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食品中鲍鱼过敏源基因成分的检测 被引量:2
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作者 徐杨 孙瑶 +2 位作者 杜影 战晓微 郑秋月 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第1期124-128,共5页
目的本文建立食品中鲍鱼过敏源基因成分实时荧光PCR检测方法。方法采用蛋白酶K消化法提取鲍鱼肌肉组织中基因组DNA,针对鲍鱼管家基因16S r RNA基因设计特异性引物和探针,确定实时荧光PCR反应体系和反应条件,建立了鲍鱼过敏源基因成分实... 目的本文建立食品中鲍鱼过敏源基因成分实时荧光PCR检测方法。方法采用蛋白酶K消化法提取鲍鱼肌肉组织中基因组DNA,针对鲍鱼管家基因16S r RNA基因设计特异性引物和探针,确定实时荧光PCR反应体系和反应条件,建立了鲍鱼过敏源基因成分实时荧光PCR快速检测方法。选用鱿鱼、海参等海产品进行特异性试验;采用添加方法制备灵敏度试验样品,分别制备了鲍鱼过敏源基因成分含量分别为100%、10%、1%、0.1%、0.01%、0.001%的样品。结果对非鲍鱼类食品进行检测,结果显示出良好的特异性;灵敏度试验表明,本文建立方法的最低检测下限为0.01%。结论本文建立了特异性好,灵敏度高的鲍鱼过敏源基因成分检测方法。 展开更多
关键词 食品 鲍鱼过敏源基因成分 检测
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人源基因载体pHrn介导p53基因在Bel-7402中的抗癌研究(英文) 被引量:2
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作者 薛志刚 李剑 +9 位作者 尹彪 张雅坤 刘雄昊 潘乾 龙志高 戴和平 夏昆 邬玲仟 梁德生 夏家辉 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第5期465-470,共6页
利用人源基因载体结合人巨细胞病毒(CMV)增强子,人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子及肿瘤抑制基因p53构建肿瘤抑制载体,研究它们在肝癌细胞株Bel-7402中的功能.将CMV增强子(CMVe)与肿瘤特异性启动... 利用人源基因载体结合人巨细胞病毒(CMV)增强子,人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子及肿瘤抑制基因p53构建肿瘤抑制载体,研究它们在肝癌细胞株Bel-7402中的功能.将CMV增强子(CMVe)与肿瘤特异性启动子hTERTp组合,分别结合GFP及精氨酸型和脯氨酸型肿瘤抑制基因p53,构建GFP表达载体pchEGFP以及p53表达载体pchp53Arg和pchp53Pro;脂质体2000转染肝癌细胞株Bel-7402;24h后利用荧光显微镜以及流式细胞仪检测GFP的表达;RT-PCR、蛋白质印迹检测p53基因的表达;利用Hoechst33258、Annexin V/PI染色,检测p53促使肿瘤细胞的促凋亡情况.结果表明:GFP荧光表达载体在Bel-7402细胞中能有效表达;RT-PCR及蛋白质印迹检测到精氨酸型和脯氨酸型p53基因在Bel-7402细胞内表达;Hoechst33258染色及Annexin V/PI染色检测细胞凋亡实验没有得到明显的细胞凋亡结果.结果表明:实验所构建的肿瘤抑制载体在肝癌细胞Bel-7402能有表达,并能形成外源性p53蛋白,但没有检测到明显的p53促使肝癌细胞调亡的结果.这可能与p53对hTERT的负调控作用有关. 展开更多
关键词 源基因载体 人端粒酶逆转录酶(hTERT) P53
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转基因鼠内外源基因比较的研究进展
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作者 袁健 《国外医学(卫生学分册)》 2003年第1期52-55,共4页
