温阳消饮法对胸腔积液模型大鼠血管内皮生长因子、肿瘤坏死因子-α的影响

目的：研究温阳消饮法对胸腔积液模型大鼠血管内皮生长因子、肿瘤坏死因子α的影响,阐释该法治疗水饮病的部分作用机制。方法：40只健康SPF级Wistar成年大鼠随机分为温阳消饮组（W）、去桂消饮组（Q）、模型组（M）、空白组（K）,每组10只,雌雄各半。除K组外,其余3组大鼠以1%λ-角叉菜胶溶液胸膜腔注射,制备胸腔积液模型。造模24 h后拍摄X片,对模型进行评价。确定造模成功后2 h分别给予W组苓桂术甘合葶苈大枣泻肺汤药液灌胃,12 g/（kg·d）;Q组苓桂术甘合葶苈大枣泻肺汤去桂枝药液灌胃,10 g/（kg·d）,1次/d,连续3 d。K组、M组常规喂养,不施加任何因素。灌胃结束后处死各组大鼠,分别采集血液、胸腔积液,用双抗体夹心法检测血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-ɑ）含量。结果：（1）血清与胸液VEGF含量：与K组比较,M组增高（P〈0.05）;与M组比较,W组、Q组均降低（P〈0.05）;W组与Q组的差异无统计学意义（P〉0.05）;（2）血清与胸液TNF-α含量：与K组比较,M组升高（P〈0.05）;与M组比较,W组、Q组均降低（P〈0.05）;W组与Q组的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：（1）温阳消饮法能降低λ-角叉菜胶所致胸腔积液模型大鼠血清与胸液中增高的VEGF、TNF-α,这可能是该法治疗胸腔积液的作用机制之一;（2）在该研究中,苓桂术甘合葶苈大枣泻肺汤药液与苓桂术甘合葶苈大枣泻肺去桂枝汤药液对模型大鼠血清与胸液中VEGF、TNF-ɑ的影响未呈现明显差异。

温阳消饮法治疗胸腔积液述评

胸腔积液是临床常见病,经过长期临床实践,认为用中药配合西医放化疗等方法治疗该病能有效的提高病人的生存率与生活质量。现总结了近十年来中医临床医家把该病归属于水饮病范畴,并用温阳消饮法来治疗的成果。

温阳消饮法对胸腔积液豚鼠胸膜间皮细胞水通道蛋白1表达的影响

目的:研究温阳消饮法消除胸液与调节水通道蛋白表达的相关性。方法:将健康非纯种短毛成年豚鼠随机分为A-温阳消饮组、B-模型+生理盐水组、C-模型组、D-空白组,各实验组再根据造模后第1、2、3、5、7、10、14 d随机分为7个小组。1%角叉菜胶胸腔注射建立胸腔积液模型。造模后2h给药,连续14 d。分别于造模后第1、2、3、5、7、10、14 d处死各组豚鼠。计量胸液,并用免疫组化法检测脏层与壁层胸膜间皮细胞水通道蛋白1(AQP1)表达。结果:①A5组较B5、C5组,A7组较B7、C7组胸液量减少(P<0.05);②A7组脏层胸膜间皮细胞AQP1表达较B7、C7组增强(P<0.05);③A2、A3、A5、A7、A10、A14组分别与B2、B3、B5、B7、B10、B14组及C2、C3、C5、C7、C10、C14组比较,其壁层胸膜间皮细胞AQP1表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05);④A2、A3、A5、A7、A10、A14各组脏层胸膜间皮细胞AQP1表达强于壁层胸膜(P<0.05),B7、B10、B14组及C7、C10、C14组脏层胸膜间皮细胞AQP1表达弱于壁层胸膜(P<0.05)。结论:温阳消饮法能减少胸腔积液模型豚鼠胸液量,其作用机理可能是:①上调脏层胸膜间皮细胞AQP1表达,有助于胸液转运;②下调壁层胸膜间皮细胞AQP1表达,减少胸液形成。

