脂氧素对脂多糖诱导的巨噬细胞游离钙浓度变化及活性氧的影响

近年来越来越多的研究资料表明炎症反应的及时消退是炎症治疗的重要环节.脂氧素对多种炎症细胞和炎症相关基因有显著的负性调节作用,是体内重要的内源性脂质促炎症消退介质.细胞内游离钙离子浓度变化为巨噬细胞活化的重要第二信使.但脂氧素对巨噬细胞内游离钙浓度变化了解较少.为此,本研究采用细胞内钙离子特异性荧光探针Fluo3-AM和活性氧特异性荧光探针DCFH-DA同时标记小鼠巨噬细胞,用激光共聚焦显微镜同时动态观察脂多糖引起巨噬细胞胞内游离钙浓度和活性氧变化及脂氧素的影响作用.

五味子酮对β-淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元内游离钙离子浓度变化的影响

目的观察中药五味子酮对β-淀粉样蛋白(Aβ25~35)诱导的大鼠海马神经元内游离钙离子浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法采用大鼠海马神经元原代培养技术,运用双激发波荧光指示剂Fura-2/AM标记胞内相对[Ca2+]i的变化并进行比较。结果1μmol/L Aβ25~35作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.5951±0.0311,明显高于空白对照组的0.3617±0.0197(P<0.05);1μmol/L Aβ25~35和100μmol/L五味子酮共同作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.4168±0.0468,仍明显高于空白对照组(P<0.05),但较单纯Aβ25~35作用后明显下降(P<0.05)。结论中药五味子酮可以通过抑制Aβ诱导的神经元[Ca2+]i增加,维持细胞内钙稳态,对神经元有一定的保护作用。

阿魏酸对视网膜神经细胞内游离钙浓度变化的影响

目的研究阿魏酸(FA)对视网膜神经细胞内游离钙([Ca2+]i)水平变化的影响。方法以胚胎7个月人视网膜,新生小牛视网膜和生后4个月小鼠视网膜为研究对象,检测FA作用后[Ca2+]i水平变化。结果500μg/mLFA作用下,胚胎人组[Ca2+]i荧光强度(基值为57.08±3.97)在10s内降至38.41±4.92,维持在38.41±4.92～43.45±3.29;新生小牛组[Ca2+]i(基值为69.48±3.87)在20s内降至52.86±3.69,维持在49.75±3.82～54.39±4.04;成年小鼠组[Ca2+]i(基值为71.54±3.73)在20s内降至54.91±3.57,维持在53.81±3.49～58.14±3.49,且发现胚胎人组[Ca2+]i基值和受光照射后变化明显异于新生期小牛组和成年小鼠组。结论FA能有效降低视网膜神经细胞内游离钙水平,对于促进增殖和保护细胞具有重要作用。

卡托普利晚期预处理对缺氧复氧心肌细胞游离钙的影响

目的观察卡托普利晚期预处理对缺氧复氧心肌细胞游离钙的影响,评价其延迟心肌的保护作用。方法建立培养乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型。设正常对照组、缺氧复氧组、缺氧预适应组、卡托普利预处理组、蛋白激酶C阻断剂+卡托普利组、一氧化氮合酶阻断剂+卡托普利组和核因子κB阻断剂+卡托普利组。利用分光光度计测定丙二醛和超氧化物岐化酶含量;全自动生物化学分析仪测定乳酸脱氢酶含量。Flou3AM负载染色和流式细胞分析技术测定细胞内钙离子浓度。结果卡托普利预处理和缺氧预处理均可减轻缺氧再灌注时心肌细胞内钙离子浓度增加(594±5nmolL、507±32nmolL比789±9nmolL,P<0.01),抑制乳酸脱氢酶和丙二醛的增加和超氧化物岐化酶含量的降低;但与对照组(414±37nmolL)比较钙内流仍有轻度增加(P<0.05);预先分别加入蛋白激酶C阻断剂、一氧化氮合酶阻断剂、核因子κB阻断剂与卡托普利共同孵育细胞,行缺氧复氧损伤所测得细胞内钙离子浓度分别为676±32nmolL、700±37nmolL和689±11nmolL,与卡托普利预处理组比较有所增加(P<0.05);但与缺氧复氧组比较仍有降低(P<0.05)。结论以上提示,卡托普利预处理可抑制缺氧复氧时的钙超载及其脂质过氧化损伤。其机制可能是通过轻度增加钙内流、启动心肌延迟保护作用;其过程可能涉及蛋白激酶C、一氧化氮合酶和核因子κB信号转导通路中的多个环节。

健康人增龄过程中血小板胞浆内游离钙浓度的改变

目的 探讨健康人增龄过程中血小板内游离钙浓度的改变及其病理生理意义.方法 以Fura-z为钙敏感指示剂,应用荧光分光光度计(日立F-4000型)测定17名50～59岁、8名≥60岁男性血小板胞浆游离钙浓度,并以14名20～39岁健康男性为对照.结果 随年龄增高血小板游离钙明显增高,20～39岁血小板游离钙为169.66±36.46nmol/L;50～59岁为237.40±31.0(P<0.01),≥60岁为367.36±220.0(P<0.05).结论 血小板胞浆游离钙浓度随增龄而升高,并参与了衰老和老年人血液高凝性疾病的病理生理变化.

