湿生扁蕾总[口山]酮通过调控TGF-β/Smad和自噬相关通路对NCM460细胞上皮间质转化的影响

目的探讨湿生扁蕾总[口山]酮介导TGF-β/Smad和自噬相关通路对NCM460细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用2.5μg/mL脂多糖(LPS)持续干预细胞14 d建立EMT模型,CCK-8法筛选最佳湿生扁蕾总[口山]酮给药剂量。设计空白组、模型组、吡菲尼酮组(200μg/mL)和湿生扁蕾总[口山]酮低、中、高剂量组(50、100、200μg/mL),采用Western blot法检测细胞ZO-1、α-SMA、Beclin-1、P62、Bcl-2、LC3B蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞ZO-1、α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、Snail1 mRNA表达,免疫荧光观察细胞中α-SMA表达,TUNEL染色观察细胞凋亡情况,MDC染色和透射电镜分别观察细胞中自噬囊泡和自噬小体数目。结果湿生扁蕾总[口山]酮质量浓度小于200μg/mL时对细胞活率无明显影响(P>0.05),故选择50、100、200μg/mL为低、中、高剂量组。与空白组比较,模型组细胞ZO-1、Beclin-1、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白和ZO-1 mRNA表达降低(P<0.01),α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、Snail 1 mRNA和α-SMA、P62蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,湿生扁蕾总[口山]酮组均能改善以上指标(P<0.05,P<0.01)。结论湿生扁蕾总[口山]酮能抑制NCM460细胞EMT发生进程,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路和增强细胞自噬有关。

湿生扁蕾总口山酮对NCM460细胞间质转化的影响

该研究探究了湿生扁蕾总口山酮对人结肠上皮细胞(normal colon mucosa cell,NCM460)间质转化的影响。采用2.5 μg/mL脂多糖(LPS)诱导NCM460细胞14天建立间质转化模型,分别以湿生扁蕾总口山酮(GPX)及吡菲尼酮(PFD)进行干预,以免疫荧光(IF)和蛋白免疫印迹技术(WB)以及实时荧光定量转录聚合酶链反应(RT-qPCR)分别检测E-cadherin和Vimentin蛋白和mRNA的表达。结果显示,与正常对照组相比,模型对照组细胞中上皮细胞标志物E-cadherin蛋白和mRNA表达明显下调(P<0.01),间质细胞标志物Vimentin蛋白和mRNA表达明显上调(P<0.01),与模型组相比,E-cadherin的荧光强度与GPX剂量呈正相关,Vimentin荧光强度呈剂量依赖性降低。GPX中、高剂量组E-cadherin蛋白和mRNA表达上调,Vimentin蛋白和mRNA表达下调(P<0.01),以高剂量最为明显。研究表明,湿生扁蕾总口山酮能够有效抑制结肠上皮–间质转化,这为其进一步研究开发提供理论依据。