温阳消饮法对炎性胸腔积液豚鼠胸膜间皮细胞超微结构影响的研究

目的:探讨中医温阳消饮法中药消除水饮的作用机理。方法:应用角叉菜胶诱发豚鼠发生胸腔积液后,将其随机分为3组:A温阳消饮组;B模型+生理盐水组;C模型组。并根据造模后1、2、3、5、7天不同时间段将上述各组再分别随机分为5个亚组。以经方苓桂术甘汤与葶苈大枣泻肺汤合方作为温阳消饮法代表方给动物灌胃给药后,运用透射电镜观察豚鼠胸膜间皮细胞超微结构的变化。结果:①A5组、A7组的胸液量较B5、C5、B7、C7、A1等组有显著性差异;②A1～A7组胸膜间皮细胞胞浆内的细胞器清晰可见,细胞膜表面的微绒毛随给药天数增加而增多、变长;B1～B7组与C1～C7组的细胞器出现日益严重的炎性变化,其微绒毛由减少至消失。结论:温阳消饮法中药能保护角叉菜胶致豚鼠胸腔积液病变的胸膜间皮细胞,并逐渐减少其胸液量,其作用与给药天数呈正相关;推断温阳消饮法减少胸液量的机理,可能与影响胸膜间皮细胞表面微绒毛的数量与形态有关。

温阳消饮法对胸腔积液大鼠肾脏AQP2及cAMP-PKA/PKC信号通路表达的影响

目的观察温阳消饮法对胸腔积液模型大鼠肾脏水通道蛋白2表达的影响,探究该法治疗水饮病的部分作用机制。方法将Wistar大鼠40只,随机分为温阳消饮组(W),去桂消饮组(Q),模型对照组(M),空白对照组(K)。向W、Q、M组大鼠胸腔注射1%λ-角叉菜胶,制备胸腔积液(悬饮)模型。造模24 h后拍摄X线平片显示造模均成功。于造模2h后给予W、Q组相应药液灌胃,每天1次,连续5天。造模后第5天处死各组大鼠,采集胸腔积液及肾脏组织,用蛋白印迹法检测肾脏AQP2的表达,用酶联免疫吸附法测定c AMP、PKA、PKC的表达。结果 1胸腔积液量:与K组比较,各组均增加(P<0.05);与M组比较,Q、W组减少(P<0.05),与Q组比较,W组较多(P>0.05)。2AQP2:与K组比较,M组降低(P<0.05);与M组比较,Q、W组升高(P<0.05);与Q组比较,W组升高(P>0.05)。3PKA:与K组比较,W、Q组增加(P<0.05);其余各组间(P>0.05)。4PKC、c AMP:与Q组比较,W组c AMP增加(P<0.05);其余各组间(P>0.05)。5肾组织超微结构:与K组比较,M组肾小管上皮细胞表面微绒毛明显减少;与M组比较,W、Q组肾小管上皮细胞表面微绒毛增多;与Q组比较,W组无明显差异。结论 1温阳消饮法能有效减少胸腔积液模型大鼠胸腔积液量。2温阳消饮法能上调胸腔积液模型大鼠肾组织AQP2的表达,这可能是该法治疗胸腔积液大鼠的部分作用机制。3温阳消饮法对模型大鼠肾组织的异常变化具有良性、促进恢复的作用。4温阳消饮法对c AMP、PKA、PKC的影响尚不明确。

基于转录因子LXR多靶点调控探讨温阳消饮法治疗慢性心力衰竭作用机制

中医药治疗慢性充血性心力衰竭已有悠久的历史,依据其临床表现及病机特点当归属于中医"痰饮-支饮"范畴。在痰饮理论指导下,温阳消饮法治疗慢性充血性心力衰竭的多靶点效应通过临床与实验研究得到证实。转录因子调控基因表达具有时空多态性,故从转录调节因子肝X受体在温阳消饮法治疗慢性充血性心力衰竭疗效作用的多靶点性角度探讨中医药治疗多效性的分子机制,为阐释中医经典痰饮理论及代表治法温阳消饮法的科学内涵提供新的研究思路。