血小板内游离钙检测的研究现状与进展

血小板功能的发挥依赖于血小板的粘附、聚集和释放,而钙离子在其活化反应中起非常重要的调节作用。因而,钙离子的研究引起不少学者的兴趣。由于体外环境和体内生理条件存在的差异,譬如在体内血小板与红、白细胞沿着光滑完整的血管。

用Fura-2/AM测定细胞内游离钙浓度的方法

新型Ca^(2+)荧光指示剂F ura-2/AM由中国医学科学院药物研究所合成。本文详细介绍了用F ura-2/AM测定神经细胞、巨噬细胞和主动脉条平滑肌细胞内游离钙的方法。经比较,国产与Sigma产F ura-2/AM的质量相同。

超微粉碎牦牛骨泥经发酵和酶解后游离钙和氨基酸态氮的变化

用保加利亚乳酸杆菌发酵和用胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解超微粉碎牦牛骨泥,测定骨泥中的游离钙(Ca2+)、氨基酸态氮含量和pH值的变化。结果表明,经保加利亚乳酸杆菌发酵36h后,骨泥中游离钙的含量从12.3mg/100g增加到2145.3mg/100g,而氨基酸态氮的含量从117.7mg/100g增加到233.4mg/100g;经胰蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶分别酶解4h后,游离钙的含量从23.3mg/100g分别增加到89.3mg/100g,62.3mg/100g和52.3mg/100g,氨基酸态氮则从106.5mg/100g分别增加到134.5mg/100g、149.4mg/100g和154.1mg/100g。通过比较显示,利用乳酸菌发酵处理骨泥后,游离钙含量是酶解处理骨泥的24倍,氨基酸态氮含量则为酶解处理的1.5倍。因此发酵比酶解处理能得到更多的游离钙和氨基酸态氮。

灯盏花素对高血压大鼠血小板游离钙浓度和聚集率及心脏重塑的影响

目的:研究灯盏花素、福辛普利、依那普利对自发性高血压大鼠(SHR)血小板游离钙浓度、血小板聚集率和心脏重塑的影响。方法:24只10月龄伴有左心室肥厚(LVH)的SHR随机分为灯盏花素组、福辛普利组、依那普利组和生理氯化钠溶液组(NS组)4组进行为期8周的干预治疗,观察其对SHR收缩压、心率、左心室肥厚指数、心肌细胞超微结构、血小板胞浆游离钙和血小板聚集率的影响。结果:6只SHR的收缩压、左心室肥厚指数、血小板胞浆游离钙浓度和血小板聚集率均显著高于同龄Wistar Kyoto(WKY)大鼠(P均<0.01)。可见心肌细胞肥大、心肌肌浆网扩张和心肌线粒体增生等超微结构改变。血小板胞浆游离钙浓度和血小板聚集率与左心室肥厚指数呈显著正相关(P均<0.01)。与NS组比较,3药均能显著降低左心室肥厚指数、血小板胞浆游离钙浓度和血小板聚集率(P均<0.01),并改善SHR的心肌细胞超微结构;福辛普利和依那普利还能显著降低SHR的收缩压(P均<0.01)。结论:血小板内钙代谢异常和血小板功能改变可能在SHR心脏重塑中起重要作用。灯盏花素、福辛普利和依那普利均能显著降低SHR的血小板胞浆游离钙浓度和血小板聚集率,从而改善sHR心脏重塑。

极低频弱磁场对PC-12瘤细胞胞内游离钙离子浓度的影响

采用极低频弱磁场对鼠嗜铬细胞瘤 PC- 12株系细胞进行照射 ,利用显微荧光技术动态监测胞内游离钙离子浓度 ([(Ca2 + ]i)的变化 ,实验结果表明 :5 0 Hz,10 0 μT的正弦磁场照射引起 [Ca2 + ]i 明显升高 ;而在同等强度的静磁场和 2 0 0 0 Hz正弦磁场照射下 ,[Ca2 + ]i 基本维持不变。进一步的实验说明 [Ca2 + ]i 的升高部分源于细胞外 Ca2 +的跨膜内流 ,部分源于胞内钙库的释放。证实了一定强度下特定频率的极低频弱磁场能够影响钙离子的跨膜运输和胞内钙库的释放 。

