温郁金、温莪术和醋莪术的寒热药性及其7种挥发性成分的比较研究

目的:验证温郁金、温莪术和醋莪术的寒热药性,探究3者挥发油中7种挥发性成分与其寒热药性的相关性。方法:采用水蒸气蒸馏法提取挥发油并对其含有的7种挥发性成分的含量通过气相色谱法(GC法)进行测定,给予SD雄性大鼠灌服寒凉药构建胃寒实证模型,再分别给予热性药、寒性药、生莪术、醋莪术、生郁金的水煎液治疗。通过观测比较大鼠在造模和给药的全过程中体质量、肛温、进食量、大便粒数和质地的变化,比较温郁金、温莪术和醋莪术的寒热药性。结果:温莪术醋制前后7种挥发性成分的含量差异不明显;温莪术挥发油中1,8-桉叶素、樟脑、龙脑、吉马酮、莪术二酮的含量明显高于温郁金上述成分的含量(P<0.01)。温莪术的生品、醋制品对胃寒导致的腹泻治疗效果弱于热性药的治疗效果,温莪术的生品、醋制品表现为脾胃温性,温郁金的生品会加重腹泻,但致泻效果较寒性药致泻效果弱,温郁金表现为脾胃弱寒性。结论:1,8-桉叶素、樟脑、吉马酮、莪术二酮4种挥发性成分的药理作用与温热药作用一致,且其含量高低与温郁金、温莪术和醋莪术寒热药性变化一致,推测这4种挥发性成分可能是其发挥寒热药性的重要物质基础。

GC-MS法比较温莪术挥发油与水煎液中的挥发性成分

目的利用GC-MS法比较温莪术传统水煎液与挥发油所含挥发性成分的差别,初步探讨水煎剂中的主要化学成分,为温莪术水煎剂临床疗效物质基础研究积累数据,为温莪术挥发油及其制剂的临床用药给予指导。方法采用GC-MS法对温莪术挥发油和水煎液的乙酸乙酯萃取物化学成分进行分析,通过标准谱库检索结合文献分析,确定温莪术挥发油与水煎液乙酸乙酯萃取物中所含的主要挥发性成分,并对二者所含化学成分进行比较。结果从温莪术挥发油中指认出49种化学成分,从温莪术水煎液乙酸乙酯萃取物中指认出28种化学成分,其中仅有莪术二酮(curdi-one)、斯巴醇(spathulenol)和deoxysericealactone等3种成分为二者共有成分。结论温莪术挥发油与水煎液所含挥发性成分存在显著差别,温莪术水煎液的有效成分需进一步研究。

温莪术化学成分的研究

目的 :对温莪术药用有效成分进行研究。方法 :采用溶剂提取 ,D 10 1大孔吸附树脂柱粗分 ,硅胶柱及薄层色谱进行分离纯化 ,物理、化学和波谱学方法鉴定化合物的结构。结果 :分离得 5个化合物 ,莪二酮、新莪二酮、莪术醇、四甲基吡嗪、(R) (+) 1,2 十六烷二醇。结论 :新莪二酮 2和 (R) (+) 1,2 十六烷二醇为首次从温莪术中分离获得 ,后者为姜黄属植物中首次报道 ,并优化了上述其它化合物的分离纯化方法。

温莪术环状含氧倍半萜类化学成分的研究

采用超临界流体CO2萃取(SFE-CO2)技术提取温莪术Curcuma wenyujinY.H.Chen et C.L ing挥发油,用多种色谱和波谱方法对油中主成分进行分离和结构鉴定。结果分离得到5个环状含氧倍半萜类化合物,分别鉴定为:蓬莪术环二烯(Ⅰ)(furanod iene)、莪术二酮(Ⅱ)(curd ione)、莪术双环烯酮(Ⅲ)(curcum enone)、(4S,5S)大=牛儿酮4,5环氧化物(Ⅳ)((4S,5S)-germ acrone-4,5-epoxide)、莪术烯(Ⅴ)(curzerene);其中蓬莪术环二烯含量约占莪术油30%,莪术双环烯酮系首次从温莪术中得到。并对上述5个化合物进行了THP-1细胞分泌TNFα炎症因子抑制作用的体外活性实验,实验结果表明:蓬莪术环二烯和莪术烯对THP-1细胞分泌TNFα炎症因子有明显的抑制作用。

