温阳活血解毒复方对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究温阳活血解毒复方(WHJF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移及细胞管形成功能的影响,从细胞层面探讨该治疗动脉粥样硬化机制。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、温阳活血解毒复方低、中、高剂量组(剂量分别为10.35,31.05,93.15 g·kg^(-1)),于第4天首次灌胃2 h后采血制备含药血清,采用CCK8法、Transwell迁移实验、b FGF诱导细胞管形成实验分别观察含药血清对HUVECs增殖、迁移及细胞管形成功能的影响。结果温阳活血解毒复方含药血清对HUVECs的增殖有抑制作用,与空白对照组比较,低、中、高剂量组的含药血清对HUVECs的抑制率均明显升高(P<0.05),且两两比较差异有统计学意义(P<0.05),呈浓度依赖型。在迁移方面,温阳活血解毒复方组迁移细胞数减少,与空白对照组比较,高剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。在细胞管形成方面,与模型组比较,温阳活血解毒复方组细胞管数明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,低、高剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。结论温阳活血解毒复方含药血清可抑制HUVECs的增殖、迁移及细胞管形成,起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用;此外,其可能与b FGF产生协同作用,共同促进新生血管成熟,发挥稳定斑块的作用。

温阳活血解毒复方对人脐静脉内皮细胞VEGFs/VEGFRs通路的影响

目的研究温阳活血解毒复方(WHJF)对血管内皮生长因子(VEGFs/VEGFRs)信号通路的影响,从分子层面探讨其治疗动脉粥样硬化(AS)的机制。方法将SD大鼠随机分为空白对照组(C组)、温阳活血解毒复方低、中、高剂量组(L、M、H组,剂量分别为10.35、31.05、93.15 g·kg^(-1)),于第4天首次灌胃2 h后采血制备含药血清,采用免疫印迹法(Western Blot)及逆转录-聚合酶链式反应(q RT-PCR)法分别观察含药血清对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的VEGFs/VEGFRs信号通路中各信号分子及其基因表达的影响。结果温阳活血解毒复方含药血清对VEGFs/VEGFRs信号通路有抑制作用。在蛋白表达方面,与空白对照组比较,高剂量组中血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)和磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(pERK)的表达量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组中pERK的表达量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);通路中其他信号分子的表达量无明显减少,差异无统计学意义(P>0.05)。在基因表达方面,与空白对照组比较,温阳活血解毒复方组血管内皮生长因子亚型A、B(VEGFA、VEGFB)及血管内皮生长因子受体1、2(VEGFR-1、VEGFR-2)的mRNA表达量无明显减少,差异无统计学意义(P>0.05)。结论温阳活血解毒复方含药血清可能通过下调VEGFR-2及下游分子pERK的表达,对VEGFs/VEGFRs信号通路发挥抑制作用,从而直接影响细胞DNA合成功能,减少血管新生,起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用。

不同条件温阳活血解毒复方血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

【目的】探讨不同条件温阳活血解毒复方含药血清(YBTR)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖影响的差异。【方法】体外培养HUVECs细胞。含药血清制备:将32只SD大鼠(雌雄各半)随机分成生理盐水组及低、中、高剂量组(灌胃剂量分别为10.35、31.05、93.15 g·kg-1,每日2次)4组,分别在4个时间点(大鼠喂养第4天首次灌胃1 h、2 h后,第6天首次灌胃1 h、2 h后,以下分别用D3H1、D3H2、D5H1、D5H2表示)每组各取1只雌性大鼠和雄性大鼠采血制成含药血清。采用CCK8法观察各组含药血清对HUVECs增殖能力的影响。【结果】自不同性别大鼠和不同时间点采集的药物血清作用HUVECs后的细胞增殖抑制率比较,差异均有统计学意义(P性别=0.000<0.01,P时间=0.000<0.01),时间和性别的交互作用有统计学意义(P时间×性别=0.001<0.01),其中D3H2、D5H1随性别的不同而不同(PD3H2×性别=0.000<0.01、PD5H1×性别=0.002<0.01)。随着D3H2雌性含药血清剂量的增加,其对HUVECs的增殖抑制作用也逐渐增加,其组间比较差异有统计学意义(P<0.05),整体趋势呈浓度依赖性。在雌性大鼠中,不同浓度组的含药血清对HUVECs的增殖抑制作用,在D3H2达到峰值后均出现下降;而在雄性大鼠中,低、中剂量组含药血清在D5H1达到峰值,高剂量组则在D3H1达到峰值。【结论】选择雌性的大鼠在D3H2采血制备的温阳活血解毒复方含药血清对HUVECs的增殖抑制作用最佳。