游离及固定化果糖基转移酶部分酶学性质的比较研究

从诱变、筛选的米曲霉GX0 0 10菌株所产生的果糖基转移酶 ,经过纯化和固定化操作分别制备游离酶和固定化酶 ,对两者的酶学性质进行了比较研究 .结果表明 ,两者在蔗糖转化为蔗果低聚糖的酶促反应中 ,最适pH为 5 5,在pH5 0～ 7 5之间酶活性相对稳定 .游离酶和固定化酶的适宜温度范围分别是 4 5～ 52℃和 4 0～ 55℃ .在 55℃保温 60min ,酶活性保存率分别是 61 6%和 87 5% .固定化酶的热稳定性提高 .0 1mmol LHg2 +和 1mmol LAg+能完全抑制游离酶的活性 ,但只能部分抑制固定化酶的活性 ,1mmol L的Ti2 +能完全抑制两者的活性 .以蔗糖为底物时 ,游离酶的米氏常数Km=2 15mmol L ,而固定化酶Km =386mmol L .游离酶只能使用一次 ,固定化酶反复使用 54次后 ,剩余活力为 55 2 % .用 55% (W V)蔗糖溶液与固定化酶在pH5 0 ,4 6℃下作用 12h ,可获得61 5% (总低聚糖 总糖 )产物 ,其中蔗果五糖含量达到 7 2 % .

游离果胶酶和固定化果胶酶的酶学性质

研究游离果胶酶和固定化果胶酶的酶学性质,结果表明,游离酶的最适温度为55℃,最适pH为4.0,明胶固定化酶的最适温度为60℃,最适pH为3.5,固定化酶的稳定性比游离酶更好,底物与固定化酶的亲和力增强。

固定化对动植物酯酶性质的影响

比较了离子交换法得到的固定化小麦酯酶和固定化鸡肝酯酶的主要性质与相应的游离酶的性质。结果表明 ,固定化小麦酯酶的最适pH在 5 5附近 ,比游离小麦酶的最适 pH增加了0 8个 pH单位 ;固定化鸡肝酯酶的最适pH在 8 0附近 ,比游离鸡肝酯酶的最适 pH增加了 0 5个pH单位 ;固定化小麦酯酶的最适温度与游离酶的相当 ,但酶活力 温度曲线的峰形变小 ;固定化鸡肝酯酶的最适温度比游离鸡肝酯酶的下降了 5℃ ,酶活力 温度曲线的峰形也略变陡峭。这 2种固定化酯酶对有机磷类农药 (敌敌畏 )

银杏叶和银杏外种皮乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制作用比较

报道银杏叶和银杏外种皮乙醇提取物对酪氨酸酶活力的影响.结果表明:银杏叶和银杏外种皮乙醇提取物对酪氨酸酶活力均有显著的抑制作用.测定导致酶活力下降50%的银杏叶和银杏外种皮提取物含量(IC50)分别为:6.59mg/mL和2.73mg/mL.对酪氨酸酶的抑制作用均表现为可逆抑制,抑制类型均为混合型.分别测定银杏叶和外种皮提取物对游离酶抑制常数(KI)和酶底物络合物抑制常数(KIS),并加以比较.

CuTAPc-Fe_3O_4纳米复合粒子及其漆酶固定化研究

漆酶的固定化研究对基于漆酶催化的光纤生物传感器具有十分重要的意义.制备了四氨基酞菁铜(CuTAPc)-Fe3O4纳米复合粒子,并用红外(IR)、场发射扫描电镜(FEG-SEM)、X射线衍射(XRD)、能谱、粒径仪等对其进行了表征.结果表明形成了以CuTAPc包覆在Fe3O4纳米粒子表面的纳米复合粒子,粒子呈现不规则球形,且分布均匀,粒子平均粒径在50nm左右.用此纳米复合粒子通过戊二醛交联法固定了漆酶,固定后的酶比游离酶具有更好的贮存稳定性及操作稳定性.这为研制高性能的光纤生物传感器打下了较好的基础.