大黄素对豚鼠单个心室肌细胞胞浆游离钙浓度及L-型钙电流的影响

目的 研究大黄素 (emodin)对豚鼠心室肌细胞钙信号的影响。方法 酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞 ,应用激光扫描共聚焦显微镜联合全细胞膜片钳技术测量豚鼠心室肌细胞钙信号的变化。结果 在静息状态下 ,1～10 0 μmol·L- 1 大黄素对 [Ca2 +]i 均无影响 ;对 6 0mmol·L- 1 KCl诱导的外钙内流引起的胞浆钙升高有不同的影响 ,1μmol·L- 1 表现为促进作用 ;10 μmol·L- 1 无作用 ;10 0 μmol·L- 1 则表现为抑制作用。膜片钳研究结果表明 ,1μmol·L- 1 大黄素可明显促进L 型钙电流 ,10 μmol·L- 1 对L 型钙电流无影响 ;10 0 μmol·L- 1 明显抑制L 型钙电流。结论 大黄素对心肌细胞内钙及L

柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度和细胞内VCR蓄积的影响

目的:测定中药柴胡(BupleurumChineseDC,BCDC)提取物对人肝癌BEL-7402细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和长春新碱(Vincristine,VCR)浓度的影响,探索柴胡提取物逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制。方法:以Fura2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计分别测定不同条件下的BEL7402细胞内[Ca2+]i。高效液相色谱法测定BCDC作用于BEL-7402后细胞内VCR蓄积情况的变化。结果:柴胡提取物可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降(P<0.001),可使细胞内VCR浓度升高(P<0.01)。结论:柴胡提取物可以增加VCR在BEL7402细胞内的积聚浓度,部分逆转BEL7402细胞的多药耐药(multidrugresistance,MDR)。钙离子通道阻滞作用可能为柴胡提取物逆转BEL7402细胞多药耐药的机制之一。

人参皂甙Rg1对缺氧豚鼠心肌细胞游离钙浓度降低作用的研究

目的 :探讨人参皂甙 (ginsenosides,Gin)单体Rgl及维拉帕米 (verapamil,Ver)对豚鼠心肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)变化的影响。方法 :采用离体豚鼠心脏Langendorff法灌注 ,胶原酶I型分离心肌细胞 ,用荧光指示剂方法 (Fura 2 /AM)标记心肌 ([Ca2 + ]i)变化。将心肌细胞悬液分为 3组 :对照组、Rgl组和Ver组。观察缺氧后心肌[Ca2 + ]i 的变化。结果 :(1)正常氧状态心肌 [Ca2 + ]i 均值为 (12 5 .4± 10 .3)nmol/L(n =2 0 )。 (2 )缺氧状态下 ,心肌[Ca2 + ]i 增加与缺氧时间 (程度 )直线相关 ,相关系数r为 0 .98左右。 (3)Rgl对缺氧后心肌 [Ca2 + ]i 增加明显延缓。结论 :Rgl在缺氧条件下 ,使心肌 [Ca2 + ]i 明显下降 ,从而阻止心肌细胞内钙超载 ,其作用与Ver相似 。

呼吸衰竭患儿红细胞胞浆游离钙的观察

本文采用新型Ca^(2+)荧光指示剂Fura-2法,观察了16例呼吸衰竭患儿和20例健康对照儿红细胞胞浆游离钙浓度变化,结果显示患儿红细胞胞浆游离钙浓度明显高于健康对照儿(P<0.001)。9例抢救成活患儿恢复期红细胞胞浆游离钙浓度明显下降(与呼衰期比较,P<0.001)。机体严重缺氧或缺血缺氧可能是导致细胞内胞浆游离钙浓度异常升高的重要原因。

虎杖甙对正常大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响

目的：观察虎杖甙（ＰＤ）对培养的大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）内钙离子浓度的变化机理。方法：用Ｆｌｕｏ－３－ＡＭ标记培养的ＶＳＭＣ，在粘附式细胞仪上测定细胞内游离钙的变化。结果：实验结果表明，ＰＤ（００２～２０ｍｍｏｌ／Ｌ）可使大鼠ＶＳＭＣ内游离钙浓度升高，波形变宽，其引起的钙波形态与去甲肾上腺素（ＮＥ）及氯化钾所引起的高尖钙波不同，ＰＤ使ＶＳＭＣ产生一种剂量依赖性的、持续缓慢升高的钙波。ＰＤ引起的细胞内游离钙升高可被ＥＧＴＡ（２ｍｍｏｌ／Ｌ）及维拉帕米（５０μｍｏｌ／Ｌ）明显抑制。结论：以上结果提示ＰＤ既促进ＶＳＭＣ外钙离子进入细胞内，还能诱导细胞内钙离子释放；ＰＤ可能会提高正常ＶＳＭＣ的收缩性，增加正常血管的张力。

