湿疹、血小板减少伴免疫缺陷综合征1例临床表型及基因突变分析

目的:对1例四川籍湿疹、血小板减少伴免疫缺陷综合征儿童(Wiskott-Aldrich syndrome,WAS)临床表现及分子遗传学特征进行分析,为其家系成员提供病因诊断和遗传咨询。方法:收集在我院诊治的1例WAS患儿的临床病例资料,抽取患儿外周静脉血,常规提取基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)扩增WASP基因,对扩增产物进行测序和序列分析,寻找基因突变位点,进行基因诊断。结果:(1)患儿系1岁4月男性,生后1月即出现血小板减少,伴有湿疹、反复上呼吸道感染史,此次因发热、间断血便入院,血清IgA升高,给予丙种球蛋白及激素治疗效果不佳,临床评分为3分;(2)WASP基因Exon1存在无意义突变c.100C>T(p.Arg 34x),编码蛋白质提前终止于氨基酸第34位,导致蛋白缺失;WASP基因Exon11上存在错义突变c.1378C>T(P.Pro460Ser)。结论:根据患儿临床表现、实验室检查及分子遗传学检测结果,可临床诊断为WAS患者。

发热伴血小板减少综合征病毒非结构蛋白的表达和定位及宿主互作蛋白的筛选和分析

目的:通过免疫沉淀联合质谱分析的方法筛选发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)非结构蛋白(NSs)的宿主互相作用(互作)蛋白,探讨互作蛋白的功能、亚细胞定位及参与的生物途径,为阐明SFTSV的复制和致病机制提供依据。方法:将真核表达载体pSFTSV-NSs-Flag (实验组)和Flag-CMV-3 (阴性组)分别转染进人胚胎肾293T细胞中,同时设置空白组(不进行任何处理)。收集各组细胞裂解液,采用间接免疫荧光和Western blotting法验证SFTSV NSs在宿主细胞中的表达及定位。蛋白裂解液经protein A/G处理,采用免疫沉淀法富集与NSs结合的宿主蛋白,通过银染和考马斯亮蓝染色初步分析捕获的互作蛋白,观察各组蛋白差异条带。采用液相色谱和串联质谱技术得到蛋白质的序列信息,保留可信蛋白基于UniProt数据库检索,对鉴定到的蛋白进行基因本体论(GO)功能富集分析、蛋白结构域和功能位点数据库(IPR)、真核生物同源蛋白簇(KOGs)功能注释、京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析、亚细胞定位和转录因子(TF)功能注释,确定互作蛋白的亚细胞结构、基因功能及参与的生物过程。结果:SFTSV NSs在相对分子质量33 000处表达单一特异性条带,免疫荧光检测其定位于细胞质中,且聚集呈砂粒体包涵体样。银染和考马斯亮蓝染色,实验组和阴性组均存在显著差异条带。质谱筛选出46种潜在互作蛋白;GO功能富集分析、KOGs功能注释和KEGG信号通路富集分析,与病毒翻译、细胞代谢及蛋白质运输相关的生物途径富集到较多数目的蛋白,注释中有8种蛋白具有中间丝蛋白结构域。亚细胞定位所占百分率最高的是细胞质蛋白;与NSs定位场所一致。TF功能注释,有1种蛋白来自NF-Y家族。结论:互作蛋白在协助蛋白质正确折叠、参与核糖体翻译和构成细胞骨架等进程中发挥作用,可能参与了抗病毒复制,可作为候选蛋白进一步研究SFTSV的复制机制。

湿疹-血小板减少伴免疫缺陷综合征行造血干细胞移植的治疗及护理

目的：总结29例湿疹-血小板减少伴免疫缺陷综合征（Wiskott-Aldrich syndrome,WAS）行造血干细胞移植的治疗和护理。方法：对我院2007年6月至2014年12月29例WAS患儿行造血干细胞移植的治疗和护理进行总结。包括保护性隔离、加强基础护理;移植物抗宿主病（graft versus host disease,GVHD）的治疗及护理;预防和控制感染;出血的治疗、观察与护理;饮食指导;心理护理;健康教育等。结果：29例WAS患儿行造血干细胞移植,经过规范的治疗和精心的护理,获得了免疫重建,随访2月~7年,现健康存活22例。结论：对GVHD的治疗和护理,积极预防及控制感染是造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation,HSCT）治疗WAS成功的关键。