三种形态的壳聚糖固定化脲酶的研究

以戊二醛为交联剂制备了 3种固定化载体 ,即粉末状 (Ⅰ ) ,凝胶状 (Ⅱ ) ,海棉状 (Ⅲ ) ,并测定了固定化酶的特性 .结果显示 :固定化脲酶Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅲ的最适 pH都是 6,而游离酶的最适pH为 7;固定化脲酶Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅲ的最适温度分别为 5 5 ,5 5 ,45℃ ,游离酶为 5 0℃ ;固定化酶Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅲ的表观米氏常数Km 分别为 2 .78,14.5 ,3 4.5mmol/L ,游离酶的Km 为 5 5 .5mmol/L .以上结果并结合固定化酶 pH耐受性及贮存稳定性可知 ,凝胶状 (Ⅱ )

超声对木瓜蛋白酶酶解产物分子量分布的影响

本文探讨了超声对木瓜蛋白酶酶解产物分子量大小及分布的影响。以牛血清白蛋白为底物,采用高效液相色谱法测定游离酶和固定化酶在超声和非超声作用下的酶解产物肽分子量大小及分布情况。结果表明,游离酶和固定化酶在超声和非超声条件下,酶解产物肽分子量大小及分布有一定的差异。非超声条件下,游离木瓜蛋白酶酶解效果明显比固定化酶酶解效果要好。比较超声条件下游离木瓜蛋白酶和固定化木瓜蛋白酶酶解产物分子量大小及分布情况发现:游离木瓜蛋白酶超声条件下酶解肽主要分布在180~1000 Da、1000~5000 Da这两个范围内,而固定化木瓜蛋白酶超声条件下酶解肽在<180 Da所占比例比较大。

脂肪酶固定化研究和应用

采用硅藻土作载体,进行了脂肪酶的固定化。利用固定化酶选择性催化1-苯乙醇与乙酸乙烯酯的转酯化反应,得到R-乙酸苯乙酯,进行1-苯乙醇的拆分。实验考察了不同吸附方法固定化酶的效果,确定效果最好的固定方法为载体涂布法,并对该法的固定化条件进行了优化。制备的固定化酶的转酯比活比游离酶提高了14.3倍。固定化没有改变酶的选择性,对映体过剩值仍大于98%。初步探讨了固定化酶和游离酶的反应过程。

酶法全酯化合成富含EPA/DHA甘油酯工艺研究

以富含EPA/DHA的脂肪酸为底物,采用两步酶法合成富含EPA和DHA的甘油酯。首先,以T1脂肪酶为催化剂催化富含EPA/DHA的脂肪酸和甘油反应;在最优条件为:反应温度40℃,水分添加量为底物混合物的3%、甘油与脂肪酸摩尔比3∶1和酶添加量50 U/g底物混合物时,富含EPA/DHA的脂肪酸的转化率达到62%以上,此时产物中甘油三酯、甘油二酯、甘油单酯的质量分数分别为10.52%、38.15%、25.64%。将游离酶催化酯化反应产物中的油相回收,利用自制的固定化CALB(LipozymeCALB L固定于环氧树脂ECR8285上)为催化剂,在真空条件下继续催化未反应的脂肪酸与偏甘油酯(甘油单酯和甘油二酯)继续酯化反应12 h,此时产物中甘油三酯、甘油二酯和甘油单酯的质量分数分别达到38.34%、51.02%、10.63%,没有检测到脂肪酸的存在。

D101树脂固定中性蛋白酶的条件优化及酶学性质研究

【目的】提高中性蛋白酶的固定化效果,对D101树脂固定中性蛋白酶的条件进行优化并对固定化酶的酶学性质进行研究。【方法】以D101树脂吸附法固定中性蛋白酶,分别测定不同温度、时间和加酶量条件下固定化酶的固定化效果,并对固定化中性蛋白酶和游离中性蛋白酶的酶学性质进行比较研究。【结果】D101树脂固定中性蛋白酶的最佳固定条件为:加酶量150 U/g,温度40℃,固定时间120 min,此时固定化酶的酶活回收率最高(70%)。固定化中性蛋白酶和游离中性蛋白酶的最适温度分别为46和40℃,最适pH值分别为7.4和7.2,表观米氏常数Km分别为0.22和0.20 mg/mL,最大酶促反应速度Vmax分别为0.39和0.21 mL/min。【结论】以D101树脂固定中性蛋白酶后,固定化中性蛋白酶的活力、酶活回收率以及热稳定性和pH稳定性显著提高。