温阳消饮法对胸腔积液大鼠小肠AQP4及cAMP-PKA信号通路表达的影响

目的:探讨温阳消饮法对胸腔积液模型大鼠小肠水通道蛋白4(A Q P4)的表达、环磷酸腺苷(c AMP)、蛋白激酶A(PKA)含量的影响,阐释该法的作用机制。方法:用计算机随机分组方法,将Wistar成年大鼠随机分为温阳消饮组、去桂消饮组、模型对照组、空白对照组,每组10只。除K组外,其余3组动物以1%角叉菜胶胸腔注射建立大鼠胸腔积液(悬饮)模型,造模24h后拍摄X线胸片进行模型评价。于造模成功后2h各组予相应药物灌胃,每天1次,连续5d。灌胃结束后处死各组大鼠,采取小肠组织,用蛋白印迹法检测AQP4,用酶联免疫吸附法检测c AMP、PKA。结果:1AQP4表达:与空白对照组比较,模型对照组显著降低(P<0.05);与模型对照组比较,温阳消饮组、去桂消饮组均显著增高(P<0.05);2c AMP含量:各组比较,其差异均无统计学意义;3PKA含量:与K组比较,其余各组均显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,温阳消饮组、去桂消饮组的差异无统计学意义。结论:在胸腔积液模型中,大鼠小肠上段AQP4的表达降低,而温阳消饮法可上调之,这可能与该法治疗水饮病的作用机制有关。

温阳消饮法中茯苓-桂枝配伍对慢性心力衰竭大鼠水液代谢双向调节作用的研究

目的研究探讨温阳消饮治法中茯苓-桂枝药对在治疗慢性心力衰竭中对水液代谢的双向调节作用。方法从60只Wistar大鼠随机抽取15只设为空白对照组,余采用阿霉素腹腔注射制备慢性心力衰竭模型,后将造模大鼠随机分为模型组,原方组,去苓桂组,每组15只。原方组按等效剂量予温阳消饮方药液12g/(kg·d)灌胃;去苓桂组按等效剂量予去苓桂消饮方药液6.56g/(kg·d)灌胃;空白组和模型组均给予与原方组等体积蒸馏水灌胃,上述干预均每日1次,连续4周。记录各组大鼠一般情况,尿量,心脏彩超检测心功能,ELISA法测血浆肾素、血管紧张素Ⅱ和醛固酮系统(RAAS)激活水平,并取心脏组织做病理切片HE染色。结果模型组大鼠心脏组织病理呈现心肌细胞不同程度的损伤,间质水肿明显,纤维结缔组织增生,炎症细胞浸润,心肌细胞凋亡明显增多,与模型组比较,原方组和去苓桂消饮组病变均改善,以原方组改善效果最显著;与模型组比较,原方组和去苓桂组尿量增多,心脏彩超LVIDd、EDV、SV以及C.O.水平升高,血清RAAS水平降低;与原方组比较,去苓桂组尿量增多更加显著,HR也显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论温阳消饮法茯苓-桂枝配伍在治疗慢性心力衰竭中对水液代谢具有双向调节作用。

