巨噬细胞游走抑制因子在卵巢癌侵袭中的作用与意义

背景与目的:巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)与肿瘤的恶性进展密切相关。本研究探讨MIF基因对卵巢癌HO-8910和OVCAR-3细胞侵袭和增殖能力的影响及其在卵巢癌组织中表达的意义。方法:瞬时转染小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)靶向敲除MIF基因,RT-PCR和Westernblot检测MIF在mRNA和蛋白水平的表达,通过体外迁移、侵袭实验和噻唑蓝比色法(MTT)分析MIF对HO-8910和OVCAR-3细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响;免疫组织化学检测MIF蛋白在卵巢癌组织中的表达情况。结果:与阴性对照组细胞比较,瞬时转染MIFsiRNA的HO-8910和OVCAR-3细胞中MIF基因表达水平明显降低。MTT结果显示,转染MIFsiRNA的两株卵巢癌细胞增殖率显著低于阴性对照组(P<0.05)。转染MIFsiRNA的HO-8910细胞穿膜细胞数(MIF-si1:48.0±7.3;MIF-si2:38.0±3.6)与阴性对照组(78.0±8.5)比较差异有统计学意义(P<0.05),其穿过铺了Matrigel膜的细胞数(MIF-si1:35.0±5.0;MIF-si2:30.0±5.6)也显著少于阴性对照组(P<0.05)。同样,转染了MIFsiRNA的OVCAR-3细胞穿膜细胞数(MIF-si1:40.0±4.5;MIF-si2:42.0±3.0)与阴性对照组(65±2.1)比较,差异也有统计学意义(P<0.05),其穿过铺了Matrigel膜的细胞数(MIF-si1:25.0±3.0;MIF-si2:27.0±3.4)也明显低于阴性对照组(P<0.05)。53.6%(37/69)卵巢癌组织中有MIF蛋白表达,MIF蛋白表达与肿瘤临床分期呈显著正相关(P<0.01)。结论:MIF基因可能通过促进肿瘤细胞的增殖和侵袭能力在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用,有可能成为分子靶向治疗卵巢癌的潜在靶点。

房水和血清中单核细胞趋化蛋白-1和巨噬细胞游走抑制因子变化与2型糖尿病视网膜病变的关系

背景研究发现，巨噬细胞和白细胞等炎性细胞参与糖尿病视网膜病变（DR）的发生发展，有多种细胞因子在DR的发生发展过程中发挥促进作用，但DR患者的房水及血清中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和巨噬细胞游走抑制因子（MIF）水平的变化与DR病程的关系尚不完全清楚。目的探讨2型糖尿病患者房水中MCP-1和MIF的水平与DR病程的关系。方法纳入2010年9月至2011年6月在北京世纪坛医院眼科和内分泌科确诊的2型糖尿病合并白内障并已行白内障超声乳化手术或超声乳化联合玻璃体切割术患者80例，根据眼底情况分为无DR（NDR）组20例、非增生型DR（NPDR）组38例和增生型DR（PDR）组22例，并收集同期的非糖尿病白内障手术患者即对照组26例，各组患者年龄、性别分布的差异均无统计学意义。所有患者于术中抽取未稀释的房水0．1ml，分别采用ELISA法检测房水中MCP-1和MIF的质量浓度并进行组间比较。结果PDR组、NPDR组、NDR组、对照组房水中平均MCP-1的质量浓度分别为（1660．78±562．98）、（1463．26±623．41）、（686．76±186．16）、（494．35±148．59）ng／L，总体比较差异有统计学意义（F=37．968，P=0．000），对照组与NDR组以及NPDR组与PDR组房水中MCP-1的质量浓度比较差异均无统计学意义（P=0．169、0．117）；NDR组以及NPDR组与PDR组房水中MCP-1的质量浓度均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P=0．000）。PDR组、NPDR组、NDR组、对照组患者房水中平均MIF的质量浓度分别为（6．85±1．99）、（3．56±0．90）、（1．10±0．48）、（0．86±0．46）μg／L，总体比较差异有统计学意义（F=144．502，P=0．000）；对照组与NDR组房水中MIF的质量浓度比较差异无统计学意义（P=0．475）；其余各组间两两比较差异均有统计学意义（P=0．000）。所有受检者房水中MCP-1与MIF质量浓度变化呈正相关（r=0．564，P=0．000）。PDR组、NPDR组、NDR组血清中MCP-1和MIF质量浓度较对照组均有所增加，但4个组间MCP-1和MIF质量浓度的总体比较差异均无统计学意义（F=2．158、0．813，P〉0．05）。结论糖尿病患者房水中MCP一1和MIF与DR的严重程度密切相关，MCP一1和MIF在DR的损伤机制中有协同作用。