黑曲霉果胶酯酶固定化前后酶学性质比较研究

采用明胶加戊二醛包埋法和蛋壳微粒吸附法分别对黑曲霉果胶酯酶进行了固定化,并研究了两种固定化方法制备得到的固定化黑曲霉果胶酯酶的酶学性质。结果表明,通过固定化,黑曲霉果胶酯酶的各项酶学性质指标都得到了改善,明胶固定化果胶酯酶和蛋壳固定化果胶酯酶的酶活回收率分别为46.3%和42.2%,而且与游离果胶酯酶相比,两种固定化酶的最适温度都由40℃上升到45℃,最适pH由4.4下降到4.0和4.2,Km值0.0113%由下降到0.0033%和0.0027%。

黑曲霉乳糖酶固定化前后酶学性质比较研究

[目的]为低乳糖乳制品的工业化生产提供技术支持。[方法]以阳离子交换树脂D151为载体，采用吸附交联法对黑曲霉乳糖酶进行固定化，进而研究了固定化乳糖酶的酶学特性。[结果]固定化乳糖酶和游离酶的最适温度分别为60和70℃。在低于50℃的条件下对固定化乳糖酶和游离酶进行保温处理，酶活力没有损失；在高于50℃的条件下对固定化乳糖酶和游离酶进行保温处理，其酶活力呈现下降趋势，且固定化乳糖酶的活力下降更为迅速。固定化乳糖酶和游离酶的最适pH值分别为4．5和4．0，其pH值稳定范围分别为2．5—4．5和5．0～7．0。pH=6．5时，固定化乳糖酶和游离酶的活力分别为其最适pH值下的87．5％和3．8％。固定化乳糖酶和游离酶的半衰期分剐为24和9d。[结论]在牛奶的天然pH值下，固定化乳糖酶比游离酶更适用。

谷胱甘肽硫转移酶(GST)的固定化及酶学特性研究

对谷胱甘肽硫转移酶的固定化、游离酶和固定化酶的酶学特性进行了研究 ,通过试验 ,确定谷胱甘肽硫转移酶的最佳固定化条件为先用 2 %壳聚糖吸附酶 ,然后再加戊二醛交联 ,交联用戊二醛浓度为 1.2 % ,交联时间为 16h ;游离酶的最适温度为 4 5～ 5 5℃ ,最适pH值为 6 .5～ 7.0 ;固定化酶的最适温度为 4 5～ 5 0℃ ,最适pH值为 7.0 ;游离酶和固定化酶的最适酶促反应时间为 30min。

CM-纤维素固定化脂肪酶的研究

目的 研究 CM-纤维素为载体的固定化脂肪酶的制备方法及比较固定化脂肪酶与游离酶在酶学特性上的变化。方法 制备固定化脂肪酶的最适条件是 p H5 .5 ,离子浓度为 0 .0 1mol· L- 1 的柠檬酸缓冲液 ,加酶量为 10 0μ· g- 1 载体 ,固定化反应时间为 8h。结果 所得的固定化酶酶活力为 49.6μ·g- 1载体 ,回收率为 45 % ,最适作用 p H值为 10 .6,最适作用温度为 46℃ ,其催化油脂水解操作半衰期为 2 2 5 h。结论 本固定化酶制备简便 ,可重复使用 ,稳定性较高。

生物法合成熊去氧胆酸研究进展

熊去氧胆酸(UDCA)是治疗肝胆疾病的基础性药物,对某些癌症和神经系统疾病也有辅助治疗作用。化学工艺合成UDCA对环境不友好、收率低,尚不能满足生产需求;生物法合成UDCA具有转化率高、节省能源、对环境友好的特点,目前是UDCA合成的研究发展方向。生物法合成是以廉价易得的鹅去氧胆酸(CDCA)、胆酸(CA)或石胆酸(LCA)为底物,通过7α-HSDH、7β-HSDH、LDH和GDH四种酶催化合成UDCA,合成方法分为游离酶催化和全细胞合成,其中游离酶催化常采用“一锅两步法”或“一锅一步法”合成UDCA;全细胞催化是以构建的工程细胞作为反应容器,利用细胞表达的酶系催化合成UDCA。本文综述了游离酶催化和全细胞合成UDCA的相关用酶、合成方式及合成工艺的研究进展,为UDCA的研究生产提供技术参考。

