血红蛋白变异体Hb Fukuyama和Hb North Manchester干扰糖化血红蛋白检测2例报道

糖化血红蛋白(glycated hemoglobin A1c,HbA_(1c))可反映患者近2~3个月的血糖控制情况[1]。美国糖尿病协会(American Diabetes Association,ADA)在2010年就推荐将HbA_(1c)≥6.5%作为糖尿病的补充诊断标准[2]。血红蛋白(hemoglobin,Hb)病是珠蛋白基因发生突变引起的一组溶血性遗传性疾病[3]。

罕见血红蛋白变异体J-Sardegna干扰HbA1c检测1例报道

糖化血红蛋白(glycated hemoglobin A1c,Hb A1c)是血红蛋白β链-N端缬氨酸与葡萄糖结合而形成,反映近2~3个月血糖平均水平,是诊断糖尿病和评价糖尿病患者血糖控制情况的重要指标[1]。有多种因素可影响Hb A1c的检测,如红细胞寿命改变、恶性肿瘤或严重的肝肾疾病,以变异体的存在较为常见,常见的血红蛋白(hemoglobin,Hb)变异体包括Hb S、Hb E、Hb C和Hb D。随着临床对Hb A1c的关注,越来越多新的Hb变异体被发现,如Hb J-Bangkok、Hb New York、HbBeijing和HbG-Taipei。因此,在日常工作中识别新的变异体,并评估其对常用Hb A1c检测方法的干扰,是对检验科工作人员的考验。目前,Hb A1c检测方法分为两大类:1)基于Hb A1c与非Hb A1c所带电荷不同,如离子层析法、电泳法;2)基于Hb糖化基团的结构特点,如亲和层析法、离子捕获法和免疫法;高效液相色谱法和毛细管电泳法为推荐的参考方法。Hb变异体的干扰取决于所使用的检测方法和变异体的类型,天津市第一中心医院利用3种不同原理(高效液相色谱、硼酸盐亲和层析、毛细管电泳)的4种检测方法对Hb A1c进行检测,并通过测序确定位点突变和变异体类型,确诊1例罕见的Hb变异体病例。现介绍如下。

用HBHBA作色原测定血浆游离血红蛋白

目的 测定血浆中游离血红蛋白。方法 用 2 ,4,6-三溴 -三羟基苯甲酸 ( HBHBA)做色原剂和 4-AAP( 4 -氨基氨替吡啉 )形成红色醌类物质 ,用比色法测定其浓度。结果 该法线性范围 0～ 0 .8g/L.重复性试验 ,低值血清批内 CV=2 .8% ,批间 CV=5 % ;高值批内 CV=1 .7% ,批间 CV=3.7%。平均回收率98.6% ( 96%～ 1 0 2 % )。对照实验 r=0 .9860 ( Y=0 .99x+ 0 .2 )。正常参考值 0 .0 1 3～ 0 .0 73g/L。结论 所用试剂无毒性 ,不致癌 ,显色稳定 ,灵敏度高 ,重复性好 ,结果准确可靠 。

心室辅助装置溶血测试中游离血红蛋白检测方法比较

目的评价溶血测试中游离血红蛋白检测的三种方法,得出一种最适合于心室辅助装置的方法。方法通过对比研究,在阐述联苯胺法、Harboe测试法和Cripps测试法测试血红蛋白含量的原理和方法基础上,对不同浓度的标准血红蛋白样本进行测试,描绘出血红蛋白标准液浓度与吸光度关系的标准曲线,对比分析三种方法在实验操作和结果差异性方面的优缺点。与此同时,对比1%和0.2%邻甲联苯胺溶液对联苯胺法的影响,并分析Harboe法中不同浓度稀释剂的影响(0.01%的碳酸钠溶液和0.1%的碳酸钠溶液)结果Cripps法实验重复性差,拟合系数较低(R^(2)=0.8019),并不能得到优质的标准曲线。联苯胺法和Harboe法实验重复性好,可以得到拟合效度高的标准曲线(R^(2)均大于0.99)。联苯胺法推荐使用1%邻甲联苯胺溶液,Harboe法中,0.01%的碳酸钠溶液更适用。但联苯胺法对试剂的要求很严格,要现配现用,并且测量结果对时间有依赖性。结论与其他测试方法相比,Harboe法可以弥补上述两种方法的不足,适用于实验室快速自动化分析,更适用于心室辅助装置的溶血测试。