转基因鼠在用于突变检测的同时 ,必须考虑外源基因突变在多大程度上代表内源基因的突变 ,即检测的一致性。本文综述了目前常见的几种转基因鼠 ,其内源性Hprt和Dlb 1基因与外源性LacI、LacZ和rpsL基因在突变频率、突变位点、突变类型等... 转基因鼠在用于突变检测的同时 ,必须考虑外源基因突变在多大程度上代表内源基因的突变 ,即检测的一致性。本文综述了目前常见的几种转基因鼠 ,其内源性Hprt和Dlb 1基因与外源性LacI、LacZ和rpsL基因在突变频率、突变位点、突变类型等方面的比较结果 ,并阐述了转基因鼠在毒理学研究中的应用前景和亟待解决的问题。 展开更多
关键词 基因 内外源基因 比较
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我国首获抗SARS病毒人源基因工程抗体
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《科技广场》 2003年第6期22-22,共1页
关键词 SARS病毒 源基因工程抗体 抗原 非典型肺炎
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我国首获抗SARS病毒人源基因工程抗体
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《铁法科技》 2003年第1期50-50,共1页
关键词 SARS病毒 源基因工程抗体 噬菌体表面呈现 淋巴细胞 丙种球蛋白
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脑源性神经营养因子基因甲基化在抑郁症发病机制中作用研究进展 被引量:2
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作者 刘瑞梅 张晨 《临床精神医学杂志》 CAS 2023年第2期151-153,共3页
抑郁症是一种常见的情绪障碍,发病机制涉及遗传、环境、神经生化和神经内分泌等方面。某些环境因素可通过表观遗传机制发挥作用,成为抑郁症认知和行为异常的基础;其中研究较为广泛的是脑源性神经营养因子(BDNF)基因。本综述主要对BDNF... 抑郁症是一种常见的情绪障碍,发病机制涉及遗传、环境、神经生化和神经内分泌等方面。某些环境因素可通过表观遗传机制发挥作用,成为抑郁症认知和行为异常的基础;其中研究较为广泛的是脑源性神经营养因子(BDNF)基因。本综述主要对BDNF基因甲基化与抑郁症的相关性进行综述。 展开更多
关键词 抑郁症 表观遗传 性神经营养因子基因 甲基化
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入境生物材料中人源基因实时荧光PCR检测方法的建立
7
作者 黄吉城 黄惠敏 +3 位作者 刘燕 李小波 郑夔 师永霞 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2016年第1期1-4,共4页
目的建立适合国境口岸入境生物材料中快速判断是否含有人源基因的实时荧光PCR检测方法并应用于口岸出入境生物材料的检测,为入境生物材料监管提供技术支撑。方法根据人线粒体ND2基因核酸序列,设计并筛选适合实时荧光PCR检测的引物和探针... 目的建立适合国境口岸入境生物材料中快速判断是否含有人源基因的实时荧光PCR检测方法并应用于口岸出入境生物材料的检测,为入境生物材料监管提供技术支撑。方法根据人线粒体ND2基因核酸序列,设计并筛选适合实时荧光PCR检测的引物和探针,优化反应体系,评估方法的灵敏度、特异性、稳定性,建立快速、特异的人源基因荧光PCR检测方法。结果建立的检测方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,可在2 h内完成入境生物材料的检测,并有效区分非人灵长类动物及常见哺乳动物基因。结论本方法适用于对入境生物材料中人源基因的快速、准确检测,为口岸科学执法提供依据。 展开更多
关键词 生物材料 源基因 检测
原文传递
血清S100β水平与BDNF⁃rs6265基因多态性的交互作用对神经阻滞治疗缺血性脑卒中后吞咽困难疗效的影响