磁性固定化漆酶在苹果汁除酚中的应用研究

以磁性聚苯乙烯微球为载体,戊二醛为交联剂,制备出了磁性固定化漆酶。研究表明:固定化酶的Km值较游离酶小,最适温度与游离酶相同,最适pH较游离酶下降0.4个单位,热稳定性、pH稳定性和贮存稳定性均较游离酶有所提高。Fe2+、Hg2+、Cr3+对固定化酶有抑制作用,Cu2+对固定化酶有激活作用。抑制剂EDTA、DMSO对磁性固定化酶的抑制作用明显较游离酶小。固定化漆酶在40℃条件下处理2h后,苹果汁中多酚含量减少20%,而酶活力没有变化。

活性炭吸附固定化粪产碱杆菌青霉素G酰化酶

目的:以活性炭为载体固定化粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶,考察固定化酶的性质。方法:对影响酶固定化的因素优化筛选,确定有显著影响的因素:pH、离子强度、酶量、固定化时间进行L934的正交实验,获得最佳固定化条件,并对固定化酶的最适反应温度、pH及批次稳定性进行研究。结果:最佳固定化条件为:载体0.3g,酶量5mL,总反应体系为12mL,离子强度1mol/L,温度4℃,pH 7.0,固定化40h;最高固定化酶活性为135.9U/g湿载体。固定化酶性最适反应温度为55℃,最适pH为10,重复使用12次后没有活性损失。结论:活性炭吸附固定化青霉素G酰化酶的活性高,批次反应稳定,具有工业应用潜力。

纳米球形聚电解质刷固定化酶合成及性质表征研究

为研究用光乳液聚合法合成以聚苯乙烯为核、接枝丙烯酸为单体的纳米球形聚电解质刷,采用透射电子显微镜、傅里叶红外光谱、核磁共振氢谱及激光粒度仪对微球结构进行表征,并以球刷为载体,对碱性蛋白酶进行固定化研究。结果表明:制备的纳米球形聚电解质刷载体平均粒径为80 nm左右,尺寸均一,分散性良好。碱性蛋白酶优化固定化条件为缓冲液pH值9.0、固定化时间6 h、酶液添加量1.2 mg/mL。固定化酶与游离酶比较,最适pH值由游离酶的11.0变化为9.0,最适反应温度由游离酶的45℃提高到60℃,且热稳定性、酸碱稳定性均较游离酶有所提高。经纳米球形电解质刷固定化的碱性蛋白酶,酶的应用范围扩大,更有利于工业化生产。

酶催化合成酯类润滑油综述

随着人们环保意识的不断增强,环境保护问题变得越来越重要。开发环境友好且可生物降解的润滑油代替传统的矿物润滑油是润滑油领域面临的挑战。合成酯润滑油因其具有良好的低温性能,优良的热氧化安定性及优异的生物降解性等而得到了广泛的应用。化学法(直接酯化法和酯交换法)合成酯类润滑油效率高,但存在反应温度高,时间长,副反应多,污染环境,催化剂难以回收等问题。与化学法相比,酶催化合成酯类润滑油反应条件温和,选择性高,能耗低,符合绿色环保的理念。对固定化酶,游离酶及溶剂体系合成酯类润滑油进行了综述。酶催化是绿色合成酯类润滑油的有效途径,具有良好的发展空间和应用前景。

用辣根过氧化物酶催化降解海水中柴油污染的研究

为深入探索酶催化技术在海洋石油污染处理中的应用,以游离辣根过氧化物酶(HRP)催化降解海水中柴油污染,研究了酶用量、溶液p H值、柴油初始浓度和催化反应时间等因素对酶催化降解海水中柴油污染的影响,确定了HRP催化降解海水中柴油污染的优化工艺条件,同时考察了反应助剂对海水中柴油污染去除率的影响。结果表明:HRP能有效催化降解海水的柴油污染,当海水中柴油的质量浓度为1.2g/L时,在温度为25℃、HRP加入量为1.6 U/m L、H_2O_2为250 mg/L、溶液pH为5的条件下,催化降解3 h,柴油去除率可达90.77%;聚乙二醇(PEG)对HRP催化降解海水中的柴油污染有较显著的影响。