温阳消癥方调控LncRNA MEG3对TGF-β_(1)诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子的影响

目的:探讨温阳消癥方对TGF-β_(1)诱导的人近端肾小管上皮细胞LncRNA MEG3的调控作用及对纤维化因子的影响。方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分为对照组、TGF-β_(1)组、TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组、TGF-β_(1)+14 mg/ml温阳消癥组,MTT法检测细胞增殖,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)表达,蛋白质印迹法检测α-SMA、FN、CTGF蛋白表达。结果:3.5、7、14 mg/ml温阳消癥不影响细胞增殖,35 mg/ml组细胞增殖明显降低(P<0.01);与对照组比较,TGF-β_(1)组中α-SMA、FN、CTGF mRNA、LncRNA MEG3及FN、CTGF蛋白表达显著升高(P<0.01),α-SMA蛋白表达升高(P<0.05);与TGF-β_(1)组比较,两个温阳消癥方治疗组α-SMA、FN、CTGF mRNA、LncRNA MEG3、FN蛋白表达,及TGF-β_(1)+14 mg/ml温阳消癥组α-SMA、CTGF蛋白表达均显著降低(P<0.01),TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组α-SMA、CTGF蛋白表达降低(P<0.05);与TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组相比,TGF-β_(1)+14 mg/ml温阳消癥组α-SMA、CTGF mRNA及CTGF蛋白表达均显著降低(P<0.01),FN mRNA及LncRNA MEG3表达降低(P<0.05)。结论:温阳消癥方可下调LncRNA MEG3的表达,抑制TGF-β_(1)诱导的HK-2细胞纤维化,其抑制纤维化的作用可能和调控LncRNA MEG3的表达有关。

温阳消癥方对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化的影响

目的:研究温阳消癥方对单侧输尿管结扎小鼠肾功能及肾组织病理的影响。方法:32只C57小鼠随机抽取8只作为假手术组,其余24只采用单侧输尿管结扎法制作肾间质纤维化模型。造模成功后随机分为模型组、缬沙坦组、温阳消癥方组,每组8只,分组给药,治疗2周后眼眶采血并测定血清肌酐、尿素氮,同时取肾组织进行HE、Masson染色,观察肾脏病理改变。结果:与假手术组相比,模型组的血清肌酐、尿素氮水平明显升高(P <0. 001),肾间质纤维化改变明显,胶原染色阳性率百分比升高(P <0. 001);与模型组比较,缬沙坦组和温阳消癥方组的血清肌酐、尿素氮水平均有明显下降(P <0. 001),肾组织纤维化程度较轻,胶原染色阳性率百分比下降(P <0. 001);温阳消癥方组疗效优于缬沙坦组。结论:温阳消癥方能改善UUO小鼠的肾功能,减轻肾间质纤维化,其效果好于缬沙坦胶囊。

温阳消癥方对5/6肾切除小鼠肾功能及肾组织病理的影响

目的:观察温阳消癥方对5/6肾切除小鼠肾功能、24 h尿蛋白定量及肾组织病理改变的影响。方法:随机从32只小鼠中取24只制作5/6肾切除慢性肾衰竭肾纤维化模型,2周后根据血清肌酐值将24只小鼠分为模型组、代文组和温阳消癥方组,另8只作为假手术组。治疗8周后,测定所有小鼠血清肌酐、尿素氮和24 h尿蛋白定量,并观察肾组织病理改变。结果:治疗8周后,模型组小鼠血清肌酐、尿素氮,24 h尿蛋白定量及肾组织胶原阳性率百分比均较假手术组上调(P<0.001);与模型组相比,代文组、温阳消癥方组血清肌酐、尿素氮,24 h尿蛋白定量及肾组织胶原阳性率百分比均下调(P<0.001),而上述指标在两治疗组间尚差异无统计学意义(P>0.05)。结论:温阳消癥方能够下调5/6肾切除小鼠血清肌酐、尿素氮,24 h尿蛋白定量及肾组织胶原阳性率百分比,其治疗效果与代文尚不存在统计学差异。提示温阳消癥方能够通过改善5/6肾切除小鼠肾功能延缓其慢性肾衰竭、肾纤维化的发病进程。