一例湿疹、血小板减少伴免疫缺陷综合征患儿的基因诊断

患儿男，因出生后发现血小板减少（44×10^9/L）、皮肤瘀点及大便中有血丝7天，疑湿疹、血小板减少伴免疫缺陷综合征（Wiskott—Mdrich syndrome，WAS）行基因诊断。患儿足月剖宫产出生，体重3100g，Apgar评分1min为8分，5min为10分。患儿母亲3年前分娩一足月男婴，出生体重及评分正常，生后出现类似症状，

1例湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征病人的护理

湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征（WiskottAldrich syndrome,WAS）又名Wiskott-Aldrich综合征,是一种少见的X-连锁隐性遗传性疾病,以免疫缺陷、湿疹和血小板减少为临床表现[1]。本病发病率为1/100万1/400万,母亲携带致病基因,男孩发病,少见女孩发病[2]。我科2013年10月收治1例湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征患儿,现将护理总结如下。

造血干细胞移植治疗湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征的临床研究——单中心11年回顾性分析

目的探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征(WAS)的疗效、早期并发症、预后影响因素及脐血作为WAS移植供体选择的可行性。方法对上海儿童医学中心2006年11月-2018年9月接受allo-HSCT的29例确诊WAS患儿的临床资料进行回顾性分析。结果29例WAS患儿接受allo-HSCT治疗,其中13例接受脐血(UCB)移植,16例接受外周血干细胞(PBSC)移植,其中同胞全相合供体(MSD)移植2例,全相合无关供体(MUD)移植8例,不全相合无关供体(MMUD)4例,亲缘不全相合供体(MMSD)移植2例。经环磷酰胺+白消安+抗人胸腺球蛋白清髓性预处理后,所有患儿均获得完全植入。总体2年无病生存率为93%(27/29)。UCB和PBSC移植中性粒细胞和血小板植入中位时间分别为12d vs.11d(P=0.215)和47d vs.26d(P=0.133)。69%患者发生aGVHD,均为2~3度皮肤GVHD,UCB移植患者与PBSC移植患者相比aGVHD发生程度及持续时间无差异(P值分别为0.445和0.345)。不全相合较全相合供体移植aGVHD持续时间更长(P=0.001),但两者间aGVHD发生程度及频率差异无显著性(P=0.875)。导管相关血行感染主要发生于围移植期,发生率26.1%。结论allo-HSCT治疗WAS总体预后好,脐血是WAS患儿合适的造血干细胞来源。

发热伴血小板减少综合征病毒中和抗体酶联免疫吸附试验方法的建立及应用

本文旨在对发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)患者中和抗体进行定性和效价评估,建立中和抗体酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)。用96孔微量培养板培养非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)并接种发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV),以抗核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)单克隆抗体为一抗,使用间接ELISA检测SFTSV NP,根据光密度(optical density,OD)判断阳性孔数,采用ReedMuench方法计算病毒半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID_(50)),以反映SFTSV在Vero-E6细胞中的复制水平。ELISA检测中和抗体作用后的病毒残余量,可间接反映中和抗体的作用效果并进行定量。应用以上建立的微量中和-ELISA对10例SFTS患者的双份血清进行中和抗体效价测定,8例患者恢复期血清效价较急性期增高4倍以上,7份患者恢复期血清效价达1∶1 280,急性期血清效价最高为1∶640。结果提示,本研究建立的ELISA操作简便,结果判定客观,所需时间短,可用于临床血清抗体诊断,也可用于血清流行病学调查和疫苗效果临床评价等。

