游离缘指甲DNA检验1例

在法医日常检案中，指甲DNA检验需要拔取整枚指甲，消化指甲的甲体或甲根部分才能得到满意的DNA检验结果。甲体的前部DNA分型效果差，因此指甲的游离缘（free margin of nail），即指甲前缘延伸到离开甲床的部分，通常不作为核DNA检验的样本。本例在处理一起抛尸粪池尸体时，以剪下的指甲游离缘作为检验对象，经有机法结合Chelex法提取DNA．取得了满意的STR分型。

碱性裂解法提取指甲游离缘DNA的条件优化研究

碱性裂解法提取指甲游离缘部分DNA是以指甲游离缘部分作为样本,利用NaOH溶液的强碱性破坏指甲中的蛋白质结构,从而破坏细胞膜结构,释放出DNA。该文通过改变样本量、提取温度、提取时间和NaOH溶液的浓度,筛选出合适的提取条件,并与Chelex-100提取法相比较,评估碱性裂解法提取条件的适用性。实验发现,碱性裂解法的提取时间比Chelex-100法短,提取效果相似;用碱性裂解法在样本量为10~15 mg,提取温度为56℃;提取时间为10~20 min和NaOH溶液浓度为0.1~0.2 mol/L时,可以快速准确提取指甲游离缘DNA。

指甲游离缘的核DNA分型研究

为探讨指甲游离缘核DNA分型的可行性,采集无关个体指甲游离缘样本10份,分别以不同消化体系,采用有机法、Chelex-100法,有机法结合Chelex-100法等3种方法提取指甲游离缘核DNA,AmpFlSTR IdentifierTM试剂盒复合扩增,ABI PRISM3130自动遗传分析仪检测分析。结果显示:与对照血样比较,有机法结合Chelex-100法提取的样本核DNA均获得满意的STR分型,有机法提取的样本核DNA可以进行STR分型,但部分样本图谱峰值不均衡,Chelex-100法提取的样本核DNA不能分型或出现较多等位基因缺失。提示指甲游离缘可以进行成功地核DNA的分型,有机法和有机法结合Chelex-100法提取的DNA质量都可成功检测,其中以有机法结合Chelex-100法提取DNA的检测成功率最高。

指甲游离缘及毛发中核DNA抽提方法的探讨

目的探讨指甲游离缘及毛发中抽提核DNA的方法,并对抽提结果进行评估。方法采集5名健康成人志愿者指甲游离缘、发根及发干样本各30份。分别用无水乙醇和蒸馏水浸泡样本,去除外源性DNA。每份指甲游离缘样本为3mg指甲游离缘碎片;每份发根或发干样本各为3段0.3～0.5cm发根或发干。分别采用酚氯仿法、Chelex-100法和QIAamp DNA Investigator试剂盒法抽提3种样本的核DNA,并运用PCR扩增对抽提DNA进行评估。扩增片段位于不同染色体上,长度分别为188、248、300和741bp。PCR扩增产物用1.8%琼脂糖凝胶电泳检测。为探讨样本量对抽提结果的影响,任意取指甲游离缘1、3和5mg,发根及发干各1、3和5根重复实验,并比较结果。初步探讨增加Taq酶量对黑色素抑制的消除作用。结果在3种抽提方法中长度为248bp的引物扩增成功率均为最高。指甲游离缘样本使用试剂盒法抽提核DNAPCR扩增成功率显著高于酚氯仿法及Chelex-100法(P<0.05)。发干样本使用试剂盒法抽提核DNAPCR扩增成功率显著高于酚氯仿法(P<0.05)。发根样本3种方法抽提核DNAPCR扩增成功率差异无统计学意义(P>0.05)。指甲游离缘样本的PCR扩增成功率显著高于发根及发干样本(P<0.05),发根和发干样本的PCR扩增成功率差异无统计学意义。试剂盒法抽提指甲游离缘、发根和发干核DNAPCR扩增成功率随样本量增加而提高。酚氯仿法和Chelex-100法抽提发根或发干样本核DNAPCR扩增成功率随样本量增加呈下降趋势,提示可能存在黑色素抑制作用。增加Taq酶量对于消除黑色素抑制有一定作用。结论①3种抽提方法均能成功从指甲游离缘及毛发中抽提到核DNA,试剂盒法成功率最高。②指甲游离缘、发根和发干均可作为核DNA采样源,从指甲游离缘抽提DNA成功率最高。

指甲游离缘核DNA提取及检验1例

指甲的游离缘是指指甲前缘延伸到离开甲床的部分。指甲的游离缘采集无创,操作简单,是做秘密DNA亲子鉴定的主要检材之一。但由于其细胞高度角化,胞核退化严重,核DNA含量少,通常仅用于线粒体DNA检验。本例在处理1例亲子鉴定案例时,以剪下的指甲游离缘作为检验对象,先后用Chelex-100法和改良的blood DNA kit法提取核DNA后进行STR分型,最终获得了满意的STR分型结果,成功完成了鉴定。