基于JAK-STAT信号通路的溃结宁膏对HT-29细胞炎症模型的影响

目的观察溃结宁膏穴位敷贴大鼠血清对人结肠癌HT-29细胞炎症反应和凋亡的影响,基于JAKSTAT信号通路探讨其作用机制。方法将HT-29细胞分为空白组、模型组、空白血清组、溃结宁膏血清组和柳氮磺吡啶(SASP)血清组。采用脂多糖诱导炎症细胞模型,CCK8法检测细胞存活率,TUNEL检测细胞凋亡情况,ELISA检测细胞上清液白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-13含量,RT-PCR检测细胞Janus激酶(JAK)1、JAK2、信号传导及转录激活因子(STAT)3、STAT6基因表达,Western blot检测JAK1、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果与空白组比较,模型组和空白血清组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞上清液IL-6和IL-13含量增加、IL-10含量减少(P<0.05),细胞JAK1、JAK2、STAT3、STAT6基因及JAK1、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组及空白血清组比较,溃结宁膏血清组和SASP血清组细胞存活率明显增加(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),细胞上清液IL-6和IL-13含量减少、IL-10含量增加(P<0.05),细胞JAK1、JAK2、STAT3、STAT6基因及JAK1、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论溃结宁膏穴位敷贴大鼠血清可能通过调控JAK-STAT信号通路调节HT-29细胞炎症反应及凋亡。

基于IL-6/miR-155轴探讨溃结宁膏穴位敷贴对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠的影响

目的观察溃结宁膏穴位敷贴对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)大鼠IL-6/miR-155轴的影响,探讨其治疗UC的作用机制。方法采用腺嘌呤、番泻叶分阶段灌胃,同时进行环境干预,结合三硝基苯磺酸灌肠法制备脾肾阳虚型UC大鼠模型。将大鼠分为空白组、模型组、非穴位敷贴组、穴位敷贴组和柳氮磺嘧啶(SASP)组,各组分别予相应处理2周。观察大鼠一般状况,对大鼠进行疾病活动指数(DAI)、结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分,ELISA检测血清白细胞介素(IL)-8、IL-17、IL-23含量,RT-PCR检测结肠组织IL-6、IL-17、IL-23、miR-155、信号传导与转录激活因子(STAT)3 mRNA表达,Western blot检测结肠组织IL-6、p-STAT3蛋白表达,流式细胞术检测血液Th17与Treg细胞比例。结果与空白组比较,模型组大鼠DAI、CMDI评分明显升高(P<0.05),血清IL-8、IL-17、IL-23含量明显增加(P<0.05),结肠组织IL-6、IL-17、IL-23、miR-155、STAT3 mRNA表达明显升高(P<0.05),IL-6、p-STAT3蛋白表达明显升高(P<0.05),血液Th17细胞比例升高,Treg细胞比例降低(P<0.05);与模型组及非穴位敷贴组比较,穴位敷贴组和SASP组大鼠DAI、CMDI评分明显降低(P<0.05),血清IL-8、IL-17、IL-23含量明显减少(P<0.05),结肠组织IL-6、IL-17、IL-23、miR-155、STAT3 mRNA表达明显降低(P<0.05),IL-6、p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05),血液Th17细胞比例降低,Treg细胞比例升高(P<0.05)。结论溃结宁膏穴位敷贴可能通过调控IL-6/miR-155轴调节UC炎症反应与Th17/Treg细胞平衡,从而治疗UC。

溃结宁膏穴位贴敷治疗脾肾阳虚型溃疡性结肠炎临床研究

目的观察溃结宁膏穴位贴敷治疗脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)患者的临床疗效及对血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的影响。方法将60例UC患者分为治疗组、对照组和联合治疗组,每组20例,分别予溃结宁膏穴位贴敷加服安慰剂、口服柳氮磺胺吡啶加安慰贴、溃结宁膏穴位贴敷加服柳氮磺胺吡啶治疗,60 d后观察3组临床综合疗效、黏膜病变疗效、黏膜病理疗效及治疗前后血清IFN-γ、IL-4的变化。结果 3组临床综合疗效、黏膜病变及黏膜病理疗效相当,差异无统计学意义(P>0.05)。3组治疗后IFN-γ水平明显降低,IL-4水平明显增高(P<0.01);治疗组、联合治疗组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论溃结宁膏穴位贴敷联合柳氮磺胺吡啶治疗脾肾阳虚型UC,可调节体内免疫细胞因子水平,具有较好的临床疗效。

