温运清利法对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织DAG-PKCε信号通路的作用研究

目的探讨温运清利法对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠肝组织甘油二酯(diacylglycerol,DAG)/蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)信号通路的影响。方法高脂饮食饲养SD大鼠8周制备NASH模型,造模成功后,将大鼠随机分为模型组、苓桂术甘汤组、茵陈蒿汤组、合方组(苓桂术等与茵陈蒿汤)、罗格列酮组,共5组,每组10只;另有空白组10只。药物治疗4周后,运用自动生化分析仪检测血清生化指标,HE染色、油红O染色观察肝组织病理,ELISA法检测肝组织DAG,RT-PCR检测PKCεmRNA、TNF-αmRNA,Western blot检测PKCε和TNF-α蛋白的表达。结果 (1)各给药组大鼠一般状况、肝组织脂肪变性和炎症反应程度、血清生化指标等均较模型组有一定的减轻;(2)苓桂术甘汤、合方组、罗格列酮组大鼠肝组织DAG较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01);(3)各治疗组大鼠肝组织PKCεmRNA和蛋白含量均显著降低(P<0.05,P<0.01),茵陈蒿汤组、合方组及罗格列酮组大鼠肝组织TNF-αmRNA和蛋白含量显著降低(P<0.05)。结论温运清利法可能是通过下调肝组织DAG,抑制PKCε表达,降低TNF-α水平,从而对肝内脂质代谢、胰岛素抵抗、炎症损伤起到了调节作用,DAG/PKCε通路有可能成为治疗NASH的新靶点。

温运清利法对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏自噬水平的调节作用

目的:探讨温运清利法对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)小鼠肝脏自噬水平的调控作用。方法:将30只小鼠随机分为空白组、模型组、苓桂术甘汤组(5.005 g·kg^(-1))、茵陈蒿汤组(5.005 g·kg^(-1))、茵陈苓桂术甘汤组(10.01 g·kg^(-1))及易善复组(207.48 mg·kg^(-1))。除空白组外,其余小鼠喂养高脂饲料10周从而建立NAFLD模型。造模成功后,各组小鼠以相应药物灌胃,每日1次,连续4周。检测小鼠血清谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量。HE染色观察小鼠肝脏病理形态,RT-qPCR法与Western blot法检测肝组织微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)、自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)、p62表达水平,透射电镜检测肝细胞内自噬小体、自噬溶酶体数量。结果:HE染色显示,与空白组比较,模型组小鼠肝细胞结构紊乱,伴见脂肪空泡和炎症细胞浸润。与模型组比较,各个药物组小鼠肝细胞内脂肪空泡数量减少,炎症细胞浸润减轻。与空白组比较,模型组小鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C含量升高,HDL-C含量降低(P<0.01)。与模型组比较,各个药物组小鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C含量降低(P<0.05)。与模型组比较,温运清利法治疗组小鼠血清HDL-C含量升高(P<0.05)。Western blot显示,与空白组比较,模型组小鼠肝脏LC3B-Ⅱ、ATG5表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,温运清利法治疗组小鼠肝脏LC3B-Ⅱ、ATG5表达水平升高(P<0.05)。RT-qPCR显示,与空白组比较,模型组小鼠肝脏ATG5 mRNA水平降低,p62 mRNA水平升高(P<0.05)。与模型组比较,温运清利法治疗组小鼠肝脏LC3 mRNA、ATG5 mRNA水平升高,p62 mRNA水平降低(P<0.05)。透射电镜显示,与空白组比较,模型组小鼠肝脏自噬小体、自噬溶酶体数量减少,温运清利法治疗后增加。结论:温运清利法可发挥对NAFLD小鼠的肝脏保护作用,其机制可能与调控肝脏自噬水平有关。

苓桂术甘汤与茵陈蒿汤合方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠Nrf2/ARE信号通路的影响

目的:从氧化应激的角度,观察苓桂术甘汤与茵陈蒿汤合方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠的干预效应,并通过Nrf2/ARE信号通路探讨合方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠的作用机制。方法:将SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,合方组(6.93 g·kg^(-1)),苓桂术甘汤组(3.465 g·kg^(-1)),茵陈蒿汤组(3.465 g·kg^(-1)),莱菔硫烷组(0.5 mg·kg^(-1)),采用高脂饲料法建立NASH模型;高脂饲料饲养8周并同时给药,取材检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)以及血脂总胆固醇(total cholesterol,TC),甘油三酯(triglyceride,TG),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein,HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein,LDL-C)水平,取部分肝组织进行苏木素-伊红(HE)染色,蛋白质免疫印迹(Western blot)与逆转录PCR(RT-PCR)法测定肝脏细胞质接头蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1),核因子E2-关联因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2),醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase-1,NQO1),血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白与mRNA表达水平。结果:给药后,与正常组比较,模型组大鼠血脂TC,TG,HDL-C,LDL-C及血清ALT,AST水平升高,肝脏脂肪变明显,肝脏Keap1表达量降低,Nrf2,NQO1,HO-1蛋白与mRNA表达量升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组血脂TC,TG,HDL-C,LDL-C及血清ALT,AST水平有不同程度降低,肝脏病理学也有不同程度改善,除茵陈蒿汤组变化不明显外,各给药组大鼠肝脏Nrf2,NQO1,HO-1蛋白与mRNA表达量均有不同程度升高(P<0.05,P<0.01);但对于Keap1的表达无明显作用。结论:苓桂术甘汤以及合方可能通过激活Nrf2/ARE信号通路,从而达到改善氧化应激,防治非酒精性脂肪性肝炎的目的。

基于肝脏超声衰减参数观察茵陈苓桂剂干预非酒精性脂肪性肝炎的作用研究

[目的]以痰浊内阻、湿热瘀结型非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者为观察对象,从超声衰减参数(CAP值)、肝功能、血脂水平、中医证候评分、腹部B超等指标来对比茵陈苓桂剂与易善复的临床疗效,探讨温运清利法治疗NASH的作用机理。[方法]收集来源于北京中医药大学东方医院符合诊断标准与纳入标准的痰浊内阻、湿热瘀结型NASH患者72例,随机分为治疗组与对照组,各36例。治疗组给予口服茵陈苓桂剂,每日1剂,早晚饭后1h口服;对照组给予口服易善复,每次2粒(456mg),每日3次,2组均服用3个月。治疗期间2组均进行饮食、运动干预。观察2组患者治疗前后临床症状、CAP值、腹部B超、肝功能、血脂等的变化情况。[结果](1)治疗组改善NASH患者的CAP值优于对照组(P<0.01),提示茵陈苓桂剂对降低肝脏脂肪含量有明显的效果。(2)治疗组改善NASH患者的ALT优于对照组(P<0.01),2组治疗后AST比较差异无统计学意义,二者无明显差别。(3)治疗组临床症候疗效总有效率为93.1%,优于对照组的84.4%(P<0.05)。(4)治疗组在改善右胁胀痛、右胁下痞块、口干口苦的方面优于对照组(P<0.05);在体态丰腴、身目发黄、上腹胀满、大便不爽、恶心欲吐的改善方面与对照组差异无统计学意义。(5)血脂方面,2组治疗效果差异无统计学意义。(6)腹部B超方面,2组疗效差异无统计学意义。[结论]茵陈苓桂剂能够有效治疗痰浊内阻、湿热瘀结型NASH患者的临床症状、降低CAP值、改善肝脏影像学变化、改善肝功能、纠正脂质代谢紊乱,明确了温运清利法既能温化痰浊、清利肝胆,又能改善肝功能及肝脏脂肪含量,恢复整体功能以治其本。