南水北调工程对日本血吸虫中间宿主湖北钉螺(Oncomelania hupensis)分布的影响

中国南水北调工程是缓解北方缺水和生态环境恶化的重大战略性工程。从长江下游引水北上的南水北调东线工程,因其引水口处在有日本血吸虫中间宿主湖北钉螺孳生的江苏省江都市,并且输水干线将穿过我国钉螺分布区及其最北点的宝应县（北纬33°15′）进入钉螺非分布区。为探讨因南水北调将钉螺带到北方钉螺非分布区后,钉螺能否生存与繁殖并形成新有螺区,研究沿工程输水干线在江苏徐州（北纬34°21′）和山东济宁（北纬35°23′）现场设点,采用螺笼放养定量观察法,对北移钉螺生存繁殖力及其子代钉螺的适应性作了为期8 a的纵向观察;采用组织学、组织化学、酶组织化学及电镜技术,观察了北移钉螺生殖腺变化。结果：北移钉螺及其子代在徐州存活时间不超过8 a,在济宁存活时间不超过1.5 a;钉螺北移3～6个月后,其雌、雄生殖腺均呈萎缩状,相关代谢酶和组化成分含量出现异常变化。研究认为,南水北调若将钉螺移至北纬33°15′～34°21′地区,钉螺虽然能存活一定时间,但其繁殖力逐年下降,种群呈逐渐消亡趋势;若移至北纬35°23′以北地区,钉螺则难以存活。因而,随南水北调移至北纬33°15′以北地区的钉螺难以正常生存繁殖形成新的有螺区。

湖北钉螺(Oncomelania hupensis)对光照的感觉反应

设置不同光强、光质、光色3种光刺激环境,观察湖北钉螺在所设环境下的趋避和体位反应.结果表明,湖北钉螺对光强刺激反应明显,当白炽灯光强达到1 050lx、节能灯达到605lx时,钉螺表现出明显的远避行为;而且钉螺对2种不同光质的光源反应表现出明显差异:对节能灯光刺激反应比白炽灯强烈.钉螺对所试的4种光色的反应无明显差别.光位实验结果表现为在强光下钉螺是足背迎光,在有色散射光下钉螺是足底迎光.因此,钉螺对光强和光质有明显的趋避和体位反应,对光色无明显的差异反应.

食物对湖北钉螺(Oncomelania hupensis)发育繁殖的影响

用浮游植物（A）、鲫鱼（B）、河蚌（C）、蚯蚓（D）及以浮游植物与3种动物分别混合组成（E、F、G）的7种饲料喂养钉螺，观察其幼螺成活、生长及雌螺产卵量,结果表明，饲料G喂养的钉螺幼螺成活率（43％）明显高于其他饲料（O～33．3％，），B和C喂养钉螺，其幼螺在一个月内全部死亡；在25℃的条件下，饲料A和G喂养的幼螺发育最快，105d其体长分别为6．89mm和6．81mm，且显著长于（P〈O．05）饲料D、E、F喂养的钉螺（其体长分别为3．05mm、4．51mm、5．11mm）．在25℃的温度条件下饲料A饲养的钉螺产卵时间长、产卵量高（13．9％），与混合型饲料G喂养的钉螺产卵量（14．I％）相当，而明显高于（P〈0．05）饲料D、E、F喂养的钉螺（分别为2．9％、10．I％、II．0％）；动物型饲料B和C产卵时间短、产卵量最低（不到2％）．因此，植物饲料A和混合饲料G适宜于喂养钉螺．

一种快速鉴别湖北钉螺(Oncomelania hupensis)雌雄性的方法

湖北钉螺(Oncomelania hupensis)是一种雌雄异体的腹足纲动物,作为日本血吸虫(Schistosoma japonicum)唯一的中间宿主,控制湖北钉螺是血吸虫病防治的关键环节,快速鉴别钉螺雌雄的方法可为血吸虫病的防治和科研工作提供理论依据.分别用室内鉴定、野外鉴别室内复查的方法,对湖北荆州钉螺进行了清洗、刺激、定位,观察等步骤,选取其头部和触角伸出的钉螺,用镊子夹住钉螺使其螺口朝左,整个螺体位倾斜向右,在奥林巴斯解剖显微镜观察钉螺头部与螺壳空隙.如果观察到有粉红色的阴茎,可以辨别为雄性钉螺,反之,则是雌性钉螺.湖北荆州钉螺在室内45 min内100只钉螺鉴别的正确率从5月份的92.60%到6月份的97.68%,最后7—8月的检测正确率达100%,平均每个钉螺被成功鉴别的时间大约在30 s之内完成.在室外60 min内100只钉螺鉴别的正确率达93.83%,平均每个钉螺被成功鉴别时间的大约在40 s内完成.此方法为快速、简单、准确辨别钉螺的雌雄提供有效的参考.