悬浮红细胞储存时间对制备的洗涤红细胞钾离子和游离血红蛋白含量的影响

目的了解不同储存时间的悬浮红细胞(悬红)制备的洗涤红细胞中钾离子浓度([K+])和游离血红蛋白含量(FHb)。方法将储存3 d(3 d组,n=6)、16 d(16 d组,n=6)及31～35 d(31～35 d组,n=7)的悬红,手工制备成洗涤红细胞,分别于制备前、制备后0、16和24 h取样测定其[K+]和FHb。结果 3 d组、16 d组和31～35d组悬红制备的洗涤红细胞24 h时[K+]分别为(3.26±0.57)、(3.39±1.12)及(2.97±0.95)mmol/L(P>0.05),且均低于人体正常[K+]上限;3组制备的洗涤红细胞24 h时的FHb分别为(0.29±0.18)、(0.63±0.40)及(1.06±0.55)g/L,其中31～35 d组制备的洗涤红细胞的FHb明显高于3 d组(P<0.01)。结论悬红储存时间对制备的洗涤红细胞的[K+]影响不大,制备的洗涤红细胞24 h保存期内的[K+]均低于人体正常参考值上限,但对FHb含量有较大影响。建议尽量避免使用接近储存期末的悬红制备洗涤红细胞。

免疫比浊法测定尿液游离血红蛋白的方法学研究

目的在全自动生化分析仪上建立胶乳增强免疫比浊法测定尿液游离血红蛋白的方法学,并进行方法性能评价。方法使用抗人血红蛋白HBA0抗体(8.5mg/ml),80nm聚苯乙烯羧基胶乳微球(estapor,纳米微球)等材料制备检测试剂;在东芝TBA120全自动生化仪上设置项目参数并进行校准;方法学性能评价包括准确度、精密度、线性范围、灵敏度、特异度等性能指标;建立该地区健康人群尿液游离血红蛋白的生物参考区间并验证。结果项目参数建立后定标通过,各测定点与拟合的校准曲线未呈现明显偏离,定标液浓度值与吸光度值经相关性分析,r=0.980 7,r^2=0.961 8;回收试验中低值样本S_低加入浓度为100mg/L和500mg/L的标准液后回收率分别为95.3%和102.7%,高值样本S_高加入浓度为100mg/L和500mg/L的标准液后回收率分别为104.2%和103.5%;精密度试验中低值样本S_低和高值样本S_高的总不精密度CV分别的6.52%和4.18%;线性范围为0~1 100mg/L;分析灵敏度为2.8mg/L;干扰试验显示当样本中游离胆红素、结合胆红素、维生素C、动物血红蛋白分别小于342μmol/L,342μmol/L,0.03g/L和500mg/L时对该试验结果无明显干扰,当乳糜浓度>870FTU时对该试验结果有显著干扰;该研究建立的健康人群生物参考区间男性为0~13.3mg/L、女性为0~17.1mg/L,两组参考区间经t检验无显著性差异(P>0.05)。结论研究表明该方法学性能具备检测临床尿液标本,解决了化学法潜血试验特异性不够的问题,并实现了数值化检测,该研究也为其他类型临床标本的检测提供了思路。

游离血红蛋白及其受体CD163在大鼠动脉粥样硬化过程中的作用

目的:研究游离血红蛋白对大鼠动脉粥样硬化发生发展的影响及机制,并探讨血红蛋白清道夫受体CD163在此过程中的作用。方法:30只雄性SD大鼠随机分为对照组(C组)、动脉粥样硬化组(模型组,A组)和血管内溶血动脉粥样硬化组(溶血组,P组)。建立血管内溶血动脉粥样硬化模型。14周后检测血清游离血红蛋白(FHb)、丙二醛(MDA)水平;观察主动脉病理学变化;免疫组化及免疫印迹法观察并分析斑块内CD163和血红素氧合酶-1(HO-1)表达。结果:P组及A组FHb、MDA、CD163和HO-1水平明显高于C组。P组主动脉斑块占内膜总面积比(RAAPIs)、FHb、MDA、CD163和HO-1水平明显高于A组,内膜/中膜面积比(I/M)无明显差异(P>0.05)。斑块内CD163和HO-1表达部位及细胞形态一致。血浆FHb水平与斑块内CD163和HO-1表达彼此间呈正相关(r=0.526,r=0.498,r=0.653;P<0.01)。结论:游离血红蛋白可通过参与脂质过氧化促进动脉粥样硬化的发生发展,并诱导斑块内CD163和HO-1表达上调。