溃结宁膏穴位敷贴对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠血清及结肠组织促炎因子与抗炎因子的影响

目的观察溃结宁膏穴位敷贴对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)大鼠血清及结肠组织促炎因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-12与抗炎因子IL-4、IL-10的影响,探讨其治疗脾肾阳虚型UC的作用机制。方法采用番泻叶溶液灌胃、喷冰水刺激和三硝基苯磺酸(TNBS)乙醇法制作脾肾阳虚型UC大鼠病证结合模型。将SD大鼠随机分为空白组、模型组、敷贴组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组,每组10只,空白组和模型组予无药物的巴布剂基质穴位敷贴加生理盐水灌胃,敷贴组予溃结宁膏穴位敷贴加生理盐水灌胃,SASP组予无药物的巴布剂基质穴位敷贴加SASP灌胃,疗程均为28 d。治疗期间观察各组大鼠一般状况,治疗后肉眼观察结肠组织大体形态,HE染色镜下观察病理形态并评分,ELISA检测各组大鼠血清及结肠组织IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10水平。结果敷贴组和SASP组UC大鼠一般状况、结肠组织肉眼大体形态、病理形态均较模型组好转且评分降低;与模型组比较,敷贴组、SASP组血清和结肠组织IL-4、IL-10水平明显升高,IFN-γ、IL-12水平明显降低(P<0.01);同时,敷贴组IL-4、IL-10下降水平低于SASP组,IFN-γ、IL-12上升水平高于SASP组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论溃结宁膏可能通过部分恢复大鼠血清及结肠组织促炎因子与抗炎因子的平衡来发挥其治疗脾肾阳虚型UC的作用。

溃结宁膏穴位贴敷治疗脾肾阳虚型溃疡性结肠炎临床疗效及其对血清白细胞介素-4的影响

目的观察溃结宁膏穴位贴敷治疗脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)的临床疗效及其对血清白细胞介素-4(IL-4)的影响。方法选取60例脾肾阳虚型慢性复发型UC活动期患者,随机分为治疗组和对照组各30例,分别给与溃结宁穴位贴敷及口服柳氮磺胺吡啶治疗60 d,观察治疗前后2组临床综合疗效、黏膜病变疗效、黏膜病理疗效、中医证候疗效、血清IL-4的变化及不良反应等情况。结果治疗组中医证候疗效优于对照组(P<0.05);2组临床综合疗效、黏膜病变及黏膜病理疗效相当(P>0.05);治疗后治疗组和对照组IL-4水平均明显高于治疗前(P<0.05),且治疗组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论溃结宁膏穴位贴敷能提高脾肾阳虚型慢性复发型UC的临床疗效,减轻临床症状,减少不良反应,提高机体免疫力。

溃结宁膏穴位敷贴对溃疡性结肠炎(脾肾阳虚证)大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的观察溃结宁膏穴位敷贴对溃疡性结肠炎(UC)(脾肾阳虚证)大鼠白介素-17(IL-17)及叉头状转录因子3(Foxp3)水平的影响。方法将40只SD大鼠随机分为正常对照组、溃疡性结肠炎(脾肾阳虚证)模型组(模型组)、溃结宁膏穴位敷贴治疗组(敷贴组)、柳氮磺吡啶治疗组(SASP组)。建立溃疡性结肠炎(脾肾阳虚证)大鼠模型,造模结束后治疗28 d,观察大鼠一般情况,进行疾病活动指数(DAI)评分、结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分、组织学损伤指数(TDI)评分,酶联免疫吸附(ELISA)检测各组大鼠血清及结肠组织IL-17、Foxp3水平。结果与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠体质量下降、饮水量减少、肛温降低,大鼠疾病活动指数评分、结肠黏膜损伤指数评分及结肠组织学损伤指数评分均显著升高,大鼠IL-17水平明显增高,Foxp3水平明显降低(P<0.01);与模型组大鼠相比较,敷贴组、SASP组大鼠体重增加、饮水量增加、肛温升高,大鼠疾病活动指数评分、结肠黏膜损伤指数评分及结肠组织学损伤指数评分明显降低,大鼠IL-17水平明显降低,Foxp3水平明显增高(P<0.01);敷贴组、SASP组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论溃结宁膏穴位敷贴可减轻UC肠道炎症反应,对肠道黏膜具有修复作用,其部分作用机制是通过上调抑炎因子Foxp3并下调促炎因子IL-17的水平,恢复Th17/Treg平衡来达到治疗UC的目的。