特应性皮炎患儿外周血巨噬细胞游走抑制因子及IL-17和IL-23的表达及其相关性研究

目的检测特应性皮炎(AD)患儿外周血单个核细胞(PBMCs)中巨噬细胞游走抑制因子(MIF)、IL-17和IL-23 mRNA表达水平及血清水平,并探讨其相关性。方法选择2010年4—11月在我院门诊就诊的36例AD患儿为病例组,同期在我院体检正常儿33例为对照组,采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组受试者PBMCs中MIF、IL-17和IL-23 mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验检测其血清MIF、IL-17和IL-23水平。结果病例组PBMCs中MIF、IL-17和IL-23 mRNA表达水平分别为(5.93±2.35)、(6.76±1.87)和(3.21±0.73),对照组分别为(1.83±0.69)、(1.77±0.51)和(0.92±0.22),病例组PBMCs中MIF、IL-17和IL-23mRNA表达水平均高于对照组(P<0.01)。病例组血清MIF、IL-17和IL-23水平分别为(34.92±8.73)μg/L、(33.29±5.70)ng/L和(54.62±9.69)ng/L,对照组分别为(9.80±2.21)μg/L、(11.71±2.08)ng/L和(18.97±4.39)ng/L,病例组血清MIF、IL-17和IL-23水平均高于对照组(P<0.01)。线性相关分析结果显示,AD患儿PBMCs中MIF mRNA表达水平(r=0.418,P=0.011)及血清MIF水平(r=0.419,P=0.011)与疾病严重程度(SCORAD)评分均呈正相关;PBMCs中MIF mRNA表达水平与IL-17 mRNA、IL-23 mRNA表达水平均呈正相关(rIL-17 mRNA=0.395,P=0.017;rIL-23 mRNA=0.422,P=0.010);血清MIF水平与IL-17、IL-23水平均呈正相关(rIL-17=0.407,P=0.014;rIL-23=0.375,P=0.024)。结论 MIF在AD患儿中高表达,且与IL-17、IL-23密切相关,炎性因子间的相互作用可能共同参与了AD的发生、发展。

周围神经损伤后雪旺细胞分泌巨噬细胞游走抑制因子的变化

目的研究损伤的周围神经能否激活和促进雪旺细胞分泌巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)。方法切取SD乳鼠损伤和未损伤的臂丛及坐骨神经,分离、纯化、培养雪旺细胞,72 h后分别收集培养基,即得损伤神经雪旺细胞条件培养基及未损伤神经雪旺细胞条件培养基,以含10%小牛血清的DMEM/F12培养基为对照组,用ELISA法测定其中的MIF含量。结果损伤神经雪旺细胞条件培养基中MIF含量明显高于未损伤神经雪旺细胞条件培养基及对照组,未损伤神经雪旺细胞条件培养基中MIF与对照组无明显差异。结论损伤的周围神经能激活和促进雪旺细胞分泌MIF,在激活巨噬细胞、调节免疫炎症反应过程中可能起重要作用。

