等方法并结合实验验证探讨温脾通络开窍方调节线粒体功能治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的分子机制。方法获取差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)进行相关性分析、KEGG分析以及免疫浸润分析。对公用数据集样品聚类分类后分析免疫细胞差异,构建机器学习模型、筛选特征基因并构建风险预测列线图模型。建立AD大鼠模型,进行水迷宫实验、HE染色及RT-qPCR检测,对数据挖掘的结果进行动物实验验证。结果DEGs相互联系、调节免疫系统并调控P53(tumor protein 53,p53)信号通路。结果显示有13个差异表达基因,并和免疫细胞在亚型分布上有差异。最佳机器学习模型是支持向量机模型(support vector machine,SVM),评分前5的特征基因是MAOB、MAOA、CASP9、Bcl-2、ABAT。风险预测列线图模型的准确性高,预测误差的风险小。动物实验结果显示中药组大鼠学习认知功能障碍和神经损伤比模型组明显减轻,特征基因的mRNA相对表达量与数据挖掘的结果具有一致性。结论温脾通络开窍方可能是通过13个差异性分子靶点相互网络调控、P53信号通路和免疫调控作用实现调节线粒体功能以缓解AD症状。

温脾通络开窍方通过抑制TNF-α/ROS/JNK分子改善阿尔兹海默症大鼠海马区病变

目的探讨温脾通络开窍方对阿尔兹海默症(AD)模型大鼠海马区病变的影响及其相关的分子机制。方法脑立体定位注射药物诱导方法建立SD大鼠AD模型;给予模型动物低(4 g/kg),中(8 g/kg),高(16 g/kg)剂量的温脾通络开窍方(灌胃);模型动物给予石杉碱甲做阳性对照组;假手术组及模型对照组动物给予相同体积的双蒸水。术后3周开始给药。给药3周后取动物脑海马区组织,HE染色观察各组动物脑海马CA3区病理变化;免疫印迹(Western blot)检测TNFα/ROS/JNK的蛋白表达。结果HE结果显示与假手术组相比,AD组大鼠海马CA3区组织结构及细胞形态及细胞变性发生显著变化;AD海马组织中TNFα/ROS/JNK蛋白表达显著上调;温脾通络开窍方显著改善AD大鼠海马CA3区细胞变性和组织结构的改变;显著降低AD诱导的TNFα/ROS/JNK蛋白表达上调。温脾通络开窍方对AD大鼠海马区病变的改善及蛋白分子的作用呈剂量依赖性,高剂量的温脾通络开窍方与石杉碱甲作用相当。结论温脾通络开窍方通过抑制TNF-α/ROS/JNK分子改善阿尔兹海默症大鼠海马区病变。

温脾通络开窍方对Aβ_(1-42)诱导小胶质细胞炎性因子的影响

目的:研究温脾通络开窍方对Aβ1-42诱导小胶质细胞生成和释放炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α的抑制作用。方法:实验分为5组:空白对照组,模型组,温脾通络开窍方高、中、低浓度组。除空白对照组外,余组均予Aβ1-42诱导BV-2细胞释放IL-1β、IL-6及TNF-α等炎性细胞因子,温脾通络开窍方予不同浓度进行干预,用ELISA法检测各组IL-1β、IL-6及TNF-α含量的变化。结果:与模型组比较,温脾通络开窍方细胞上清液中IL-1β、IL-6及TNF-α含量均显著降低,尤以高浓度作用最明显(P<0.01)。结论:温脾通络开窍方对活化后BV-2细胞IL-1β、IL-6及TNF-α的分泌有显著的抑制作用,提示良好的抗炎作用可能是温脾通络开窍方治疗老年性痴呆的药理机制之一。