溃结宁膏穴位敷贴预处理对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜的保护作用及机制研究

目的:观察溃结宁膏穴位敷贴预处理对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠肠黏膜的保护作用及机制。方法:将SD大鼠随机分为4组,空白组、模型组、敷贴组、敷贴非穴组,每组10只,空白组及模型组给予无药物的巴布剂基质穴位敷贴(中脘、气海、足三里、天枢),敷贴组及敷贴非穴组(臀部肌肉丰厚处)予以溃结宁膏敷贴。预处理28 d后,模型组、敷贴组、敷贴非穴组采用番泻叶溶液灌胃、喷冰水刺激联合三硝基苯磺(TNBS)乙醇法制作脾肾阳虚型UC大鼠病证结合模型。24 h后处死大鼠,肉眼下观察结肠组织大体形态、HE染色光镜下观察结肠组织病理形态学,ELISA法检测大鼠血清及结肠组织中IFN-γ、IL^(-1)2、IL-4、IL^(-1)0表达水平。结果:与空白组比较,模型组UC大鼠结肠组织可见溃疡形成,有大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润,结肠组织及血清IL-4、IL^(-1)0水平明显降低(P<0.01),IFN-γ、IL^(-1)2水平明显升高(P<0.01),UC模型复制成功;与模型组比较,敷贴组UC大鼠结肠组织较为完好,无明显糜烂及溃疡,炎性细胞浸润减少;敷贴非穴组结肠组织可见溃疡形成,并有大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润;与模型组比较,敷贴组血清及结肠组织IL-4、IL^(-1)0水平明显增高(P<0.01),IFN-γ、IL^(-1)2水平明显降低(P<0.01)。结论:溃结宁膏穴位敷贴预处理对UC大鼠肠黏膜具有一定的保护作用,可能机制为降低血清及结肠组织促炎因子IFN-γ、IL^(-1)2水平,升高抗炎因子IL-4、IL^(-1)0水平,部分恢复大鼠血清及结肠组织促炎因子与抗炎因子的平衡;溃结宁膏敷贴效应具有腧穴特异性。

溃结宁膏对慢性非特异性溃疡性结肠炎大鼠血清中炎症因子及结肠组织GFAP、BDNF的影响

目的研究溃结宁膏对于大鼠血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor, TNF-α)和结肠组织中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)、脑源性神经营养因子(brain derived neurophic factor, BDNF)的影响。方法选用健康雄性2月SD大鼠48只,随机分为空白组、模型组、水杨酸柳氮磺胺吡啶组、溃结宁膏组,每组12只,采用3%DSS间断性喂养建立慢性非特异性溃疡性结肠炎模型,溃结宁膏组选取"中脘""气海""足三里""天枢"及"脾俞"穴位贴敷,连续治疗21 d。治疗后第1~3周周末观察大鼠体质量变化,进食、活动及粪便情况,并计算结肠组织疾病活动指数(disease activity index, DAI);HE染色观察各组大鼠结肠组织病理变化情况;ELISA法检测各组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量;蛋白免疫印迹法检测各组大鼠结肠组织中GFAP、BDNF蛋白表达。结果在治疗的第7、14、21天,溃结宁膏组大鼠的DAI评分均明显低于模型组(P<0.01)。电镜下,溃结宁膏组大鼠结肠组织病理改变恢复,炎性浸润减轻。与模型组比较,溃结宁膏组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显降低(P<0.01);结肠组织中GFAP蛋白表达明显降低,BDNF蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论溃结宁膏可能通过减轻血清中炎性因子的表达、调控肠神经系统、修复肠壁神经丛和保护肠黏膜,减轻结肠组织病理性损伤,从而缓解慢性非特异性溃疡性结肠炎的临床症状、降低DAI。