激活蛋白-1、巨噬细胞游走抑制因子与人颈动脉粥样硬化斑块的关系研究

目的探讨激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)、巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)在人颈动脉粥样硬化斑块中的表达变化及作用机制。方法收集60例人颈动脉粥样硬化斑块标本(试验组,A组)和30例正常人肠系膜动脉标本(对照组,B组)。根据颈动脉超声检查结果将颈动脉粥样硬化斑块标本分为软斑组(A1,n=20)、混合斑块组(A2,n=20)、硬斑组(A3,n=20)。分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法测定标本中AP-1亚单位c-Jun mRNA及蛋白表达水平,反映AP-1的表达水平。用酶联免疫法(ELISA)测定斑块组和对照组血清中MIF水平。结果 (1)人颈动脉粥样硬化斑块中c-Jun mRNA及蛋白较对照组表达上调(P<0.05),A1组较A3组表达显著升高(P<0.05),A2组与A1组和A3组分别比较无明显差异(P>0.05)。(2)斑块组比健康对照组血清中MIF的含量显著增高(P<0.05);A1组较A3组含量显著增高(P<0.05),A2组与A1组和A3组分别比较无明显差异(P>0.05)。(3)在人颈动脉粥样硬化斑块中,MIF浓度与c-Jun表达水平明显呈正相关(r=0.759,P<0.01)。结论 AP-1和MIF与人颈动脉粥样硬化斑块的形成及稳定性显著相关,其可能作为预测颈动脉粥样硬化斑块病变情况及斑块稳定性的一个指标。AP-1表达量与MIF浓度越高,斑块不稳定性越高。

姜黄素对糖尿病大鼠视网膜中巨噬细胞游走抑制因子表达的影响

目的检测巨噬细胞游走抑制因子(MIF)在糖尿病大鼠视网膜中的表达,探讨MIF在糖尿病视网膜病变(DR)中的作用及姜黄素早期干预对其表达的影响。方法对30只清洁级SD大鼠行腹腔注射质量分数1%链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病动物模型,选取其中的20只随机分为糖尿病组和姜黄素治疗组,各10只,另取10只正常匹配的大鼠作为正常对照组。姜黄素治疗组自STZ注射后3d起给予含羧甲基纤维素的姜黄素200mg/(kg.d)灌胃,共8周,正常对照组和糖尿病组给予等量的羧甲基纤维素灌胃。动物处死后收集各组大鼠眼球,苏木精-伊红染色观察大鼠视网膜组织的病理变化;采用ELISA法检测各组大鼠视网膜组织中MIF的表达;应用免疫组织化学法观察各实验组大鼠视网膜中MIF的表达及定位;透射电镜下观察大鼠视网膜超微结构的改变。结果与正常对照组比较,糖尿病组大鼠和姜黄素治疗组大鼠血糖明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);姜黄素治疗组大鼠血糖水平明显低于糖尿病组,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常对照组比较,糖尿病组和姜黄素治疗组大鼠体重明显下降,差异均有统计学意义(P<0.01);姜黄素治疗组大鼠体重明显大于糖尿病组,差异有统计学意义(P<0.01)。糖尿病组大鼠视网膜变薄,但姜黄素治疗组大鼠视网膜接近正常。免疫组织化学检测表明,糖尿病组视网膜组织中含有大量MIF阳性细胞,姜黄素治疗组视网膜中MIF表达明显少于糖尿病组(P<0.01)。ELISA法检测结果显示,糖尿病组MIF的表达较正常对照组显著升高(P<0.01);姜黄素治疗组MIF的表达较糖尿病组明显下降(P<0.01)。透射电镜下糖尿病组大鼠视网膜光感受器内外节水肿,毛细血管内皮细胞和周细胞染色体边集;姜黄素治疗组大鼠视网膜超微结构的改变轻微。结论 DR与视网膜的炎性改变有关,视网膜组织中MIF的高表达参与早期DR的发生发展。姜黄素可下调MIF的表达,其早期干预可延缓DR的发病进程。

