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题名拟南芥硫酯酶基因在毕赤酵母中的表达
被引量:6
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作者
郝昭程
王腾飞
李忠奎
郝梓凯
戴琨
王瑞明
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机构
齐鲁工业大学食品与生物工程学院
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出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期115-122,共8页
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基金
国家自然科学基金(No.31171727)资助~~
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文摘
硫酯酶在生物体内能催化水解脂酰酰基载体蛋白和饱和脂肪脂酰链,对中链脂肪酸(Medium chain fatty acids,MCFAs)的积累起着关键作用。为获得具有生产中链脂肪酸能力的工程菌,以拟南芥c DNA为模板,PCR扩增得到其脂酰-ACP硫酯酶基因At Fat A,经Eco RⅠ/XbaⅠ双酶切后连接至同样双酶切的质粒中,获得重组质粒p PICZαA-At Fat。将重组质粒电击转入毕赤酵母GS115中,通过Zeocin抗性筛选,挑选出阳性克隆子并摇瓶发酵诱导,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得明显目的蛋白条带,首次成功构建At Fat A的真菌表达系统。气质联用法检测发酵产物胞外游离脂肪酸,发现毕赤酵母At Fat A重组菌株比起始GS115菌株胞外游离MCFAs(主要是辛酸)产量增加51%,MCFAs产量占胞外总脂肪酸产量的28.7%,而野生菌中这一比例仅有18.1%,这为日后生产安全无毒害的MCFAs探索了一条新的途径。
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关键词
拟南芥
脂酰-ACP硫酯酶
毕赤酵母
基因重组表达
游离中链脂肪酸
胞外
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Keywords
Arabidopsis thaliana, acyl-ACP thioesterase, Pichia pastoris, genic recombination expression, free mediumchain fatty acids, extracellular
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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