溃结宁膏穴位敷贴治疗脾肾阳虚型溃疡性结肠炎30例临床观察

目的:观察溃结宁膏穴位敷贴治疗脾肾阳虚型溃疡性结肠炎的临床疗效及对血清IFN-r含量的影响。方法:选取60例本病患者,随机分成两组,分别给予穴位敷贴和药物内服,治疗周期为60 d。观察治疗前后两组的临床综合疗效、血清IFN-r的含量及不良反应等情况。结果:总有效率治疗组为86.7%,对照组为76.7%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组优于对照组(P<0.05);两组患者治疗后血清IFN-r含量比较,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组比对照组血清IFN-r含量下降更大。结论:溃结宁膏穴位敷贴能明显改善脾肾阳虚型溃疡性结肠炎的临床症状及肠道黏膜病变,并能降低促炎因子IFN-r的含量。

溃结宁膏穴位敷贴对实验性溃疡性结肠炎大鼠IL-6/JAK2/STAT3信号通路的影响

目的观察溃结宁膏穴位敷贴对实验性溃疡性结肠炎大鼠结肠组织IL-6、gp130、JAK2、STAT3的影响,并探讨其机制。方法将52只SD大鼠随机分为空白组、模型组、敷贴组、SASP组,采用复合法建立脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠模型(腺嘌呤、冰番泻叶药汁分阶段灌胃,外因干预,噁唑酮灌肠),造模成功后分组予以溃结宁膏穴位敷贴、SASP灌胃,观察各组大鼠症状、体征、结肠黏膜组织病理,Western blot检测大鼠结肠组织白细胞介素-6(IL-6)、gp130、JAK2、STAT3蛋白变化。结果与模型组相比,敷贴组和SASP组大鼠症状、体征及结肠组织学均有不同程度改善;与空白组相比,模型组、敷贴组及SASP组大鼠结肠组织IL-6、gp130、JAK2、STAT3表达显著增高(P<0.01);与模型组相比,敷贴组与SASP组IL-6、gp130、JAK2、STAT3表达水平均降低(均P<0.01)。结论溃结宁膏穴位敷贴治疗实验性溃疡性结肠炎的可能机制是抑制IL-6/JAK2/STAT3信号通路来发挥疗效。

基于NF-κB信号通路的溃结宁膏穴位敷贴对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜炎症反应的影响

目的观察溃结宁膏穴位敷贴对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜炎症反应的影响,从NF-κB信号通路角度探讨其作用机制。方法SD大鼠随机分为正常组、模型组、非穴位敷贴组、穴位敷贴组及柳氮磺吡啶(SASP)组。采用番泻叶、腺嘌呤分阶段灌胃结合外因干预,并予2,4,6-三硝基苯磺酸与乙醇复合物灌肠制备UC病证结合动物模型。穴位敷贴组予溃结宁膏穴位敷贴“足三里”“天枢”“肾俞”“脾俞”“大肠俞”“膈俞”,非穴位敷贴组予溃结宁膏敷贴臀部肌肉丰厚处,SASP组予SASP溶液灌胃,正常组和模型组予等体积生理盐水灌胃,每日1次,干预28 d。观察大鼠一般情况、结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分、结肠组织病理变化;ELISA检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western blot检测结肠组织IκB激酶-α(IKKα)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠CMDI评分明显升高(P<0.01),血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量显著增加(P<0.01,P<0.05),结肠组织NF-κB p65和IKKα蛋白表达显著升高(P<0.01),IκBα蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,穴位敷贴组和SASP组大鼠CMDI评分明显降低(P<0.05,P<0.01),血清IL-1β、IL-6及TNF-α含量明显降低(P<0.01,P<0.05),结肠组织NF-κB p65和IKKα蛋白表达明显降低(P<0.01),IκBα蛋白表达明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论溃结宁膏穴位敷贴通过调控NF-κB信号通路IKKα、NF-κB p65和IκBα蛋白的表达,降低血清IL-1β、IL-6及TNF-α的含量,抑制结肠黏膜炎症反应,进而控制UC病情发展。