血浆巨噬细胞游走抑制因子和颈动脉斑块性质与进展性脑梗死的关系

目的探讨血浆巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration-inhihitory factors,MIF)水平、颈动脉斑块性质与进展性脑梗死患者的关系。方法选择急性前循环脑梗死患者106例,根据临床表现分为进展性脑梗死组(进展组)56例和非进展性脑梗死组(非进展组)50例;另选健康体检者40例为对照组。采用ELISA法检测血浆MIF,同时行颈动脉多普勒超声检查。根据斑块性质,脑梗死患者又分为无斑块26例、稳定斑块40例和不稳定斑块40例,并进行MIF比较。结果进展组症状相关侧颈动脉斑块以不稳定斑块为主,占44.6%;与非进展组MIF(19.50±4.66)μg/L和对照组(23.06±5.10)μg/L比较,进展组MIF(26.24±6.08)μg/L明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);脑梗死不稳定斑块、稳定斑块、无斑块患者MIF分别为(26.48±6.12)μg/L(23.45±5.04)μg/L、(21.12±4.53)μg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血浆MIF水平的升高和颈动脉斑块不稳定性与进展性脑梗死的发生密切相关。

炎症活动的生物标志物巨噬细胞游走抑制因子的研究进展

1966年有研究发现了一种水溶性的蛋白分子,因其由活化T细胞分泌,可抑制离体巨噬细胞的迁移而命名巨噬细胞游走抑制因子（MIF）[1-2]。研究发现,在结核菌素引起的迟发超敏反应中,MIF可以促使巨噬细胞聚集在炎症组织中。

免疫复合物致疼痛与甲醛致炎性痛的大鼠模型比较及巨噬细胞游走抑制因子在两组模型中的表达

目的比较免疫复合物所致疼痛模型与甲醛致炎性疼痛模型的大鼠疼痛行为、局部炎症反应及巨噬细胞游走抑制因子在不同模型不同部位的表达,探讨免疫复合物所致疼痛的病理机制。方法成年SD清洁级大鼠15只,随机分为正常对照组,甲醛组及免疫复合物组,每组5只。分别在大鼠右后足底注入20μL PBS、甲醛及免疫复合物。于30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h测定疼痛行为。并于12 h后采血、取大鼠局部皮肤及脊髓测定巨噬细胞游走抑制因子(MIF)表达。结果疼痛行为变化:在甲醛致炎后大鼠立刻出现明显的自发痛,疼痛阈值明显下降,注射足高度肿胀并于1 h达高峰后逐渐缓解。免疫复合物组的疼痛阈值低峰在4 h后,并持续至8 h后逐渐缓解,注射足肿胀不明显。皮肤及脊髓的MIF表达在甲醛组明显增加(P<0.05),在免疫复合物组中无明显改变。结论 MIF参与炎症性疼痛病理过程,但无证据参与免疫复合物所致疼痛。抗原抗体复合物所致疼痛与甲醛炎性痛病理机制有一定区别。

巨噬细胞游走抑制因子在子宫内膜增生症及Ⅰ型子宫内膜癌中的表达及关系

目的通过检测子宫内膜增生症及I型子宫内膜癌组织中巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的表达,分析其与子宫内膜增生症及Ⅰ型子宫内膜癌临床病理特征的联系。方法采用免疫组织化学二步法检测65例I型子宫内膜癌组织、47例子宫内膜增生症(典型性增生30例,非典型增生17例)和22例正常增生期子宫内膜标本的MIF蛋白表达水平。结果 MIF在正常子宫内膜、子宫内膜增生症及Ⅰ型子宫内膜癌三种组织中均可见表达。在子宫内膜增生症组织中的阳性表达率为57.45%,在Ⅰ型子宫内膜癌组织中阳性表达率为87.69%。正常内膜、子宫内膜增生症及I型子宫内膜癌,经统计学卡方检验,三组标本的阳性表达具有显著性统计学差异(P=0.000);MIF在子宫内膜典型性增生组中的阳性表达率为46.67%,在非典型增生过长的子宫内膜中的阳性表达率为76.47%,二者差异具有统计学意义(P=0.047);MIF与I型子宫内膜癌病理分级、FIGO分期、肌层浸润、淋巴结有无转移等临床病理特征无显著相关性(P>0.05)。结论 MIF的表达与子宫内膜病变程度有关。