8
作者 姚玉婷 赵鹏 +3 位作者 郜静 刘敏肖 冀笑男 李燕 《国际神经病学神经外科学杂志》 2024年第2期61-68,共8页
目的探讨血清S100β蛋白与脑源性神经营养因子(BDNF)-rs6265基因多态性的交互作用对神经阻滞治疗缺血性脑卒中后吞咽困难疗效的影响。方法285例缺血性脑卒中后吞咽困难的患者接受神经阻滞治疗后,依据洼田饮水试验评价标准分为治疗有效组... 目的探讨血清S100β蛋白与脑源性神经营养因子(BDNF)-rs6265基因多态性的交互作用对神经阻滞治疗缺血性脑卒中后吞咽困难疗效的影响。方法285例缺血性脑卒中后吞咽困难的患者接受神经阻滞治疗后,依据洼田饮水试验评价标准分为治疗有效组(226例)和治疗无效组(59例)。比较2组血清S100β蛋白、BDNF水平及BDNF-rs6265基因型和等位基因频率。分析BDNF-rs6265基因多态性与治疗无效的关系。比较不同基因型患者的临床特征。采用多因素Logistic回归分析神经阻滞治疗无效的影响因素。采用多因子降维法分析BDNF-rs6265基因多态性分别与血清S100β蛋白、BDNF交互作用对神经阻滞治疗无效的影响。结果2组患者年龄、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、改良的巴塞尔指数(BI)评分、血清S100β蛋白、BDNF水平、BDNF-rs6265基因型差异具有统计学意义(P<0.05)。校正混杂变量后,CC型基因携带者治疗无效风险是TT基因型患者的1.762倍;CC型、CT型与TT型基因患者间的饮酒史、高血压、NIHSS评分、血清S100β蛋白、BDNF差异均具有统计学意义(P<0.05)。血清S100β蛋白≥0.44 pg/mL、BDNF<6.21 ng/ml、BDNF-rs6265携带C基因型是神经阻滞治疗无效的危险因素(P<0.05)。血清S100β蛋白及BDNF均与BDNF-rs6265基因多态性存在交互作用。具有血清S100β蛋白及BDNF水平异常和BDNF-rs6265基因多态性交互组合人群的神经阻滞治疗无效风险是非上述组合人群神经阻滞治疗无效风险的2.77倍。结论血清S100β蛋白水平、BDNF-rs6265基因多态性与缺血性脑卒中后吞咽困难患者神经阻滞治疗疗效相关,二者存在交互作用。 展开更多
关键词 缺血性脑卒中 血清S100Β蛋白 性神经营养因子-rs6265基因 吞咽困难
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人源抗狂犬病毒单克隆抗体Fab段基因的获得和表达 被引量:4
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作者 张世珍 梁米芳 +2 位作者 董关木 郑海法 侯云德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期11-16,共6页
运用噬菌体表面呈现 (phagedisplay)技术获得了人源抗狂犬病毒糖蛋白基因工程单克隆抗体Fab段基因及其表达。从狂犬病毒PM株Vero细胞疫苗免疫的人抗凝血中分离获得外周淋巴细胞 ,提取细胞总RNA ,通过RT -PCR方法 ,用一组人IgGFab基因特... 运用噬菌体表面呈现 (phagedisplay)技术获得了人源抗狂犬病毒糖蛋白基因工程单克隆抗体Fab段基因及其表达。从狂犬病毒PM株Vero细胞疫苗免疫的人抗凝血中分离获得外周淋巴细胞 ,提取细胞总RNA ,通过RT -PCR方法 ,用一组人IgGFab基因特异性引物 ,从合成的cDNA中扩增了一组轻链和重链Fab段基因 ,将轻链和重链先后克隆入噬菌体载体 pComb3,成功地建立了抗狂犬病毒噬菌体抗体库 ,并用纯化的狂犬病毒颗粒和几株抗狂犬病毒鼠单克隆抗体 (单抗 )捕捉狂犬病毒抗原的方法 ,对此抗体库进行富积筛选表达 ,成功地获得了抗狂犬病毒的人源单抗Fab段基因及其在大肠杆菌中的有效表达。对其中一株单抗G10进行了较为系统的分析 ,发现它与一株鼠源中和性狂犬病毒糖蛋白特异性单抗存在竞争 ,证实该单抗能识别狂犬病毒糖蛋白。其序列资料分析表明 。 展开更多
关键词 狂犬病毒 噬菌体 表面呈现 源基因工程抗体 FAB段 单克隆抗体