溃结宁膏穴位敷贴对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织闭合蛋白影响的实验研究

目的观察溃结宁膏穴位敷贴对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜的作用并探讨其作用机制。方法选用SD大鼠40只,随机分为空白组、模型组、敷贴组、SASP组,并建立溃疡性结肠炎大鼠模型,造模结束后,敷贴组给予溃结宁膏穴位敷贴,治疗结束后,观察大鼠宏观表征改变,计算疾病活动指数(DAI);Western blotting法检测大鼠结肠组织Claudin-1、Claudin-2、Claudin-8蛋白的表达。结果 1)治疗结束后,与模型组比较,敷贴组和SASP组的大鼠宏观表征改变有一定程度的改善(P <0.01);2)与空白组比较,其余3组的Claudin-2蛋白表达上升(P <0.01),Claudin-1、Claudin-8等蛋白的表达下降(P <0.01);与模型组比较,敷贴组和SASP组上述蛋白指标均显著改善(P <0.05);与SASP组比较,敷贴组各项指标差异不明显(P> 0.05)。结论溃结宁膏穴位敷贴可以一定程度上降低实验大鼠Claudin-2蛋白的水平,同时使得Claudin-1、Claudin-8的蛋白表达上升,从而达到减轻肠道炎症反应,促进结肠黏膜愈合,重建肠黏膜机械屏障的完整性的目的。

溃结宁膏穴位敷贴对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织黏膜屏障的作用

目的观察溃结宁膏穴位敷贴对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜屏障的作用,探讨其治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法选用SD大鼠40只,随机分为空白组、模型组、敷贴组、SASP组,并建立溃疡性结肠炎大鼠模型造模后敷贴组给予溃结宁膏穴位敷贴,SASP组予SASP灌胃;观察结肠组织大体形态及结肠黏膜损伤程度,光学显微镜下观察结肠组织病理改变,并进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)、结肠组织学损伤指数(TDI)评分,同时分别运用ELISA方法测定血清中D-乳酸(D-LA)和二胺氧化酶(DAO)的含量、Western blotting方法检测各组大鼠结肠黏膜组织ZO-1、SOCS1的蛋白表达。结果形态组织学检测:在CMDI、TDI评分上,模型组较空白组升高(P<0.01);敷贴组和SASP组较模型组降低(P<0.05);敷贴组与SASP组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测:与空白组比较,其余3组的D-LA和DAO含量上升(P<0.05);与模型组比较,敷贴组和SASP组D-LA、DAO差异明显(P<0.05);与SASP组比较,敷贴组各项指标差异不明显(P>0.05)。Western blotting检测:与空白组比较,模型组ZO-1、SOCS1蛋白的表达下降(P<0.01);与模型组比较,敷贴组和SASP组ZO-1、SOCS1明显升高(P<0.05);与SASP组比较,敷贴组各项指标差异不明显(P>0.05)。结论溃结宁膏穴位敷贴可以一定程度上提高模型大鼠ZO-1、SOCS1等蛋白的水平,同时降低血清中D-LA和DAO的含量,从而达到减轻肠道炎症反应,促进结肠黏膜愈合,重建肠黏膜机械屏障的完整性的目的。