巨噬细胞游走抑制因子在复杂区域疼痛综合征1型胫骨骨折大鼠模型中的表达及作用

目的探讨巨噬细胞游走抑制因子(MIF)在复杂区域疼痛综合征1型(CRPS1)的表达及MIF靶向阻断对CRPS1大鼠疼痛行为的影响。方法健康成年雄性SD大鼠50只,随机分为正常组、假手术组、模型组、治疗对照组及MIF抑制剂(ISO-1)治疗组。后3组均进行CRPS1远端胫骨骨折造模;ISO-1治疗组在骨折2周后开始将ISO-1溶解于10μl5%DMSO后行皮下注射,1mg/(kg.d),连续14d;治疗对照组同期皮下注射10μl 5%DMSO作为对照。测定各组大鼠治疗前后下肢肿胀程度及痛觉阈值并进行比较;采用ELISA、蛋白质印迹法测定各组大鼠血清、脑脊液、皮肤、坐骨神经和脊髓中MIF蛋白的表达并进行比较。结果模型组大鼠后足明显肿胀,疼痛阈值明显下降,与基线值及对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。MIF抑制剂ISO-1治疗组的下肢肿胀及痛觉阈值均有改善,与模型组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗对照组及MIF抑制剂(ISO-1)治疗组的MIF在血清、脑脊液、皮肤、坐骨神经和脊髓的表达均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 MIF是CRPS1的关键性炎症因子,抗MIF可能成为其新的靶向治疗手段。

巨噬细胞游走抑制因子通过PI3K／Akt信号通路调控人结肠癌细胞株HT-29增殖和血管生成因子表达

背景：巨噬细胞游走抑制因子（MIF）是-种多功能细胞因子，其在结直肠癌发生、发展中的作用机制尚不明确。目的：探讨MIF是否通过P13K／Akt信号通路调控人结肠癌细胞增殖和血管生成因子表达。方法：人结肠癌细胞株HT-29分为对照组（RPMI-1640）、重组人MIF（rhMIF）组、PI3K抑制剂LY294002组和LY294002预处理联合rhMIF组，并予相应干预。以甲基噻唑基四唑（MTT）法检测HT-29细胞增殖状态，分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素-8（IL-8）mRNA表达和蛋白分泌，蛋白质印迹法检测Akt和磷酸化Akt（p—Akt）蛋白表达。结果：rhMIF对HT-29细胞具有促增殖作用，能增加细胞VEGF、IL-8 mRNA表达和蛋白分泌，并促进Akt蛋白磷酸化（P＜0．05）；而先予LY294002预处理可显著抑制rhMIF的上述作用．HT-29细胞增殖显著受抑（P＜0．05），VEGF、IL-8mRNA表达、蛋白分泌以及p-Akt蛋白水平与对照组相比无明显差异。各组总Akt蛋白水平均无明显差异。结论：MIF诱导人结肠癌细胞增殖和血管生成因子表达可能是通过活化PI3K／Akt信号通路实现的。

血管性痴呆患者血浆同型半胱氨酸和巨噬细胞游走抑制因子的表达及与病情严重程度的相关性分析

目的分析血管性痴呆(vascular dementia,VD)患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)和巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)的表达及与病情严重程度的相关性。方法我院临床确诊的113例血管性痴呆患者(VD组),同期健康体检者34例(健康组)及确诊脑血管病患者39例(非痴呆脑血管病组)。对比各组Hcy及MIF的变化及病情,以及VD组中不同病情严重程度者Hcy与MIF水平差异,分析Hcy、MIF的表达与病情的相关性。结果与健康组相比,VD组和非痴呆脑血管病组Hcy、MIF水平偏高,MMSE评分偏低,其中VD组Hcy、MIF水平最高,MMSE评分最低(P<0.05);VD组不同病情程度者Hcy、MIF表达水平比较,轻度组<中度组<重度组(P<0.05);血管性痴呆患者Hcy、MIF表达与MMSE评分呈负相关(P<0.05)。结论血管性痴呆患者Hcy、MIF的表达水平与疾病严重程度具有相关性,Hcy、MIF水平越高,患者病情越严重。