小檗碱对豚鼠结肠平滑肌细胞内游离钙浓度的影响

采用Ca2 +荧光示踪剂Fura 2 AM和双波长荧光分光光度法 ,观察小檗碱 (berberine ,Ber)对酶法分离的豚鼠结肠平滑肌细胞内游离钙 ([Ca2 +]i)的影响并探讨其机制。在含 1 5mmol/LCaCl2 的HEPES Ringer缓冲液中 ,豚鼠结肠平滑肌细胞 [Ca2 +]i为 10 8± 9 4nmol/L (n =7) ,Ber对静息 [Ca2 +]i 无明显影响 ,Ber呈浓度依赖性抑制 ,6 0mmol/LKCl引起的 [Ca2 +]i 增高 ,IC50 值为 34 0 9μmol/L。在含 1 5mmol/LCa2 +和无Ca2 +的缓冲液中 ,30、10 0μmol/LBer均显著抑制 10 μmol/LACh所诱发的 [Ca2 +]i 的增高 ,且有浓度依赖性 ;同样Ber对环匹阿尼酸 (CPA)所致的 [Ca2 +]i 增高也有浓度依赖性抑制作用 ,有钙和无钙条件下IC50 分别为 37 97μmol/L和 49 70 μmol/L。结果提示 ,Ber对结肠平滑肌细胞外Ca2 +内流和细胞内钙释放均有抑制作用。

脑创伤后神经元细胞内游离钙的变化及其影响因素(英文)

目的:研究液压冲击伤时体外培养的单个大鼠神经细胞内游离钙(犤Ca2+犦i)的变化,探讨尼莫地平D-2氨基戊酸(D-2-amino-5-phosphono-valericacid,D-AP-5)和亚低温对创伤后细胞内犤Ca2+犦i的影响及其机制。方法:以Fluo-3/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用激光共聚焦显微镜测定液压冲击伤时体外培养的单个大鼠神经细胞内游离钙(犤Ca2+犦i)的变化。结果:液压冲击伤后脑皮质细胞内游离Ca2+迅速升高,24h达高峰,随后逐渐下降,48h仍维持较高水平犤(411.29±52.46),(396.53±51.32)nmol/L犦,尼莫地平,D-AP-5于各时相关均降低细胞内犤Ca2+犦i,其中Nimodipine10h内应用最佳犤6h:(98.65±15.65)nmol/L犦,D-AP-5于1～10h应用较好而亚低温30min内显著降低细胞内犤Ca2+犦i(t=13.74,P<0.001),最佳时机在伤后15min内,伤后1h以上无效。结论:创伤后神经元细胞内钙超载,尼莫地平、D-AP-5和亚低温均降低细胞内犤Ca2+犦i,但各自最佳时间窗不同,揭示对创伤后神经细胞Ca2+超载应注意综合治疗,并选定各自作用最佳时间窗。

低浓度双氢哇巴因对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度的影响(英文)

用激光共聚焦显微镜检查研究低浓度双氢哇巴因 (DHO)对豚鼠心室肌细胞内钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。DHO 1fmol/L～ 1mmol/L可增加心室肌细胞的 [Ca2 + ]i,尤其以 10 pmol/LDHO为显著。Nisoldipine、EG TA或TTX可分别部分抑制 10 pmol/LDHO的作用。去除胞外K+ 和Na+ 后 ,上述作用仍存在。以上结果表明 ,低浓度DHO可通过激活钙通道和TTX敏感的钠通道 ,或许还可直接促进胞内钙释放来增加 [Ca2 + ]i,并有不依赖Na+ /K+ 泵而升高 [Ca2 +

赤芍对高脂兔血小板胞浆游离钙、红细胞膜Ca^（2＋）－Mg^（2＋）－ATP酶活性的影响

本研究观察了赤芍对高脂兔血小板胞浆游离钙（［Ｃａ２＋］ｉ）、红细胞膜钙－镁－ＡＴＰ酶（Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ）活性血清钙及血脂的影响。结果表明：血小板［Ｃａ２＋］ｉ含量赤芍组（２７６．２５±２７．００ｎｍｏｌ／Ｌ）显著低于高脂组（３９０．８８±７０．００ｎｍｏｌ／Ｌ），Ｐ＜０．０１；红细胞膜Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ基础及激活活性（μｍｏｌ·ｐｉ－１·ｍｇ－１·ｈ－１）赤芍组（０．７９±０．０５，１．３４±０．１０）明显高于高脂组（０．６５±０．０９，１．０４±０．１３），Ｐ＜０．０１。说明赤芍可提高高脂血症兔红细胞Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶基础及激活活性。