提取技术对温莪术挥发油化学成分及其体外抗肿瘤活性的影响

采用超临界CO2 流体萃取 (SFC)和水蒸气蒸馏法 (SD)提取温莪术挥发油 ,通过GC MS分析比较了提取物的化学成分及其相对含量 ,并研究了其对肺腺癌细胞SPC A 1的体外抗肿瘤活性。结果表明 ,SFC法温莪术挥发油中主要抗肿瘤活性物质莪术二酮、异莪术醇明显高于SD法 ;SFC法温莪术挥发油具有显著的抗肿瘤活性 ,在浓度为 6 2 .5 μg ml时 ,抑制率可达 6 2 .5 7% ,而SD法温莪术挥发油在高浓度下才表现出较弱的抗肿瘤活性 ,当浓度为 5 0 0 μg ml时 ,其抑制率仅为 2 5 .79%。

温莪术HPLC指纹图谱研究

目的采用HPLC法建立温莪术药材的指纹图谱。方法用Kromasil ODS-1(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,乙腈和水为流动相,采用梯度洗脱,体积流量:0.8mL/min,柱温35℃,检测波长244nm。结果建立了HPLC指纹图谱共有模式,并对不同产区的温莪术药材进行了相似度比较。结论温莪术药材中各成分均得到了较好的分离,可作为温莪术药材专属性的指纹图谱。

温莪术挥发性成分的闪蒸-气相色谱-质谱法测定研究

采用闪蒸-气相色谱-质谱法(FE-GC-MS)对温莪术挥发性化合物进行了分析研究,并对主要影响因素如闪蒸温度、样品量和样品粒度等进行优化。结果显示,0.4 mg的粉末样品,在200℃下闪蒸,经色谱分离后得到60余种成分。对FE-GC-MS、水蒸气蒸馏法(SD)-GC-MS和固相微萃取(SPME)-GC-MS这3种方法进行比较,利用质谱解析结合保留指数鉴定出的化合物数量分别为40、38和36种。由FE-GC-MS得到的莪术油主要活性成分如莪术烯、莪术醇、β-榄香烯酮、吉马酮和莪术二酮的含量与SD、SPME法所得结果相近。结果表明,闪蒸法样品用量少而得到的挥发性成分较多,且无需任何前处理。

温莪术油对脂多糖活化巨噬细胞释放一氧化氮的抑制作用

研究温莪术挥发油及其主要有效成分对活化巨噬细胞释放一氧化氮的抑制作用.方法:以脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7释放NO,通过Griess法测定培养上清中NO的释放量并计算抑制率,通过MTT法评价细胞毒性.结果:温莪术挥发油在1-10μg.mL-1浓度范围内对活化的小鼠巨噬细胞释放NO具有明显的抑制作用,并呈现良好的剂量依赖关系.其主要有效成分呋喃二烯、莪术烯、吉马酮与莪术醇对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞释放NO表现出显著的抑制活性,IC50分别为6.5、5.8、9.4、9.9μmol.L-1.结论:呋喃二烯、吉马酮、莪术烯、莪术醇对活化的小鼠巨噬细胞释放NO具有明显的抑制作用,以上结果可为温莪术油的临床应用提供一定的理论基础和科学依据.

不同提取工艺制备的温莪术挥发油对Hela细胞的增殖抑制作用

目的探讨不同提取方法制备的温莪术提取物对Hela细胞的体外增殖抑制作用。方法采用水蒸气蒸馏提取法、CO2超临界萃取提取法、鲜品榨汁提取法分别制备不同浓度(25、50、75μg/mL)的温莪术挥发油,MTT法检测其对宫颈癌Hela细胞的体外增殖抑制作用。结果3种工艺制备的温莪术挥发油对宫颈癌Hela细胞的生长都有明显的抑制作用,抑制率最高可分别达到30.69%±0.17%、32.44%±0.39%和34.75%±0.81%。其中鲜品榨汁提取物的抑制效果最明显,且在50μg/mL时,抑制效果最好。结论温莪术挥发油具有良好的抗肿瘤应用前景,鲜品榨汁提取的挥发油效果最好。