长江中下游地区湖北钉螺线粒体COⅠ基因遗传变异研究

从长江中、下游的江苏省丹徒区和邗江区、浙江省平湖市、湖北省武昌区、江西省余干县和彭泽县、安徽省安庆市和贵池区等5个血吸虫病流行省8个点现场采集湖北钉螺样本,提取基因组DNA、PCR特异性扩增线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚单位1(COⅠ)基因,用ClustalX 1.81软件进行多序列比对,MEGA 4.0软件中的Kimura双参数法(Kimura 2-parameter)计算遗传距离,邻接法(NJ)和最大简约法(MP)构建系统发生树。8个地理株湖北钉螺(Oncomelania hupensis)共得到701个同源位点,A/T(60.4%)含量高于C/G(39.6%),所有序列间的平均遗传距离为0.025。进化树显示,江苏丹徒、湖北武昌、江西余干及安徽安庆和贵池5个地理株钉螺形成一个分支,而浙江平湖、江苏邗江和江西彭泽3个地理株钉螺形成另一个分支;但两种方法构建的系统发生树存在差异。长江中下游地区湖北钉螺线粒体COⅠ基因遗传变异显著。

日本血吸虫毛蚴对不同密度和距离湖北钉螺易感性的初步实验观察

为探讨日本血吸虫(Schistosoma japonicum)毛蚴对不同密度、不同距离湖北钉螺(Oncomelania hupensis)易感性,在现场环境下,采用20 000条新鲜孵化出的日本血吸虫毛蚴分别感染1、2、3、5 m处的湖北钉螺,每处钉螺分为5、10、50、100只/袋4个密度组,感染4 h后带回实验室饲养,8周后解剖观察钉螺感染情况。结果发现,距离1、2、3、5 m,密度5、10、50、100只/袋4个组钉螺感染率分别为7.06%、4.35%、2.47%和1.23%;4.55%、4.44%、4.11%和2.27%;2.62%、1.58%、1.29%和1.1%;2.36%、4.04%、2.73%和1.5%。研究表明,钉螺感染概率与距毛蚴投放的距离成反比;但是,未得出钉螺感染率与钉螺密度之间的线性关系。

湖沼地区湖北钉螺小尺度分布的空间自相关分析

目的研究湖沼地区湖北钉螺小尺度分布的空间自相关性。方法从安徽省池州市贵池区的秋浦河沿岸随机选择一个滩地的中间层和河边层作为研究现场,采用交叉复核随机抽检的查螺方法于滩地水淹前后各普查钉螺100框,判别死活,并分辨成螺和幼螺。在两层内各随机取10份土壤样本,测量土壤湿度。先计算并比较水淹前后两层的土壤湿度和钉螺密度,然后计算Moran’sI和Geary’sC两个空间自相关指标,探讨钉螺的小尺度分布情况及是否存在空间自相关。结果钉螺的小尺度分布始终存在正空间自相关,其变化与钉螺密度的高低一致。Moran’sI均>0.22,Geary’sC均<0.76,P<0.01。水淹前,河边层钉螺的空间自相关大于中间层;水淹后,中间层幼螺和成螺的空间自相关均大于河边层,并且同一层内幼螺的空间自相关均大于成螺。结论湖沼地区湖北钉螺的小尺度分布存在正空间自相关。