游离血红蛋白对猪失血性休克模型的损伤作用

目的探讨游离血红蛋白(FHb)对猪失血性休克的损伤作用。方法制作创伤失血性休克动物模型,随机分为休克+自体血复苏组(A组)、休克自体血复苏+输注10mg/kgHb(B组)、休克自体血复苏+输注15mg/kgHb(C组)、休克自体血复苏+输注20mg/kgHb(D组)、休克自体血复苏+输注25mg/kgHb(E组)。模型完成后,分别于复苏后的0、6、12、24、48h时间点测定血浆FHb、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、血肌酐(Cr)、尿素(BUN)水平。48h后处死动物,取肝、肾组织做光镜检查。结果A组FHb水平无显著变化;休克复苏中输入FHb,血浆FHb水平持续升高至6h达峰值;B、C组在复苏后24h,D组在复苏后48h血浆FHb回复至初始水平;E组复苏48h血浆FHb仍维持较高水平。D组ALT、AST水平在复苏后12、24h;TBIL、Cr水平在复苏后6、12、24h;BUN水平在复苏后6、12、24、48h;E组ALT、AST、TBIL、Cr水平在复苏后6、12、24h;BUN水平在复苏后6、12、24、48h均显著增高(P<0.05);B、C组肝肾功能指标水平无明显变化。病理结果:光镜下观察,A、B、C、D4组肝脏组织无明显损伤,E组可见肝细胞变性、坏死;大量枯否细胞增生、变形;A、B2组肾脏组织无明显损伤,C组肾小管内皮水肿,呈纤毛状改变,管腔狭窄,有蛋白管型和细胞管型,D组较C组严重,较E组为轻,E组可观察到肾小管变性、坏死。结论复苏时输注高剂量Hb(20—25mg/kg),可加重休克对肝、肾功能及组织结构的损伤。

机械循环辅助对术后患者血浆游离血红蛋白的影响

目的研究体外膜式氧合器(extracorporeal membrane oxygenation,ECMO)氧合疗法、BVS5000、AB5000和MEDOS等不同机械辅助装置辅助对术后患者血浆游离血红蛋白(FHb)的影响。方法2004年3月～2005年12月间,20例心脏病术后患者在阜外心血管病医院接受机械循环辅助治疗,根据在辅助治疗期间所使用辅助装置类型的不同分为4组,ECMO组9例,BVS5000组8例,MEDOS组2例,AB5000组1例;随机选取同期9例体外循环手术患者和9例非体外循环冠状动脉旁路移植术患者作为对照(对照组),监测、对比分析其血浆FHb、胆红素、肌酐、尿素氮等指标的变化。结果术中体外循环所致的血浆FHb升高在术后1d内可降至正常。使用机械循环辅助后,除BVS5000组在辅助2d后血浆FHb渐恢复正常外,其余类型的辅助治疗组在整个辅助期间血浆FHb均高于正常;BVS5000组从开始辅助第3d起,血浆FHb浓度明显低于ECMO组(P<0.05)。而ECMO组在辅助中,辅助流量≤2.5L/min的患者FHb有低于辅助流量>2.5L/min的趋势。大多数患者在辅助期间胆红素、尿素氮均有升高,撤除辅助装置后下降。结论运用ECMO,BVS5000,AB5000和MEDOS机械循环辅助装置均会导致一定程度的血液破坏,引起FHb、胆红素增高,但基本都在可接受的范围;其中BVS5000辅助装置对术后患者血浆FHb的影响较其它几种偏小。

游离血红蛋白测定:三波长法和邻联甲苯胺法的比较研究

目的对三波长法和邻联甲苯胺法测定血浆游离血红蛋白(FHb)的准确性、线性、精密度、回收率、稳定性和操作简便性进行比较研究。方法分别用2种方法检测FHb标准品和全血样品中的FHb含量,依次进行准确性、线性、精密度、回收率、稳定性各方面的实验,比较并分析结果。结果三波长法检测得到的FHb标准品含量结果与真实值基本相符,并且直接计算即可得出结果,精密度和回收率都符合方法学要求,检测时呈色稳定;邻联甲苯胺法检测的结果需要外加参照才可获得,吸光度值A与FHb浓度在一定范围内(<600 mg/L)才成线性,精密度不如三波长法,且呈色反应极不稳定。结论三波长法测定FHb结果真实可信,稳定性高,操作简便;邻联甲苯胺法测定FHb含量步骤相对较繁琐,线性范围较窄,注意事项多,稳定性差,比较而言,三波长法的应用前景更为广阔。