溃结宁膏穴位敷贴对腰椎术后便秘护理效果的影响

目的观察溃结宁膏穴位敷贴对改善腰椎术后便秘的护理效果。方法选取2018年3月-2018年8月本院脊柱科收治的腰椎术后便秘患者60例为研究对象,将其随机分为治疗组和对照组,每组各30例。对照组在常规护理的基础上采用淀粉加赋形剂穴位敷贴方法进行干预,治疗组在常规护理的基础上采用溃结宁膏敷贴天枢、支沟、丰隆等穴位,两组均连续干预7d,观察并对比两组患者治疗前后的排便情况。结果治疗组在连续护理7d后的临床有效率为86.67%,显著高于对照组的13.33%,排便频次、排便费力、排便性状、腹胀腹痛评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论采用溃结宁膏穴位敷贴方法可明显改善患者的腹胀、腹痛、便秘情况,值得临床进一步推广。

溃结宁膏穴位敷贴治疗功能性腹泻的临床观察

目的:观察溃结宁膏穴位敷贴治疗功能性腹泻脾肾阳虚证的临床疗效。方法:选取功能性腹泻脾肾阳虚证患者60例,采取随机数字表法分为两组,每组30例。对照组患者予马来酸曲美布汀、双歧杆菌四联活菌口服,治疗组患者予溃结宁膏穴位敷贴治疗,治疗时间为4周,治疗后比较两组患者的排便次数、粪便性状、中医证候总积分及临床疗效。结果:两组患者治疗后排便次数计分、粪便性状计分、中医证候总积分均较治疗前降低(P<0.05),且治疗组患者治疗后排便次数计分、粪便性状计分、中医证候总积分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组总有效率优于对照组(P<0.05)。结论:溃结宁膏穴位敷贴治疗功能性腹泻脾肾阳虚证的临床疗效显著。

溃结宁膏调控microRNA-155介导JAK/STAT通路对HT-29细胞炎症模型的影响及作用机制研究

目的:研究溃结宁膏对HT-29细胞炎症模型的影响并基于microRNA-155(miR-155)/酪氨酸蛋白激酶(janus kinase,JAK)/信号转导及转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)通路探讨其机制。方法:体外培养HT-29细胞建立溃疡性结肠炎炎症模型,分为空白对照组、炎症模型组、模型对照组、miR-155 mimics组、miR-155 inhibitor组、穴位敷贴组、柳氮磺吡啶(SASP)组。乳酸脱氢酶法检测细胞损伤,ELISA检测细胞培养液IL-8、IL-6的含量。qRT-PCR检测miR-155、JAK2、STAT3 mRNA的表达,免疫荧光检测细胞因子信号传导抑制蛋白1(suppressor of cytokine signaling,SOCS1)、JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3蛋白的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组和模型对照组细胞乳酸脱氢酶释放率,IL-6、IL-8含量,miR-155、JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3 mRNA和蛋白表达量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组比较,穴位敷贴组细胞乳酸脱氢酶释放率,IL-6、IL-8含量,JAK2/p-JAK2,STAT3/p-STAT3 mRNA和蛋白表达显著减少,miR-155 mRNA表达量显著降低,SOCS1蛋白表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-155 mimics组比较,miR-155 inhibitor组细胞中JAK2/p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达显著降低,SOCS1蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:溃结宁膏穴位敷贴可能通过调控miR-155/JAK/STAT信号通路调节HT-29细胞炎症反应。

溃结宁膏穴位敷贴对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎的临床疗效及其对血清γ干扰素、白细胞介素-4的影响

[目的]观察溃结宁膏穴位敷贴对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)的临床疗效及其对γ-干扰素(IFN-γ)、血清白细胞介素-4(IL-4)的影响。[方法]采用分层区组随机、双盲双模拟、阳性药和安慰剂平行对照的多中心临床试验方法,将150例UC患者均分成A、B、C三组,分别给予溃结宁穴位敷贴加服安慰剂、溃结宁穴位敷贴加服柳氮磺胺吡啶、口服柳氮磺胺吡啶加安慰贴治疗60d,观察治疗前后3组临床综合疗效、黏膜病变疗效、黏膜病理疗效、中医证候疗效、血清IFN-γ及IL-4的变化。[结果]A组、B组中医证候疗效均优于C组(P<0.05);3组临床综合疗效、黏膜病变及黏膜病理疗效相当,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后3组IFN-γ水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且A组、B组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后3组IL-4水平均明显高于治疗前(P<0.05),且A组、B组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]溃结宁膏穴位敷贴能提高脾肾阳虚型慢性复发型UC的中医临床疗效,减轻中医临床症状,减少不良反应,改善机体免疫功能。