湖北省庙河地区钉螺细胞色素C氧化酶1基因差异的研究

目的 比较湖北省庙河沿岸地区钉螺CO1基因序列的差异 ,探讨光壳螺与肋壳螺差异的原因。方法 在该地区选 7个点 (上游 4个点 ,下游 3个点 )采集钉螺 ,用CTAB法提取钉螺基因组DNA ,PCR方法扩增CO1基因 ,纯化后测序 ,运用ESEE软件排序并比较变异位点 ,观察各点钉螺的CO1基因单倍体型 ,运用PHYLIP软件计算遗传距离 ,绘制基因进化树。结果 获得CO1基因大小为 638bp ,上游和下游累积变异位点数分别为 2 9和 46,两者差异具有显著性 ;各采集点内钉螺按变异位点多少可分为两组 ;各采集点间存在有相同的基因单倍体型 ;上游和下游螺群之间的遗传距离为 0 0 2 2 1± 0 0 10 5 ;在FITCH绘制的基因进化树上 ,上游和下游地区钉螺交错分布在同一亚种不同的两个分支中。结论 在不同的生态环境下 ,下游地区钉螺CO1基因的变异强度比上游大 ;庙河各采集点螺群间存在一定的基因流动 ;庙河地区螺群属湖北钉螺湖北亚种 (O h hupensis) ,可能存在着两种不同进化速率的螺群。

益母草水苏碱浸杀法对湖北钉螺糖原和蛋白质含量的影响

研究了益母草水苏碱对湖北钉螺糖原和总蛋白的生理生化影响。结果显示,大于0.80 g.L-1益母草水苏碱能够显著降低钉螺体内的糖原含量,减少幅度为11.68%-76.16%;益母草水苏碱也能够在一定程度上降低钉螺体内的蛋白质含量(5.66%-13.69%),但减少量不及糖原显著;灭螺植物对钉螺的致死作用可能更多与钉螺组织细胞中的能量代谢有关。

湖北钉螺凝集素的提取及其活性研究

目的探讨湖北钉螺(Oncomelania hupensis)体内凝集素的提取方法及其凝集活性。方法用20%～100%硫酸铵对钉螺蛋白进行梯度分级沉淀,检测不同沉淀对兔红细胞的凝集活性。分别用2.5 mg/ml D-半乳糖、D-果糖、D-葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖等6种糖溶液对有凝集活性的沉淀进行倍比稀释,测定其红细胞凝集活性的变化。并测定不同温度(25～90℃)和pH值(3.0～10.0)对钉螺凝集素凝集活性的影响。结果硫酸铵分级沉淀法提取钉螺凝集素时,20%～40%饱和梯度所得的沉淀具有较高的凝集活性。其凝集活性能被半乳糖和乳糖抑制。当pH值为7.0时钉螺凝集素活性最高。30～70℃水浴时,随温度的增加其凝集活性降低,高于80℃时无凝集活性。结论钉螺体内存在半乳糖和乳糖凝集素,其凝集活性受温度和酸碱度的影响。

湖北钉螺数量性状研究Ⅰ.遗传变异信息的可靠性与样本量的关系

目的 探讨湖北钉螺数量性状遗传变异信息的可靠性与样本量的关系。方法 从云南大理和湖南岳阳两地区随机抽取钉螺各6 0只,分别对钉螺壳形态数量性状进行测量,计算各数量性状指标的变异系数(CV)、组间变异百分比和多样性指数。结果 CV以外唇缘厚度变异最大,肋壳钉螺达到了2 0 .5 7% ,光壳钉螺为14 .14 % ,其次是次螺层长度,分别12 .98%和11.4 9% ;肋壳钉螺有近四分之三的性状指标CV大于光壳钉螺的,且平均CV9.35 %也大于光壳钉螺的7.83% ;肋壳钉螺的平均多样性指数为1.5 4 1,高于光壳钉螺的1.2 2 0 ;当样本量<30 ,所得到的遗传变异的结果极不可靠,随着样本量的增加遗传变异信息的可靠性也增加,当样本量>5 5时,所得到的遗传变异的结果趋于稳定。结论 在湖北钉螺形态数量性状的遗传变异研究中,每个钉螺种群以分析不少于5 5个钉螺标本为好。

中国大陆不同地域隔离群湖北钉螺基因组DNA的限制酶切长度差异

为证实中国大陆湖北钉螺不同地理株的存在,制备了各地钉螺的基因组DNA,经限制性内切酶Bam HI和Pst I酶解后,置0.8%琼脂糖凝胶电泳,比较分析不同地域隔离群钉螺基因组DNA重复序列DNA的限制酶切长度差异.安徽、四川、云南、湖南、湖北、江苏、上海、福建、江西等9地隔离群钉螺的DNA酶切带型.主带基本一致;次带差异明显.以四川普格、云南巍山、江苏东台之间差异较大.湖北省的汉川、洪湖、荆州、石首、咸宁的钉螺酶切图谱基本一致.提示不同隔离群钉螺存在一定的同源和亲缘关系.在基因水平上的差异程度与隔离群之间距离和自然环境关系密切.在一定区域内的钉螺DNA相对稳定.