输注储存红细胞对患者循环游离血红蛋白、一氧化氮和结合珠蛋白的影响

目的了解输注储存红细胞对患者循环游离血红蛋白(FHb)水平、一氧化氮(NO)消耗和结合珠蛋白(HP)的影响。方法从该院住院、拟输血患者中,选择创伤、内皮损伤及非珠蛋白生成障碍性贫血病患者各10例,分为创伤组:包括外伤和骨折等患者,排除慢性病,血液病,肝、肾功能损害者;内皮损伤组:包括糖尿病、高血压、高血脂等患者;非珠蛋白生成障碍性贫血组:包括缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血、再生障碍性贫血、骨髓抑制患者。于输血前采集3组患者抗凝血和非抗凝血,做FHb、NO、HP等指标检测,记录检测数据,患者输注(21±3)d储存红细胞悬液2U/人,分别于输血后15min、60min、2h、24h和1周,采集患者抗凝血和非抗凝血,重复上述指标的检测并记录检测数据。比较各组输血前后及各组间相应的检测数据并作统计学分析。结果 30例患者FHb、NO、HP测定值水平,输血前后差异均有统计学意义(P<0.01)。在输血后15min,FHb、NO、HP水平均有大幅提高,在接下来的1h至1周内又有所下降,但输血后血浆FHb水平明显高于输血前,而输血后NO、HP水平明显低于输血前。结论输注储存红细胞可以增加循环FHb水平和降低循环NO水平。

基于分光光度法的游离血红蛋白便携检测装置的研制

目的:研制一款基于分光光度法的便携式仪器,快速检测游离血红蛋白,为安全输血提供可靠的依据。方法:基于分光光度原理,通过光电转换电路测量联苯胺法反应物醌亚胺在505 nm波长处的显色深度,来测定血浆游离血红蛋白的含量。结果:使用该装置与721分光光度计相比,测量结果和标准值之间的相关系数r^2=0.999 8,且体积小,便于携带,操作快捷,测量准确。结论:该装置可快速、准确地测量血浆中的游离血红蛋白含量,实现对血液制品贮存质量和输注效果的快速评估。

择期心脏手术患者术中回收自体血液红细胞2,3-二磷酸甘油酸和游离血红蛋白水平的变化研究

目的探讨心脏择期手术中自体血液回收对回收红细胞2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)和游离血红蛋白(FHb)浓度的影响。方法选择15名择期心脏手术的患者,使用自体血液回收机在术中收集并洗涤回收的血液。测定和比较回收洗涤红细胞、患者自体静脉血红细胞和贮存2周的库存红细胞的2,3-DPG水平、f Hb的浓度及溶血率;进一步测定和比较回收洗涤红细胞贮存在4 h(21-24℃)和24 h(1-6°C)上述指标的变化。2,3-DPG水平测定采用化学比色法,FHb浓度使用分光光度仪检测。结果 15名患者术中均没有输注异体红细胞。患者静脉血、回收洗涤红细胞在0 h、4 h、24 h和库血保存2周的2,3-DPG值(μmol/g Hb)分别为12.73±6.52、17.94±6.91、15.17±11.61、15.38±5.85和2.62±3.13,其中回收洗涤红细胞0 h 2,3-DPG含量明显高于静脉血(P<0.01)和库血(P<0.01),和4 h、24 h的2,3-DPG值相比均无明显变化(P<0.05)。患者静脉血、回收洗涤红细胞在0 h、4 h、24 h和库血保存2周溶血率(%)分别为0.07±0.05、0.51±0.27、1.11±0.42、1.75±0.69和0.07±0.05,其中回收洗涤红细胞0 h溶血率明显高于静脉血(P<0.01)和库血(P<0.01),明显低于回收洗涤红细胞4 h溶血率(P<0.01)和24 h溶血率(P<0.01)。结论在心脏手术中回收的患者自体血液中的红细胞被轻度破坏,但供氧能力较好。

非体外循环冠状动脉旁路移植术患者应用自体血回输对围术期游离血红蛋白的影响

目的探讨非体外循环冠状动脉旁路移植术(OPCAB)中应用自体血回输对围术期游离血红蛋白(FHb)的影响。方法 2014年12月至2015年1月间36例行OPCAB的患者随机分为试验组(自体血回输)和对照组,收集围术期FHb及其他临床资料,确定自体血回输对于围术期FHb水平的影响。结果洗涤式自体血回输机可以显著减少术野回收血液的FHb水平;试验组输入自体血后FHb显著升高,至术后第三天与对照组无显著差异;两组肝、肾功能无显著差异。结论自体血回输技术可以有效降低术野回吸血液内FHb水平。输入自体血后早期FHb显著升高而后可恢复正常,并且对肝。