巨噬细胞游走抑制因子在冠心病诊断及治疗中的价值

巨噬细胞游走抑制因子（macrophage migration.inhibitory factor,MIF）是1966年发现的一种高度保守的与炎症性疾病密切相关的因子。炎症在冠状动脉粥样硬化发生发展中发挥着重要的作用,研究发现MIF通过其促炎及促基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）表达的作用,参与了动脉粥样硬化的发生及发展过程.且可降低动脉粥样硬化斑块的稳定性,在急性冠状动脉综合征（acute coronary syndrome,ACS）的发病中发挥着重要的作用。本文将简述MIF在冠心病诊断与治疗中的潜在的临床应用价值。

冠心病患者血浆激活蛋白-1、巨噬细胞游走抑制因子水平和冠状动脉病变的关系

目的探讨冠心病患者血浆巨噬细胞游走抑制因子(MIF)水平和外周血白细胞激活蛋白-1(AP-1)表达量与冠状动脉粥样硬化病变的关系。方法根据冠状动脉造影结果将142例患者分为冠心病组和对照组,冠心病组根据临床类型分为稳定型心绞痛(SAP)亚组和急性冠状动脉综合征(ACS)亚组,根据冠状动脉病变类型分为A型病变亚组、B型病变亚组和C型病变亚组,根据冠状动脉病变程度分为轻度病变亚组、中度病变亚组和重度病变亚组。通过ELISA法测定外周血白细胞裂解液中磷酸化c-Jun吸光度,反映活化AP-1的数量。血浆MIF通过ELISA法测定。结果冠心病组磷酸化c-Jun表达量明显高于对照组(1.43±0.33比0.71±0.13,P<0.01),MIF水平明显高于对照组(14.97±4.11 ng/mL比9.07±1.28 ng/mL,P<0.01)。冠心病组中,ACS亚组磷酸化c-Jun表达量明显高于SAP亚组(1.56±0.28比1.14±0.25,P<0.01),MIF水平明显高于SAP亚组(16.66±3.56 ng/mL比11.01±2.12 ng/mL,P<0.01)。磷酸化c-Jun表达量和MIF浓度随冠状动脉病变类型和冠状动脉病变程度的加重而逐渐升高。结论AP-1和MIF与冠状动脉粥样硬化发生及冠状动脉病变情况显著相关,其可能作为预测冠状动脉粥样硬化病变情况及斑块稳定性的一个指标。AP-1表达量与MIF浓度越高,斑块不稳定性越高。

大鼠脑梗死灶周围巨噬细胞游走抑制因子的表达及其变化规律

目的研究大鼠脑梗死灶周围巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的表达及变化,探讨MIF在脑梗死过程中的作用及意义。方法采用电凝法构建大鼠大脑中动脉闭塞模型,随机分为假手术组8只和脑梗死组48只,其中脑梗死组又分为4 h、12 h,1 d、3 d,1周、2周6个时间点,每个时间点8只,应用蛋白免疫印迹和荧光定量PCR技术检测脑梗死大鼠梗死灶周围MIF蛋白含量及其mRNA的表达水平。结果脑梗死组大鼠梗死灶周围MIF蛋白及mRNA表达在梗死后逐渐升高,梗死后4 h、12 h,1 d、3 d明显高于对照组(P<0.05)。大鼠梗死灶MIF蛋白含量与mNSS评分和MIF mRNA呈正相关(r=0.661,P=0.000;r=0.733,P=0.000)。结论大鼠脑梗死灶周围MIF蛋白及其mRNA表达水平呈先增高后恢复正常的变化规律,提示MIF在脑梗死病变过程中发挥重要作用。