压榨法提取温莪术挥发油收率及药效学研究

目的:探讨压榨法提取温莪术鲜品中挥发油的收率及体外抗肿瘤效果。方法:将温莪术鲜品洗净,直接放入压榨机内压榨提取挥发油,用宫颈癌细胞株(HELA)进行体外试验,浓度为0μg/ml^100μg/ml,时间为24h^96h,环磷酰胺对照,以癌细胞成活率(MTT)作为考察指标,评价药效。结果:温莪术挥发油的粗提油率为5.64%,其抗HELA作用为96h时MTT低于环磷酰胺,以50μg/ml浓度为优。结论:压榨提取法提取温莪术鲜品中的粗挥发油收率可达5.64%,体外抗肿瘤试验表明其MTT在96h时低于环磷酰胺。

温莪术挥发性化学成分分析和指纹图谱研究

目的对10个来源不同的中药温莪术挥发油的化学成分进行定性定量分析,建立指纹图谱。方法采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)并运用化学计量学方法辅助定性,运用"计算机辅助相似性评价系统"软件建立指纹图谱及其共有模式。结果10个样品共鉴定出34个共有组分,主要共有成分为桉叶素(Eucalyptol)、榄香烯(E lem ene)、莪术烯(Curzerene)、β-榄烯酮(β-E lem enone)、吉马酮(Germ acrone)、莪术二酮(Curd ione)、新莪术二酮(Neocurd ione)。所建立指纹图谱共有模式结果良好。结论指纹图谱和定性分析相结合是温莪术质量控制的一种好方法。

温莪术中的愈创木烷型倍半萜

目的对温莪术(Curcuma wenyujin)的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱以及HPLC进行分离和纯化,并依据理化性质和谱学分析鉴定其化学结构。结果从温莪术的体积分数为50%的乙醇溶液提取物中分离得到7个愈创木烷型倍半萜,分别鉴定为zedoarondiol(1)i、sozedoarondiol(2)a、erugidiol(3)z、edoalactone A(4)z、edoalactone B(5)、zedoalactone C(6)和zedoarolide B(7)。结论化合物1-7均为首次从该植物中分离得到。

纤维素酶辅助提取温莪术挥发油工艺条件研究

研究了纤维素酶辅助提取温莪术挥发油工艺条件。对温莪术粒径、纤维素酶用量、酶解时间分别进行单因素考察,根据单因素考察结果设计正交试验,以出油率为指标确定适宜的正交试验参数:温莪术细粉粒径100目、纤维素酶用量20 FPIU.(g温莪术)-1、酶解时间40 m in,该工艺条件下温莪术挥发油提取得率为2.72%,与未添加纤维素酶提取工艺相比,温莪术挥发油提取得率增加了283%,显示了纤维素酶辅助提取挥发油良好的应用前景。

温莪术不同溶剂提取物体外抗氧化活性评价

目的:探讨温莪术不同溶剂提取物体外的抗氧化活性。方法:分别用蒸馏水、95%乙醇、乙酸乙酯等不同极性溶剂提取温莪术中活性物质,采用清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、羟自由基(.OH)、亚铁离子螯合和还原能力等方法考察温莪术不同提取物的抗氧化活性。同时用Folin-Cioeaile法测定不同提取物中的总酚含量,考察总酚含量与抗氧化清除率的关系。结果:DPPH自由基、.OH清除能力及还原能力结果表明95%乙醇及乙酸乙酯提取物在较低的质量浓度显示了较高的清除率;同时总酚含量测定结果显示95%乙醇和乙酸乙酯提取物所含总酚含量较高,这表明这两种溶剂提取物的抗氧化性与其提取物含有较高的酚类密切相关;亚铁离子螯合实验结果显示水提物的螯合效果优于其他溶剂提取物。结论:不同溶剂提取物抗氧化能力差别较大,总酚含量与抗氧化清除率具有相关性。

RP-HPLC法分离分析温莪术油中6种倍半萜类成分

目的:建立反相高效液相色谱法,可同时分离分析温莪术油中6种倍半萜类活性成分(莪术二酮、莪术醇、吉马酮、莪术烯、呋喃二烯和β-榄香烯)。方法:采用RP-HPLC法作为莪术油及其制剂倍半萜类活性成分的检测方法,色谱柱为Kroma-sil KR100-5 C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(90:10):流速:1 mL·min^(-1);检测波长:215 nm。结果:温莪术油中6种倍半萜类成分在同一色谱条件下得到良好分离。莪术二酮、莪术醇、吉马酮、莪术烯、呋喃二烯和β-榄香烯浓度分别在2.66～26.6,3.47～34.7,5.63～56.3,4.22～42.2,10.2～102,7.44～74.4μg·mL^(-1)范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9997),方法平均回收率分别为98.8%,96.5%,101.2%,105.4%,96.6%,95.2%(RSD<3.0%,n=5)。结论:本方法灵敏、专属,重复性好,且可避免倍半萜类中热敏物质的转化,能够真实、准确地反映温莪术油及其制剂的质量。