马来酸阿伐曲泊帕治疗人类免疫缺陷病毒/获得性免疫缺陷综合征合并血小板减少症1例

目的探讨人类免疫缺陷病毒/获得性免疫缺陷综合征(HIV/AIDS)合并血小板减少的发病机制、临床症状、实验室检查、治疗策略及风险预测。方法回顾性分析1例HIV/AIDS合并血小板减少患者的临床资料并进行文献复习。结果该例患者以口腔牙龈出血为首发症状,血常规发现重度血小板减少,血HIV抗体阳性,诊断为HIV/AIDS合并血小板重度减少,给予马来酸阿伐曲泊帕规律口服后血小板恢复至正常,后续接受高效抗逆转录病毒治疗。患者半年随访,血小板计数正常,肝功能正常,HIV感染控制良好。结论临床上血小板减少时应警惕因HIV/AIDS继发可能;治疗上可考虑使用阿伐曲泊帕长期口服,可避免激素相关感染、病毒激活以及合并抗病毒治疗时肝功能损害。

静注人免疫球蛋白联合血必净注射液治疗发热伴血小板减少综合征中的治疗价值分析

目的探讨静注人免疫球蛋白联合血必净注射液治疗发热伴血小板减少综合征的治疗效果。方法将60例发热伴血小板减少综合征的患者随机分为观察组和对照组，对照组采用基础治疗，观察组在对照组的基础上静注人免疫球蛋白联合血必净注射液治疗，比较两者的治疗效果。结果观察组治疗第3d、第7d的SIRS改善率（93．3％、100．0％）高于对照组（83．3％、93．3％），治疗第3d、第7d的DIC评分[（1．30±0．31）分、（0．85±0．17）分]低于对照组[（1．50±0．44）分、（1．15±0．30）分]，住院时间[（8．25±3．26）d]少于对照组[（12．56±3．96）d]，差异有统计学意义（x2=4．75、4．13，t=2．04、2．47、5．79，P〈0．05）。观察组治疗后5d、7d的血小板计数[（164．25±16．85）×109／L、（178．22±14．92）×109／L]高于对照组[（72．36±17．21）×109／L、（112．56±20．34）×109／L1，差异有统计学意义（t=4．98、6．71，P〈0．05）。结论静注人免疫球蛋白联合血必净注射液治疗能够提高发热伴血小板减少综合征的治疗效果，显著改善患者的血小板计数，改善患者的症状，值得推广。

发热伴血小板减少综合征神经系统受累患者的临床特征

目的分析发热伴血小板减少综合征(SFTS)神经系统受累患者的临床特征。方法收集并回顾性分析2016年1月—2017年12月青岛市第六人民医院收治的SFTS患者的临床资料。按照有无神经系统受累分为两组,将两组患者的临床资料进行对照分析;同时将神经系统受累的SFTS患者根据最终结局分为死亡组及存活组,将两组患者的临床资料进行对照分析。结果 SFTS患者神经系统症状出现病程日数中位数为第6天。神经系统受累组患者与未受累组患者比较,两组在年龄、皮肤瘀斑/严重出血倾向、C反应蛋白、降钙素原、入院时Ca^(2+)、CD4^+细胞、心肌酶谱(LDH、CK、CKMB、HBDH)、肺部炎症情况、肝功能(ALT、Alb、AST)、APTT方面比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。神经系统受累患者,死亡组与存活组之间比较,在皮肤瘀斑、PLT最低值、SFTSVIgM抗体转阳率、CD3^+细胞数、CD4^+细胞数、LDH、Alb、APTT比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论SFTS神经系统受累患者多数为高龄患者,凝血功能、肝功能、心肌酶谱、免疫系统等损伤较重,肺部感染比例高。SFTS受累患者中死亡患者的凝血功能、免疫功能、肝功能、心肌酶谱受损较存活患者重。