人工关节假体磨损颗粒对巨噬细胞游走抑制因子表达的影响

目的:观察人工关节假体磨损颗粒对巨噬细胞游走抑制因子表达的影响。方法:配制钛颗粒悬液,并培养小鼠巨噬细胞。将培养的第3代小鼠巨噬细胞分别进行以下实验:①将细胞分为4组,A组不作任何处理,B组加入浓度为0.01%的钛颗粒;C组加入浓度为0.05%的钛颗粒,D组加入浓度为0.1%的钛颗粒。培养24 h后分别用酶联免疫吸附剂测定法和聚合酶链式反应法检测各组的巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA的含量。②将细胞分2组,对照组不作任何处理,观察组加入浓度为0.1%的钛颗粒。分别在实验开始后0 h、6 h、12 h、24 h和36 h对2组的不同培养孔的细胞用酶联免疫吸附剂测定法和聚合酶链式反应法检测各组的巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA的含量。③将细胞分为4组,Ⅰ组不作任何处理,Ⅱ组加入浓度为0.1%的钛颗粒,Ⅲ组加入浓度为100μmol.mL-1的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐,Ⅳ组先加入浓度为100μmol.mL-1的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐,1 h后再加入浓度为0.1%的钛颗粒。培养24 h后用酶联免疫吸附剂测定法检测各组的巨噬细胞游走抑制因子蛋白含量。④将细胞分为2组,a组不作任何处理,b组加入浓度为0.1%的钛颗粒。分别在实验开始后0 h、0.5 h、1 h、3 h和6 h对2组的不同培养孔的细胞用酶联免疫吸附剂测定法测定磷酸化p65的含量。结果:①钛颗粒浓度对巨噬细胞游走抑制因子表达的影响:各组小鼠巨噬细胞巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA含量的组间比较,差异均有统计学意义(F=207.158,P=0.000;F=64.955,P=0.000)。A组巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA的含量[(3.93±0.11)ng.mL-1,(0.03±0.01)]与B组[(4.21±0.27)ng.mL-1,(0.10±0.01)]比较,差异无统计学意义(P=0.167;P=0.223);A组小于C组[(6.56±0.27)ng.mL-1,(0.25±0.09)],差异有统计学意义(P=0.000;P=0.004);A组小于D组[(7.82±0.21)ng.mL-1,(0.70±0.09)],差异有统计学意义(P=0.000;P=0.000);B组小于C组(P=0.000;P=0.025)和D组(P=0.000;P=0.000);C组小于D组(P=0.000;P=0.000)。②钛颗粒刺激时间对巨噬细胞游走抑制因子的影响:对照组巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA含量各时点间比较,差异无统计学意义(F=0.310,P=0.865;F=0.065,P=0.991)。观察组巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA含量各时点间比较,差异有统计学意义(F=32.857,P=0.000;F=15.621,P=0.000),各时点间两两比较:6 h时的巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA表达量[(4.14±0.24)ng.mL-1,(0.08±0.04)]与0 h[(3.60±0.40)ng.mL-1,(0.03±0.01)]比较,差异无统计学意义(P=0.133;P=0.621);12 h的表达量[(5.61±0.47)ng.mL-1,(0.36±0.21)]大于0 h,差异有统计学意义(P=0.000;P=0.004);24 h的表达量[(7.15±0.10)ng.mL-1,(0.71±0.12)]大于12 h,差异有统计学意义(P=0.000;P=0.003);36 h的表达量[(5.22±0.85)ng.mL-1,(0.31±0.18)]小于24 h,差异有统计学意义(P=0.000;P=0.004),但高于0 h的表达量(P=0.000;P=0.003)。③钛颗粒和吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对巨噬细胞表达巨噬细胞游走抑制因子蛋白的影响:实验结束后4组小鼠巨噬细胞的巨噬细胞游走抑制因子蛋白量分别为,Ⅰ组(3.77±0.42)ng.mL-1,Ⅱ组(7.59±0.28)ng.mL-1,Ⅲ组(4.23±0.42)ng.mL-1,Ⅳ组(6.48±0.5)ng.mL-1。析因方差分析结果提示,单独使用0.1%钛颗粒能促进巨噬细胞表达巨噬细胞游走抑制因子蛋白(F=153.363,P=0.000);单独使用100μmol.mL-1的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对巨噬细胞表达巨噬细胞游走抑制因子蛋白无影响(F=1.762,P=0.221);100μmol.mL-1的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对0.1%钛颗粒促进巨噬细胞表达巨噬细胞游走抑制因子蛋白具有抑制效应(F=10.325,P=0.012)。④钛颗粒浓度对巨噬细胞NF-κB信号通路的影响:a组各时点磷酸化p65含量比较,差异无统计学意义(F=0.248,P=0.904)。b组各时点磷酸化p65含量比较,差异有统计学意义(F=30.217,P=0.000),各时点间两两比较:0.5 h磷酸化p65含量[(17.68±0.55)pg.mg-1]高于0 h[(10.38±3.18)pg.mg-1],差异有统计学意义(P=0.005);1 h磷酸化p65含量[(23.31±2.05)pg.mg-1]高于0.5 h,差异有统计学意义(P=0.020);3 h磷酸化p65含量[(31.80±1.84)pg.mg-1]高于1 h,差异有统计学意义(P=0.002);6 h磷酸化p65含量[(18.42±3.61)pg.mg-1]低于3 h(P=0.000),但高于0 h(P=0.003)。结论:人工关节假体磨损颗粒可通过NF-κB信号通路上调巨噬细胞游走抑制因子的表达,促进假体周围炎症反应,导致假体周围骨吸收、溶解,导致假体无菌性松动。