湖北钉螺线粒体基因组全序列测定研究

目的测定并分析湖北钉螺(Oncomelania hupensis)线粒体基因组全序列。方法利用特异引物和通用引物分别扩增湖北钉螺线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ(COⅠ)、细胞色素b(Cytb)、16SrRNA(16S)和细胞色素C氧化酶Ⅲ(COⅢ)基因片段,在此基础上利用长PCR技术扩增上述4个基因间的长片段,纯化克隆后采用引物步移法测序。结果湖北钉螺线粒体基因组全序列为15182bp(GenBank登记号为FJ997214),为闭合环状分子,A+T含量为67.3%;包括13个蛋白基因、22个tRNA基因、2个RNA基因和一段72bp的A+T富集区;蛋白质编码基因均以ATG为启动子,除呼吸链NADH脱氢酶的第一亚单位(ND1)基因以潜在的T作为终止密码子外,其余基因均以典型的TAA或TAG为终止子;基因重叠区有2处,分别为4bp和7bp;基因间隔区共21处合计145bp,长度范围为1～30bp;22个tRNA中,除2个tRNASer和tRNAGln、tRNAIle以外均能形成典型的二级结构。结论获得了湖北钉螺的线粒体基因组全序列。

植物灭螺剂“螺威”杀灭湖北钉螺药效试验研究

采用室内和现场试验评价植物灭螺剂"螺威"杀灭湖北钉螺药效。室内采用泥盘喷洒、烧杯浸杀法,用敲击法鉴定钉螺死亡数和存活数,观察不同浓度植物灭螺剂"螺威"对湖北钉螺的杀灭效果。结果表明:7.5,5.0,2.5g/m33个浓度的4%螺威粉剂(TDS)室内浸杀湖北钉螺48 h死亡率为100%;室内喷洒试验7.5,5.0,2.5 g/m33个试验浓度中7.5,5.0 g/m3浓度组均达到死亡率95%以上,浓度为2.5 g/m3的4%螺威粉剂(TDS)现场浸杀湖北螺钉72 h死亡率为100%;喷洒湖北螺钉360 h死亡率为90.03%。4%螺威粉剂(TDS)室内浸杀、喷洒试验和现场浸杀、喷洒试验对湖北钉螺药效均达到合格指标。

用RAPD技术对湖北大口等3地的钉螺遗传差异初探

目的对3个不同地点的湖北钉螺的遗传差异进行研究。方法采用随机引物扩增多态性DNA(RAPD)技术,对湖北省三个不同地域的钉螺进行PCR扩增,根据DNA扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果,计算湖北钉螺之间的遗传距离,绘制系统进化树,并结合形态学观察,生态环境调查,综合分析得出结论。结果不同地点湖北钉螺标本PCR扩增产物均呈多态性,钟祥市的大口与冷水距离很近,但两地的钉螺遗传距离大于远安县与钟祥市钉螺的遗传距离。大口林场的钉螺壳顶磨损明显。结论生态环境对遗传变异的影响较大,地理距离与遗传距离不成正比。

湖北钉螺在不同温度下的发育速率及形态变化

从野外采回的钉螺在室内各实验温度条件下均能正常产卵,其产卵量的高低与室温无关;在15-30℃的温度范围内,随着温度的升高钉螺的孵化期逐渐缩短;利用有效积温公式得知钉螺卵孵化的有效积温为193.55日度,发育起点温度为10.86℃;在各温度下初孵幼螺随着生长发育,螺壳的长宽比也随之加大.