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沙棘果肉发育期油脂合成积累的源汇基因协同表达 被引量:3
10
作者 丁健 阮成江 +4 位作者 关莹 管文柯 单金友 吴雨蹊 吴天忠 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2017年第6期902-907,共6页
[目的]探讨沙棘果肉油脂合成积累与源汇基因表达的关系。[方法]以8个不同发育时期的近缘高油品系‘TF2-36’和低油品系‘杂56’果肉为材料,利用氯仿甲醇法测定含油率,采用qRT-PCR技术分析油脂合成源基因(GPD1)和汇基因(DGAT1和DGAT2)在... [目的]探讨沙棘果肉油脂合成积累与源汇基因表达的关系。[方法]以8个不同发育时期的近缘高油品系‘TF2-36’和低油品系‘杂56’果肉为材料,利用氯仿甲醇法测定含油率,采用qRT-PCR技术分析油脂合成源基因(GPD1)和汇基因(DGAT1和DGAT2)在近缘高低油果肉间的表达差异及其对油脂合成积累的影响。[结果]研究表明:(1)沙棘果肉含油率呈先上升后稳定趋势,‘TF2-36’的果肉含油率一直高于‘杂56’;(2)GPD1、DGAT1和DGAT2基因在‘TF2-36’果肉发育期间中均有明显高于‘杂56’的表达量峰值,但GPD1表达量峰值出现在油脂快速合成期,DGAT1和DGAT2表达量峰值出现在油脂稳定积累期。GPD1在发育前期高表达,促进合成更多的TAG前体G3P,而DGAT1和DGAT2在发育后期高表达,则促进了TAG的高积累。[结论]沙棘果肉高油脂积累源于源基因"GPD1"和汇基因"DGAT1和DGAT2"的协同高表达,研究结果为理解沙棘非种子组织(果肉)油脂合成机理提供了理论依据。 展开更多
关键词 沙棘 油脂合成 源基因 基因 基因表达
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猪源Mx1基因的原核表达及其抗血清制备 被引量:7
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作者 何丹妮 周斌 +3 位作者 张小敏 陈溥言 庞然 赵津 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期87-91,共5页
利用1对特异性引物,从pT-poMx1中扩增出Mx1基因开放式阅读框(1 992 bp),并将其编码区插入到携带GST标签的原核表达载体pGEX-6p-1中,经酶切和序列测定后,重组质粒pGEX-poMx1转化入大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达融合蛋白并分析表达... 利用1对特异性引物,从pT-poMx1中扩增出Mx1基因开放式阅读框(1 992 bp),并将其编码区插入到携带GST标签的原核表达载体pGEX-6p-1中,经酶切和序列测定后,重组质粒pGEX-poMx1转化入大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达融合蛋白并分析表达效果。结果表明:经终浓度为0.8 mmol.L-1 IPTG诱导后4 h,猪源Mx1基因(poMx1)在BL21(DE3)中获得高效表达,表达量占菌体蛋白的32.6%,SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量为99×103。将目的蛋白切胶后免疫Balb/c小鼠,制备了特异性多抗血清,Western blot结果显示该抗血清与融合蛋白孵育反应后有明显的特异性条带。结论:poMx1基因表达成功。 展开更多
关键词 Mx1基因 原核表达 抗血清
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菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因同源片段的克隆与序列分析 被引量:7
12
作者 刘振林 尹伟伦 戴思兰 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第1期35-40,共6页