温阳消癥方对5/6肾切除小鼠肾纤维化的保护作用及对TGF-β1/Smad3信号通路的影响

[目的]观察温阳消癥方对5/6肾切除小鼠肾功能、肾脏病理、纤维化指标及转化生长因子-β_(1)(transforming growth factor-β_(1),TGF-β_(1))/Smad3通路的影响,探讨该方对肾纤维化的保护作用及可能的机制。[方法]40只C57BL/6小鼠中随机选取10只作为假手术组,30只制作5/6肾切除模型,造模2周后测血清肌酐,确定造模成功,并将造模组随机分为温阳消癥组、缬沙坦组、模型组。温阳消癥组予温阳消癥方灌胃,缬沙坦组予缬沙坦灌胃,模型组与假手术组予等体积0.9%氯化钠注射液灌胃,给药8周后测定血清肌酐、尿素氮,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)及Masson染色观察肾脏病理学改变,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)和免疫印迹法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、TGF-β_(1)、Smad3的mRNA和蛋白表达。[结果]与假手术组比较,模型组肾脏纤维化改变明显,血清肌酐、尿素氮、胶原染色阳性率及α-SMA、FN、TGF-β_(1)、Smad3的mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,温阳消癥组和缬沙坦组小鼠的肾脏病理纤维化形态改变较轻,血清肌酐、尿素氮、胶原染色阳性率,α-SMA、FN、TGF-β_(1)的mRNA和蛋白表达,Smad3蛋白表达均显著降低(P<0.01);Smad3 mRNA表达降低(P<0.01,P<0.05)。与缬沙坦组比较,温阳消癥组的α-SMA mRNA和蛋白表达,以及TGF-β_(1) mRNA表达显著降低(P<0.01);胶原染色阳性率和FN mRNA表达降低(P<0.05)。[结论]温阳消癥方可改善5/6肾切除小鼠肾功能,减轻病理改变,下调肾纤维化标志物α-SMA及FN的表达,减轻细胞外基质(extracellular matrix,ECM)异常堆积,其机制可能与抑制TGF-β_(1)/Smad3信号通路有关。

温阳消癥方对5/6肾切除小鼠肾纤维化的作用及其机制

目的:观察温阳消癥方对5/6肾切除小鼠残肾功能及肾脏纤维化的影响,并探讨其作用机制。方法:随机从32只小鼠中取24只制作5/6肾切除慢性肾功能衰竭肾纤维化模型,2周后根据血清肌酐值将24只小鼠分为5/6肾切除组、代文组和温阳消癥方组,另8只作为假手术组。治疗8周后,Western blot检测各组小鼠肾组织JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、I型胶原蛋白(Col-I)、Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅲ)、α-SMA蛋白表达水平,免疫组织化学染色法测定小鼠肾组织Col-I、Col-Ⅲ、α-SMA水平,用RT-q PCR法测定TGF-β1、Smad3 mRNA水平。结果:治疗8周后,模型组小鼠肾组织JAK2、STAT3、pJAK2、p-STAT3、TGF-β1、Smad3、Col-I、Col-Ⅲ、α-SMA蛋白表达均较假手术组上调(P<0.01),模型组小鼠肾组织TGF-β1、Smad3 mRNA表达较假手术组上调(P<0.01);与模型组比较,代文组、温阳消癥方组JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、Smad3、Col-I、Col-Ⅲ、α-SMA蛋白表达和TGF-β1、Smad3 mRNA表达均下调(P<0.01);与代文组比较,除TGF-β1、α-SMA外,温阳消癥方组其余指标均下调(P<0.01)。结论:温阳消癥方能够保护5/6肾切除小鼠残肾功能,减轻肾纤维化病变程度,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3、JAK2/STAT3通路相关。

温阳消癥方对单侧输尿管梗阻小鼠肾组织Ⅰ型与Ⅲ型胶原表达的影响

目的观察单侧输尿管梗阻(UUO)模型小鼠肾组织Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)及Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)mRNA及蛋白表达,探讨温阳消癥方对肾间质纤维化的影响。方法32只C57小鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、缬沙坦组、温阳消癥组,每组8只,后三组采用单侧输尿管结扎法制作肾间质纤维化模型。造模成功后缬沙坦组给予缬沙坦水悬液灌胃(浓度4.9g/mL,给药剂量16.5mg/kg);温阳消癥组给予温阳消癥方水煎剂灌胃(浓度4.9g/mL,给药剂量49g/kg),假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,治疗14天后处死各组小鼠并留取左侧肾组织标本,采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Rt-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测并分析Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA及蛋白表达情况。结果模型组Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA及蛋白表达均较假手术组显著上调[Col-ⅠmRNA:(6.85±0.22)比(1.03±0.11);Col-ⅢmRNA:(6.21±0.19)比(1.09±0.14);Col-Ⅰ蛋白:(6.23±0.24)比(1.09±0.13);Col-Ⅲ蛋白:(16.99±0.13)比(1.01±0.07);P<0.01];温阳消癥组及缬沙坦组Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA及蛋白表达均较模型组显著下调[Col-ⅠmRNA:(1.27±0.13)、(2.65±0.25)比(6.85±0.22);Col-ⅢmRNA:(1.17±0.08)、(4.11±0.14)比(6.21±0.19);Col-Ⅰ蛋白:(3.14±0.15)、(5.18±0.22)比(6.23±0.24);Col-Ⅲ蛋白:(2.68±0.12)、(14.14±0.19)比(16.99±0.13);P<0.01];温阳消癥组的Col-I、Col-ⅢmRNA及蛋白表达与缬沙坦组比较均有显著下调[Col-ⅠmRNA:(1.27±0.13)比(2.65±0.25);Col-ⅢmRNA:(1.17±0.08)比(4.11±0.14);Col-Ⅰ蛋白:(3.14±0.15)比(5.18±0.22);Col-Ⅲ蛋白:(2.68±0.12)比(14.14±0.19);P<0.01]。结论温阳消癥方可下调Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA及蛋白表达,减少细胞外基质在肾间质的堆积,从而减轻UUO模型小鼠肾间质纤维化程度。