温脾通络开窍方对老年性痴呆模型大鼠记忆能力、β-分泌酶的影响

目的:观察温脾通络开窍方对老年性痴呆模型大鼠记忆能力、β-分泌酶的影响。方法:采用冈田酸诱导亚急性老年性痴呆模型,随机分为模型组,西药组,温脾通络开窍方高剂量组、中剂量组、低剂量,对照组。药物治疗2个月后,采用Morris水迷宫实验观察大鼠的学习记忆能力,电镜下观察大鼠海马CA1区的病理变化,Western blot法检测脑组织β-分泌酶的表达。结果:(1)Morris水迷宫定位航行实验逃避潜伏期比较:对照组逃避潜伏期短于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);西药组,温脾通络开窍方高剂量组、中剂量组、低剂量组逃避潜伏期短于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);西药组与温脾通络开窍方高剂量组、中剂量组、低剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Morris水迷宫空间探索实验游泳距离及跨越平台次数比较:模型组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);模型组与西药组,温脾通络开窍方高剂量组、中剂量组、低剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05);西药组与温脾通络开窍方高剂量组、中剂量组、低剂量组,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)β-分泌酶的活性比较:对照组与西药组,温脾通络开窍方高剂量组、中剂量组、低剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05);模型组与温脾通络开窍方高剂量组、中剂量组、低剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05);西药组与温脾通络开窍方高剂量组、中剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)神经元细胞凋亡率比较:对照组与西药组,模型组,温脾通络开窍方中剂量组、低剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05);模型组与温脾通络开窍方高剂量组、中剂量组、低剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05);西药组与温脾通络开窍方高剂量组、中剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:温脾通络开窍方能减少β-分泌酶活性,抑制神经细胞凋亡率,从而改善痴呆大鼠学习记忆能力及减轻海马神经元损伤。

温脾通络开窍方通过影响NF-κB通路改善阿尔兹海默症大鼠的认知功能研究

目的探讨温脾通络开窍方对通过NF-κB通路对阿尔兹海默症(AD)模型大鼠的认知功能的影响及机制。方法药物诱导方法建立SD大鼠AD模型;术后3周灌胃给予低(4g/kg),中(8g/kg),高(16/kg)剂量的温脾通络开窍方(灌胃);给药3周。水迷宫记录动物的学习、记忆行为;免疫印迹(Western blot)检测海马组织中NF-κB通路分子IKK-α/β,NIK,NF-κB p65和NF-κB p50的含量。结果水迷宫实验结果显示温脾通络开窍方能够改善AD大鼠的空间记忆及行为异常;降低AD动物海马组织IKK-α/β,NIK,NF-κB p65和NF-κB p50表达量;作用呈剂量依赖性。结论温脾通络开窍方可能通过抑制NF-κB通路分子改善阿尔兹海默症大鼠的认知功能。

温脾通络开窍方调节铁死亡治疗阿尔茨海默病的分子机制

目的:利用生物信息学、网络药理学、免疫浸润分析和机器学习方法,探讨温脾通络开窍方调节铁死亡治疗阿尔茨海默病(AD)的可能分子机制。方法:通过网络药理学方法获取“温脾通络开窍方-AD-铁死亡”潜在的共同分子靶点。基于GSE33000数据集筛选共同分子靶点的差异表达基因(DEGs)并分析其相关性、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集情况和免疫浸润状态;对GSE33000的样本进行聚类分型;对亚型免疫细胞进行差异分析;构建机器学习模型筛选DEGs关键基因;构建风险预测列线图模型并验证;对关键基因进行临床相关性分析。结果:共获得15个“温脾通络开窍方-AD-铁死亡”共同分子靶点,其中13个是DEGs。13个DEGs具有相互调控、介导MAPK等信号通路和免疫调节作用,且和免疫细胞在各亚型AD患者分布有所差异。GLM机器学习模型的预测性能最高,其重要性评分前5名的关键基因为TP53、HSPB1、RELA、MYC和NFE2L2。其中,HSPB1与AD患者年龄负相关。列线图预测模型准确性较高,预测误差风险较小。结论:温脾通络开窍方调节铁死亡治疗AD可能与TP53、HSPB1、RELA等分子靶点及其介导的MAPK等信号通路和免疫调节密切相关。基于分子靶点的GLM模型可较准确诊断AD,亦可间接评估温脾通络开窍方治疗AD的效能。