溃结宁膏的体外透皮实验研究

目的:观察外用溃结宁膏对皮肤的透过性,为其透皮吸收的体内研究提供实验依据,以期进一步研究溃结宁膏的药效及其作用机制。方法:以溃结宁膏中丁香酚、芍药苷为测定指标,将溃结宁膏(2.7cm×2.7cm/片)贴于健康受试者的双臂内侧,分别于2、4、8、12、16、20、24、36、48、72、120h撕下,洗脱膏层,萃取挥发油,分别采用气相法、高效液相法测定丁香酚、芍药苷的释放量。结果:溃结宁膏中丁香酚、芍药苷成分24h前释放量较快,24h后以比较恒定的速度缓慢释放,120h的累计释放率丁香酚达60.1%,芍药苷达26.6%。结论:溃结宁膏可以通过其有效成分丁香酚、芍药苷透皮,其释放量随给药时间延长而增多,从而达到起效快、疗效持久的特点。

基于Nrf2通路探讨溃结宁膏穴位敷贴治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的基于Nrf2信号通路探讨溃结宁膏穴位敷贴在脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜抗氧化应激的作用机制。方法将65只雄性SD大鼠,随机分为空白组(10只)、造模组(55只),造模组采用腺嘌呤、冰番泻叶分阶段灌胃结合外因干预,并予2,4,6-三硝基苯磺酸与乙醇复合物灌肠制备UC病证结合动物模型,模型评价后将造模组大鼠按照体重随机分为模型组(8只)、穴位组(7只)、非穴位组(7只)、柳氮磺胺吡啶(SASP)组(8只)、SASP合穴位组(8只)。病证结合模型大鼠分别予溃结宁膏穴位敷贴"中脘""气海""足三里""天枢",溃结宁膏非穴位敷贴于双臀部肌肉丰厚处,SASP组予SASP灌胃,SASP合穴位组予穴位敷贴合SASP灌胃同步处理,每日1次,共28天。观察大鼠疾病活动指数(DAI)评分、结肠组织病理改变、结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分、结肠组织学损伤指数(TDI)评分,同时运用免疫组化法检测结肠组织中Nrf2和HO-1蛋白表达,PCR检测Nrf2、Keap1 mRNA表达。结果与空白组比较,模型组CMDI、TDI评分、Nrf2和HO-1蛋白含量及Nrf2和Keap1 mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,穴位组、SASP组、SASP合穴位组CMDI、TDI评分降低(P<0.01),Nrf2、HO-1蛋白含量及Nrf2 mRNA表达升高(P<0.01)而Keap1mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01);与SASP组比较,穴位组、SASP合穴位组各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论溃结宁膏穴位敷贴通过调控氧化应激反应中的Nrf2信号通路,上调Nrf2、HO-1蛋白和Nrf2 mRNA的表达,并下调Keap1 mRNA的表达,抵御结肠氧化应激反应,减轻肠黏膜炎症,促进结肠黏膜愈合,进而发挥治疗UC的作用。

四神丸加味合溃结宁膏穴位敷贴治疗溃疡性结肠炎22例总结

目的:观察四神丸加味合溃结宁膏穴位敷贴治疗溃疡性结肠炎脾肾阳虚证的临床疗效。方法:将44例溃疡性结肠炎脾肾阳虚证患者随机分为治疗组和对照组各22例,两组均采用常规护理,对照组予西药柳氮磺砒啶治疗,治疗组予四神丸合溃结宁膏穴位敷贴治疗。两组均以4周为1个疗程,1个疗程结束后统计疗效。结果:总有效率治疗组为95.5%,对照组为86.4%,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:四神丸加味合溃结宁膏穴位敷贴治疗溃疡性结肠炎脾肾阳虚证疗效满意。