脂多糖诱导钛种植体周围骨髓间质细胞炎症中的巨噬细胞游走抑制因子

背景:目前大量研究证实,巨噬细胞游走抑制因子在多种生物活动中发挥着重要的作用,如肿瘤的发生发展等,近年来发现其在机体发生的炎症过程中也扮演者重要的角色,也取得了很多成绩,然而在口腔内牙种植体周围这一特殊的环境中,巨噬细胞游走抑制因子是否发挥着作用以及发挥着怎样的作用,尚不清楚。目的:观察巨噬细胞游走抑制因子在经过脂多糖诱导纯钛材料周围生长的骨髓间质细胞发生的炎症中发挥的作用。方法:首先将骨髓间质细胞接种于钛细胞培养爬片上,模拟口内种植体周围环境,实验分4组:对照组为不加任何刺激的骨髓间质细胞;脂多糖组利用脂多糖诱导骨髓间质细胞发生炎症;非特异性si RNA+脂多糖组利用脂多糖刺激转染过非特异性小干扰RNA的骨髓间质细胞;巨噬细胞游走抑制因子siR NA+脂多糖组利用脂多糖刺激转染过巨噬细胞游走抑制因子靶向小干扰RNA的骨髓间质细胞。结果与结论:实验通过流式细胞筛选技术,筛选出细胞表面蛋白CD29、CD90阳性率大于95%,而且CD45表达低于5%的骨髓间质细胞作为实验对象。CCK8实验结果提示,脂多糖与巨噬细胞游走抑制因子靶向小干扰RNA对骨髓间质细胞的增殖活性几乎无影响,然而与对照组相比,脂多糖可明显刺激骨髓间质细胞发生炎症反应,为对照组的15-20倍(P<0.01)。巨噬细胞游走抑制因子si RNA+脂多糖组白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α表达低于脂多糖组(P<0.01)。结果证实,脂多糖可以促进种植体周围骨髓间质细胞的炎症反应,而且巨噬细胞游走抑制因子靶向小干扰RNA沉默可以在一定程度上抑制炎症反应的发生。

巨噬细胞游走抑制因子在糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义

目的检测巨噬细胞游走抑制因子(MIF)在糖尿病大鼠视网膜中的表达,探讨MIF在糖尿病视网膜病变(DR)中的作用及意义。方法腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立大鼠糖尿病视网膜病变模型,另设一正常对照组,每组20只;8周后应用ELISA法检测2组视网膜MIF含量,HE染色和免疫组化染色观察2组视网膜中MIF的表达及定位。结果与正常对照组对比,糖尿病模型组大鼠血糖升高,视网膜中MIF含量显著增多,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论糖尿病大鼠视网膜中MIF表达增高,与视网膜炎症改变有关,参与早期糖尿病视网膜病变的发生。