温阳消饮法对胸腔积液模型大鼠肾髓质差异基因表达的影响

目的:运用基因芯片技术研究温阳消饮法对胸腔积液模型大鼠肾髓质差异基因表达的影响。方法:40只清洁级Wistar大鼠随机分为温阳消饮组、去桂消饮组、模型组、空白组,每组10只。除空白组外,其余3组大鼠以1%λ-角叉菜胶制备胸腔积液模型,造模成功后2h,温阳消饮组、去桂消饮组予以相应药物灌胃,日1次,连续5d。灌胃结束后处死大鼠。每组取3只大鼠的肾髓质进行基因表达谱检测,筛选出差异表达基因,进行Pathway分析。结果:(1)温阳消饮组与模型组比较、模型组与空白组比较,其共同表达通路有3条:神经活性配体受体相互作用通路、系统性红斑狼疮通路、肾素血管紧张素系统通路;共同表达基因有7个:LOC317471、Olr462、Mcpt8I3、Olr718、Mcpt8I2、Cd80、Ttn。(2)去桂消饮组与模型组比较、模型组与空白组比较,其共同表达通路有1条:神经活性配体受体相互作用通路;共同表达基因有3个:Cep295nl、Mcpt8I3、Fam64a。结论:(1)温阳消饮法对胸腔积液模型大鼠肾髓质基因的调控是通过多个通路及基因相互作用的结果;(2)该法可能是通过上调Mcpt8I3基因调控神经活性配体受体相互作用通路,影响其炎症反应的;(3)温阳消饮组与去桂消饮组在肾髓质基因的Pathway分析中存在差异,温阳消饮方可能是通过上调Mcpt8I3基因调控肾素血管紧张素系统通路而发挥利尿消饮作用的;(4)本研究中未发现该法对cAMP-PKA/PKC及VWP通路有影响。

温阳消饮法对胸腔积液大鼠小肠水通道蛋白4表达的影响

目的:研究温阳消饮法对胸腔积液模型大鼠小肠水通道蛋白4(AQP4)表达的影响。方法:采用计算机随机分组方法,将SD成年雄性大鼠分为温阳消饮组、模型对照组、空白对照组,每组12只。对除空白对照组外的其余2组动物以1%角叉菜胶胸腔注射建立大鼠胸腔积液(悬饮)模型,造模24h后拍X线片对模型进行病理评价。于造模成功后2h各组予相对应药物灌胃,每天1次,连续4d。灌胃结束后处死各组大鼠,采集小肠组织,用免疫组化法检测AQP4的表达,比较各组结果。结果:与空白对照组比较,模型对照组表达降低(P<0.05);温阳消饮组高于模型对照组(P<0.05),与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:温阳消饮法可上调胸腔积液模型大鼠小肠AQP4的表达。

温阳消饮法对胸腔积液大鼠脏层胸膜基因表达影响的实验研究

目的利用基因芯片技术,分析温阳消饮法对胸腔积液大鼠脏层胸膜基因表达的调控作用。方法 48只雄性SD大鼠适应性饲养3 d后,随机分为A组(40只)与空白对照组(8只)。A组动物以戊巴比妥钠麻醉后,采用1%λ-角叉菜胶溶液进行右侧胸膜腔注射。24h后,运用CR数字成像系统观察胸部X光片,筛选出胸腔积液明显的大鼠,作为造模成功的动物备用。将造模成功的动物随机分为:温阳消饮组(10只),每日1次温阳消饮法代表方水煎液灌胃(5ml/kg);模型组(9只),每日1次生理盐水灌胃(5ml/kg)。空白对照组(8只),每日1次生理盐水灌胃(5ml/kg)。连续给药4 d后,动物进行安乐死。每组取3只动物的右侧脏层胸膜,利用Agilent单通道表达谱芯片对胸膜组织基因表达情况进行分析。结果在造模因素作用下,基因Rhoa、RGD1306349、Nsd1、Figf、Brd4、Crebbp、Sos2、Irf2、Brd2、Tspyl2、Eif4g2、Lcor、Isy1、Sf3a3、Msl2l1、Myo9a、Papolg、Vasp、Pdcd7、Zbtb11、RGD1559904、Csnk1g1、Leng8、Ddx10、Arhgef3、Smg6、Zfat、Tm9sf3、Otud5和Chd6表达上调,在温阳消饮法代表方干预下表达下调;基因Ksr1、Slc25a27、Ptrf、Efemp1、RGD1563319、Cyb5r3、Gpr135、Polr3gl、Kcna5、Ugp2、Acad11和Btbd11在造模条件下表达下调,用温阳消饮法代表方治疗后上调。结论温阳消饮法可下调脏层胸膜炎症促进基因Rhoa、Brd4、Crebbp和Brd2表达,上调炎症抑制基因Ksr1和Slc25a27表达,从而降低炎性损害。