湖沼地区湖北钉螺不同调查方法的比较研究

目的确定一种比较好的现场抽样与钉螺调查方法。方法从安徽省池州市贵池区秋浦河沿岸的14个滩地中随机选择一个滩地作为研究现场,分别设计常规调查、个人重复调查、交叉重复调查和交叉复核随机抽检调查4种方法收集钉螺数据,从调查的钉螺密度和钉螺漏捡率两个角度分析评价不同调查方法的优劣。结果个人重复调查、交叉重复调查和交叉复核随机抽检调查3种调查方法得到的钉螺密度经Kruskal-WallisH检验,差异无统计学意义(χ2=3.87,P=0.144),两两比较差异亦无统计学意义,而它们与常规调查的差异有统计学意义(U=309.00,P<0.01);交叉复核随机抽检调查的漏捡率(0.57%)、交叉重复调查(5.24%)和个人重复调查的漏捡率(10.26%)经Kruskal-WallisH检验,差异有统计学意义(χ2=37.44,P<0.01),并且两两比较差异有统计学意义。交叉复核随机抽检调查的漏捡率最低。结论交叉复核随机抽检调查的效果最好,可用于现场的定量钉螺调查研究中。湖沼地区常规调查的数据应当慎重地用于钉螺相关的定量研究。

日本血吸虫中间宿主湖北钉螺遗传变异的空间相关分析

目的探讨湖北钉螺的空间遗传结构。方法采用扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术对10省或自治区(云南、四川、广西、福建、湖南、湖北、江西、安徽、江苏和浙江)25个钉螺种群基因组DNA进行扩增,分析钉螺种群间的遗传距离与地理距离的相关性。结果25个钉螺种群间的遗传距离D和Nei无偏遗传距离,都与其地理距离存在明显的正相关性(P<0.001),相关系数分别为0.5234和0.5622;湖北钉螺指名亚种种群间的遗传距离与地理距离也存在正相关(P<0.001),遗传距离D的相关系数为0.5276,Nei无偏遗传距离的为0.5770;无论是肋壳钉螺还是光壳钉螺,钉螺种群间的遗传距离都与地理距离存在正相关(P<0.001),肋壳钉螺种群间的遗传距离D和Nei无偏遗传距离与地理距离的相关系数分别为0.3612和0.3916,光壳钉螺的相关系数分别为0.7535和0.7500。结论在我国大陆广泛分布的湖北钉螺种群间具有明显的空间遗传结构。

不同地域株湖北钉螺CO1基因的差异研究

目的 研究中国大陆及台湾地区不同地域株湖北钉螺CO1基因的差异,为湖北钉螺种下分类提供依据。方法 收集13个地域株的湖北钉螺,高盐法抽提细胞内全部DNA ,PCR法扩增线粒体CO1基因,纯化并测序。将测序结果输入MEGA2程序,Kimura双参数法计算遗传距离,并分别用UPGMA法和最小进化法构建系统发生树。结果PCR扩增获得CO1基因大小约70 0bp(含两侧引物)。遗传距离显示:13个地域株明显被分为两组,其中四川株和云南株为一组,组内遗传距离为0 .0 35 ,其余为另一组,组内平均遗传距离为0 .0 14。而两组间的遗传距离为0 .12 9。两种方法构建的进化树拓扑结构基本一致。进化树分两大支,四川株和云南株位于一支,其它地域株位于另一支。结论13个自然隔离株湖北钉螺CO1基因总体差异不大,显示为一个种,其中四川、云南株与其它地域株差异显著,支持以往滇川亚种的结论,长江中下游各地域株CO1基因非常相近,支持指名(或湖北)亚种的分类方法。福建株、台湾株的分类地位有待进一步探讨。光壳和肋壳钉螺CO1基因无差异。

湖北钉螺种群内AFLP分子标记遗传变异分析

目的 探讨湖北钉螺种群内的遗传变异及其程度。方法 采用扩增片段长度多态性（AFLP）分子标记技术对9省（云南、四川、广西、福建、湖南、湖北、江西、安徽、江苏）13种群湖北钉螺基因组DNA进行扩增，分析钉螺种群内的遗传变异。结果 湖北钉螺13种群AFLP扩增片段位点数为403-472，江西星子钉螺种群内遗传多样性较高，多态位点频率、Nei’s基因多样性指数和Shannon’s信息指数分别为93．2％、0．345和0．510，而广西宜州钉螺种群内遗传多样性较低，以上3指标分别为55．8％、0．191和0．287；广西宜州钉螺种群内的相似性较大，相似系数（中位数）为0．904，而江苏丹徒钉螺种群内的相似性较低，相似系数（中位数）为0．748；13种群内的遗传变异差异显著（P〈0．01）。结论 我国广泛分布的湖北钉螺，种群内存在一定程度的遗传变异。不同地区湖北钉螺种群内遗传变异程度不同，有的相差较大。