基于血红蛋白的过氧化物酶特性测定其在血浆中游离态含量

基于血红蛋白 (Hb)的过氧化物酶特性 ,研究了以铬黑T(EBT)作为其氢供体底物时的酶动力学行为。实验测定了Hb作为辣根过氧化物酶 (HRP)的替代物的类酶催化米氏常数和米氏速率。对Hb催化H2 O2 氧化铬黑T的机理作了探讨。建立了测定Hb的催化动力学光度法 ,方法的线性范围为 2× 10 - 8mol/L～ 2× 10 - 6mol/L ,检出限为 3.6× 10 - 9mol/L。用于血浆中游离Hb的测定 ,结果满意。

全自动血红蛋白电泳与Hb-F碱变性试验在β地中海贫血中的应用及评价

目的 评价全自动血红蛋白琼脂糖凝胶电泳与Hb—F碱变性试验在口地中海贫血中的应用。方法 采用全自动血红蛋白琼脂糖凝胶电泳仪进行血红蛋白（Hb）电泳，测定Hb—A2及Hb-F含量，同时采用Hb—F碱变性试验对同一标本进行Hb—F含量测定．比较两种方法对Hb—F含量的检测结果。结果 检测了30例临床标本，发现Hb—A2增高者（含量〉4％）5侧，阳性率〉16．7％，测定Hb-A2的批内CV〈6％，批间〈9％。同时检测出Hb-F含量增高3例。对于Hb-F碱变性试验测得Hb—F含量增高者（含量〉3．1％），通过全自动琼脂糖凝胶电泳可以分辨出HbF区带，并且能进行定量扫描，测出的Hb—F含量与Hb-F碱变性试验测得Hb—F含量基本一致；如果Hb—F碱变性试验测得Hb-F含量在正常范围内（1.0％～3.0％），电泳就不能分辨出HbF区带。结论 全自动血红蛋白琼脂糖凝胶电泳法能够分辨出Hb—A2及Hb—F异常增高者，为β地中海贫血的诊断提供重要的数据。

溶解氧昼夜变化对鳜血液生理生化指标及血红蛋白基因表达的影响

【目的】探究养殖水体溶解氧昼夜变化下鳜(Siniperca chuatsi)血液生理生化指标及血红蛋白基因(Hb)应答的变化规律,为揭示鱼类的短期低氧适应机制提供理论依据。【方法】以健康的鳜幼鱼为研究对象,通过转录组测序和基因组测序数据匹配,鉴定出鳜Hb基因序列,并进行生物信息学分析。在7:00、11:00、17:00和23:00等4个时间点采集鳜血液样品,使用PROCANPE-6800血细胞分析仪测定红细胞数、血红蛋白含量、红细胞压积、平均红细胞血红蛋白浓度和平均红细胞体积,采用实时荧光定量PCR检测Hb基因的表达变化。【结果】共鉴定获得11个鳜Hb基因,包括6个α型Hb基因(hbae4、hbae、hbae1.1、hbae5、hbaa1和hbaa1.1)及5个β型Hb基因(hbbe2、hbba2.1、hbba1、hbba1.1和hbba2);除hbae4基因序列由6个外显子和5个内含子构成外,其余10个基因序列均由3个外显子和2个内含子构成。11个鳜血红蛋白均不存在跨膜结构和信号肽,亚细胞定位于细胞质,其二级结构由α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲构成。池塘水体溶解氧含量存在周期性的昼夜变化;溶解氧含量最低时(7:00),鳜血液红细胞数、红细胞压积、血红蛋白含量和平均红细胞血红蛋白浓度均最高,显著高于其他3个时间点(P<0.05,下同);溶解氧含量最高时(17:00),红细胞数、红细胞压积和血红蛋白含量则显著低于其他3个时间点;平均红细胞体积在4个时间点无显著变化(P>0.05)。hbae4、hbae、hbae1.1、hbae5、hbaa1.1、hbbe2、hbba2.1、hbba1和hbba2基因的相对表达量均随溶解氧昼夜变化呈先上升后下降趋势,于17:00时达最高值,且这9个Hb基因在4个时间点的表达模式基本一致,即低溶解氧时相对表达量最低,高溶解氧时相对表达量最高;而hbaa1和hbba1.1基因相对表达量与溶解氧含量成反比。【结论】鳜通过调节红细胞数、血红蛋白含量和平均红细胞血红蛋白浓度等机制及调控Hb基因表达,以适应溶解氧的昼夜变化,从而保持机体供氧稳定。