在盐和干旱等渗透胁迫条件下,一些植物会积累甘氨酸甜菜碱(简称甜菜碱)作为渗透调节物质,甜菜碱在植物体内由胆碱经两步氧化形成,催化这两步反应的酶分别是胆碱单氧化物酶(cholinemonooxyge-nase,CMO)和甜菜碱醛脱氢酶(betainealdehyded... 在盐和干旱等渗透胁迫条件下,一些植物会积累甘氨酸甜菜碱(简称甜菜碱)作为渗透调节物质,甜菜碱在植物体内由胆碱经两步氧化形成,催化这两步反应的酶分别是胆碱单氧化物酶(cholinemonooxyge-nase,CMO)和甜菜碱醛脱氢酶(betainealdehydedehydrogenase,BADH)。由于甜菜碱的合成途径简单,进行遗传操作方便,在诸多抗逆性基因中甜菜碱合成酶基因被看作是最有希望的胁迫抗性基因。其中,BADH基因的全长cDNA序列首先被从藜科植物菠菜(Spinaciaoleracea)中克隆到,此后人们相继以该基因为参照,研究其它植物中的BADH基因。本文作者在以菠菜BADH基因为对照研究菊科植物的BADH基因时,根据已发表BADH基因的保守区序列设计了一对PCR兼并引物,以菠菜基因组DNA为模板,采用PCR法扩增出长分别为825bp(seq1)和822bp(seq2)的两个DNA片段,经测序和序列分析,seq1与GenBank中登录的菠菜BADH基因的基因组序列(U69142)一致,其外显子区与已发表的该基因的cDNA序列(M31480)一致,seq2与U69142序列的同源性为68%,其外显子区与M31480序列的同源性为83.93%。而且,在由该核苷酸序列推导的氨基酸序列中,含有醛脱氢酶高度保守的十肽VTLELGGKSP,说明该基因为菠菜BADH基因的同源基因。根据现有文献分析,菠菜中可能存在两个BADH的同工酶,作者所克隆基因片段所属的基因可能编码菠菜BADH的另一个同工酶。该序列已在GenBank中登录,登录号:DQ070842。 展开更多
关键词 菠菜 BADH基因片段 克隆
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转人源胸腺肽α_1基因聚球藻7942及其野生藻的培养 被引量:7
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作者 汪琨 马荣水 +2 位作者 徐惠娟 章军 魏文铃 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期15-19,共5页
探讨光照强度、光照时间、接种量和不同碳氮源对转人源胸腺肽α1基因聚球藻 794 2 (转化藻 )及其野生藻 (聚球藻 794 2 )生长的影响以及生长过程中pH的变化。研究发现 ,无论是野生藻还是转化藻的生长都表现出全天光照优于半天光照。三... 探讨光照强度、光照时间、接种量和不同碳氮源对转人源胸腺肽α1基因聚球藻 794 2 (转化藻 )及其野生藻 (聚球藻 794 2 )生长的影响以及生长过程中pH的变化。研究发现 ,无论是野生藻还是转化藻的生长都表现出全天光照优于半天光照。三角瓶培养转化藻生长的最佳光照度为15 0 0lx ,野生藻生长的最佳光照度为 2 0 0 0lx ;光反应器培养两种藻生长的适宜光照强度均随藻体浓度的变化而改变。为了尽量缩短延滞期 ,转化藻接种量OD730 ≥ 0 .0 8,野生藻OD730 ≥ 0 .0 5。两种藻体生长适宜的碳氮源为NaHCO3 和KNO3,生长过程中pH值变化趋势基本相似。 展开更多
关键词 胸腺肽α1基因 聚球藻 7942 野生藻 光合自养 基因藻类
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植物源性转基因食品PCR检测技术研究 被引量:9
14
作者 谭慧 王洋 +4 位作者 潘峰 彭琨 朱其明 郑华英 杨继红 《中国卫生检验杂志》 CAS 2004年第4期407-409,共3页