发热伴血小板减少综合征实验室诊断方法的比较与评价

目的比较不同检测方法在发热伴血小板减少综合征(SFTS)病例诊断中的结果差异,为快速、准确诊断新布尼亚病毒(SFTSV)感染提供依据。方法选取2014年河南省SFTS专项监测系统收集的158例SFTS患者的急性期血清标本,分别应用Real-time PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)-Ig M法进行检测;选取其中有急性期和恢复期双份血清的109对标本,应用ELISA-Ig M和ELISA-Ig G法进行检测。比较3种方法对SFTS阳性检出率的差异,同时分析采血时间对检测结果的影响。结果 158例SFTS患者的急性期血清标本,Real-time PCR的阳性检出率(76.58%)高于ELISA-Ig M(47.47%),差异有统计学意义(χ~2=34.13,P<0.05);109例有急性期和恢复期双份血清标本的病例,ELISA-Ig G的阳性检出率(75.23%)与Real-time PCR的阳性检出率(72.48%)差异无统计学意义(χ~2=0.18,P>0.05);无论在急性期还是恢复期,Ig M抗体的阳性检出率均高于Ig G,差异有统计学意义(χ~2分别为41.68和6.25,均P<0.05);随着采血时间的延长,Ig M和Ig G抗体的阳性检出率均有增加的趋势(Z分别为6.42和10.08,均P<0.05)。结论 Real-time PCR法适用于SFTS病例的早期诊断,ELISA-Ig G法适用于SFTS恢复期标本的检测,ELISA-Ig M法可作为一种辅助方法指导临床诊断。

发热伴血小板减少综合征病毒感染中免疫学异常的研究进展

发热伴血小板减少综合征病毒感染可引起发热伴血小板减少综合征,是一种以蜱为主要传播媒介的新发突发传染病,主要在我国农村、山林等地区流行,病死率可达5%~30%,对我国农业生产造成严重影响。免疫系统功能异常在病毒感染性疾病的发生发展中具有重要的作用。本文对发热伴血小板减少综合征病毒感染中的免疫学功能异常相关的研究进行了综述,以期增进相关研究人员和医务人员对本病的认识,促进机制研究和诊治新技术的研发。

发热伴血小板减少综合征病毒感染免疫逃逸机制研究进展

发热伴血小板减少综合征(SFTS)是由发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)引起的一种新发传染病,我国至少25个省份已监测到感染病例。SFTS患者病死率高、发病机制复杂,免疫逃逸在病毒大量复制增殖中起重要作用,与患者疾病进展和预后密切相关。本文围绕病毒感染后固有免疫和适应性免疫逃逸两方面机制作一综述,为加深理解免疫逃逸致病机制、开发针对性治疗手段提供依据。

应对慢性免疫性血小板减少症患者自身免疫和免疫缺陷同时存在矛盾的策略

免疫性血小板减少症（immune thrombocytopenia,ITP）是一种由于患者体内产生抗自身血小板抗体引起血小板破坏增多,从而导致外周血中血小板持续减少,骨髓巨核细胞数正常或增多伴有成熟障碍为特征的出血性疾病。现代研究表明是一种免疫介导的血小板减少综合征,

严重发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）总抗体检测试剂盒（ELISA）的研制

为建立检测严重发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）血清总抗体的双抗原夹心ELISA方法并进行初步试用,通过原核表达得到SFTSV-NP重组蛋白,以该蛋白作为ELISA的包被和酶标记抗原,确定抗原的最佳包被浓度和血清稀释度,优化各项试验条件,在此基础上研制试剂盒,并对试剂盒的重复性、特异性等方面进行研究.结果发现抗原最适包被浓度为4.0 μg/ml,血清的最佳稀释浓度为1∶40,重复性试验表明批内和批间的变异性都低于10％.该试剂盒敏感性高、特异性强、重复性良好,可应用于SFTSV的研究和临床检测.

严重发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）总抗体检测试剂盒（ELISA）的研制

为建立检测严重发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）血清总抗体的双抗原夹心ELISA方法并进行初步试用.通过原核表达得到SFTSV-NP重组蛋白,以该蛋白作为ELISA的包被和酶标记抗原,确定抗原的最佳包被浓度和血清稀释度,优化各项试验条件,在此基础上研制试剂盒,并对试剂盒的重复性、特异性等方面进行研究.结果发现抗原最适包被浓度为4.0μg/ml,血清的最佳稀释浓度为1：40,重复性试验表明批内和批间的变异性都低于10﹪.该试剂盒敏感性高、特异性强、重复性良好,可应用于SFTSV的研究和临床检测.