温莪术对TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨温莪术对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化(epithelial-myofibroblast transdifferentiation,EMT)拮抗作用。方法将体外培养的正常肾小管上皮细胞随机分为6组:正常对照组(C组)、TGF-β1诱导模型组(T组)、温莪术低浓度组(E1组)、温莪术中浓度组(E2组)、温莪术高浓度组(E3组)、盐酸贝那普利组(Y组),除C组外,各组TGF-β1诱导24h后,温莪术各剂量组及Y组加入药物作用48h。运用倒置显微镜观察细胞形态的改变,细胞免疫荧光法、RT-PCR法及ELISA法检测各组NRK-52E细胞EMT过程中细胞骨架成分β-肌动蛋白(β-actin)的分布,α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmus-cleactin,α-SMA)mRNA、E钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)mRNA表达,纤维粘连蛋白(fibro nectin,FN)浓度。结果 TGF-β1诱导3天后,T组细胞出现肥大、拉长,呈梭形,细胞骨架结构β-actin表达增多(P<0.05),胞浆内出现束状纤维样结构,细胞内α-SMA mRNA表达显著上调(P<0.05),E-cadmRNA表达降低(P<0.05),细胞上清液中FN浓度升高(P<0.05)。与T组比较,E1-3组细胞仅见部分呈成纤维样改变,伴随胞浆内β-actin表达及FN浓度的降低(P<0.05),E2-3组细胞内α-SMA mRNA表达升高(P<0.05),E-cadmRNA表达减少(P<0.05),但E1组E-cad及α-SMA mRNA表达量与之比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与E1组比较,E2-3组胞浆内β-actin蛋白表达及FN浓度降低(P<0.05),E3组细胞内E-cadmRNA表达升高伴α-SMA mRNA表达降低(P<0.05)。与Y组比较,E1组细胞浆内β-actin mRNA及细胞上清液中FN浓度均升高(P<0.05),E3组β-actin表达升高(P<0.05),E-cad mRNA表达降低(P<0.05),E1-3α-SMA mRNA表达量则差异无统计学意义(P>0.05)。结论温莪术可抑制TGF-β1诱导的EMT发生,可作为临床治疗慢性肾功能不全的有效药物之一。

石油醚提取过50目和过325目筛温莪术粉挥发油收率比较

目的探讨并比较石油醚回流提取温莪术粗粉和微纳米粉体挥发油的最佳工艺。方法将温莪术粉碎为过50目筛的粗粉与过325目筛的微粉，采用L18（2^1×3^7）表之正交实验设计，以温莪术挥发油的提油率为考察指标，以粉碎度、提取时间、加石油醚质量倍数及提取次数为工艺考察对象。结果以温莪术的挥发油提取率为考察指标，由直观分析可知各因素对提取的影响作用大小依次为提取次数〉加石油醚质量倍数〉提取时间〉粉碎度。方差分析结果表明，在石油醚回流提取温莪术挥发油的工艺中，提取次数和加石油醚的质量倍数对提油率有高度显著影响，提取时间和粉碎度有显著影响。提油率为：2．09％～3．62％，以过325目筛温莪术粉体，加20倍量石油醚，回流2h，提取3次的提油率最高，提油率为3．62％。结论该法的最佳工艺为：过325目筛温莪术微纳米粉体，加加倍质量倍数的石油醚，回流2h，提取3次。

温莪术对大鼠肾纤维化治疗作用的初步研究

目的:观察温莪术对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾纤维化的治疗作用。方法:建立UUO大鼠模型,用温莪术治疗2周,借助HE染色和Masson染色观察大鼠肾脏病理学变化,并计算肾间质相对容量。结果:UUO大鼠肾功能损伤,组织病理显示明显的肾间质纤维化,温莪术给药组大鼠肾间质纤维化程度明显降低,肾间质相对容量明显减少(P<0.05)。结论:温莪术可能具有一定的抗肾纤维化作用。