〔目的〕建立简便、快速、灵敏、特异的植物源性转基因食品DNA检测技术。〔方法〕针对转基因植物技术中载体上常用花椰菜花叶病毒的 3 5S启动子和根农杆菌的NOS终止子特异基因序列 ,设计合成特异的引物对 3 5s -f/ 3 5s-r、Nos -f/Nos -... 〔目的〕建立简便、快速、灵敏、特异的植物源性转基因食品DNA检测技术。〔方法〕针对转基因植物技术中载体上常用花椰菜花叶病毒的 3 5S启动子和根农杆菌的NOS终止子特异基因序列 ,设计合成特异的引物对 3 5s -f/ 3 5s-r、Nos -f/Nos -r ,利用基因PCR扩增技术检测植物源性转基因食品。〔结果〕引物对 3 5s -f/ 3 5s -r、Nos -f/Nos -r分别成功从转基因大豆中扩增出 195bp和 180bp特异的DNA带。采用引物对 3 5s -f/ 3 5s -r进行PCR时检测灵敏度为每反应 10 4分子 ;采用Nos -f/Nos -r时检测灵敏度为 2× 10 4分子。最低可以对 0 .1μg转基因大豆进行检测。〔结论〕基于 3 5S启动子和NOS终止子基因序列的PCR扩增技术是一种简便、快速、灵敏。 展开更多
关键词 植物性转基因食品 PCR检测技术 花椰菜花叶病毒 基因PCR扩增技术
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基因重组人源SOD对小鼠抗疲劳作用的实验研究 被引量:2
15
作者 徐晓莹 郭丽 +4 位作者 陈强 王欣 刘巍 彭衍飞 卢日峰 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第18期1842-1843,共2页
关键词 基因重组人SOD 抗疲劳
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福建省猪源多黏菌素耐药基因mcr-1阳性细菌的耐药特性及分布特征 被引量:1
16
作者 车勇良 陈秋勇 +4 位作者 陈如敬 吴学敏 王隆柏 刘玉涛 周伦江 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2022年第12期1-8,17,共9页
【目的】了解福建省猪源mcr-1基因阳性细菌的流行性、耐药特性及分布特征。【方法】从福建省7个地市的21个猪场采集313份粪便样本,应用PCR方法筛选、分离和鉴定mcr-1基因阳性细菌;采用K-B琼脂扩散试验进行药敏检测,分析mcr-1基因阳性细... 【目的】了解福建省猪源mcr-1基因阳性细菌的流行性、耐药特性及分布特征。【方法】从福建省7个地市的21个猪场采集313份粪便样本,应用PCR方法筛选、分离和鉴定mcr-1基因阳性细菌;采用K-B琼脂扩散试验进行药敏检测,分析mcr-1基因阳性细菌的耐药性,并使用PCR方法分析其耐药表型;进一步采用多位点序列分型(MLST)方法鉴定mcr-1基因阳性大肠杆菌的类型,使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析方法对mcr-1阳性大肠杆菌进行聚类分析,探明其分布特征和亲缘关系。【结果】从313份猪粪便中共分离获得43株mcr-1基因阳性细菌,其中大肠杆菌39株。耐药性结果显示,分离菌株对磺胺甲基异恶唑、氟苯尼考、链霉素、强力霉素、恩诺沙星、新霉素、阿莫西林、头孢噻肟、林可-壮观、亚胺培南、呋喃妥因、利奈唑胺和替加环素的耐药率分别为90.1%,83.7%,74.4%,67.4%,67.4%,58.1%,53.5%,39.5%,34.9%,11.6%,4.6%,0和0。磺胺类耐药基因中的sul1、sul2和sul3基因检出率较高,分别达到81.4%,90.7%和74.4%;喹诺酮类耐药基因中仅有qnrS和aac(6′)-Ib-cr被检出,其检出率分别为51.2%和30.2%;氯霉素类耐药基因中Cat2和cmlA基因的检出率较高,分别达到86.0%和74.4%;氟苯尼考耐药基因(floR)的检出率为83.7%;金属β-内酰胺酶耐药基因(NDM-1)的检出率为23.2%;多药耐药基因(cfr)的检出率为7.0%;而替加环素耐药基因(tet(X))未被检出。39株mcr-1基因阳性大肠杆菌除了4株不能分型外,其他35株共分为19个ST型,具有高度多样性,其中ST10为优势型,共有9株菌株。PFGE图谱显示,39株mcr-1基因阳性大肠杆菌共获得30种PFGE谱型,具有多态性特征,分为6组克隆群。【结论】福建猪源mcr-1基因阳性细菌主要为大肠杆菌,少部分为肠杆菌科其他菌株,且分离菌株具有明显的多重耐药性;mcr-1基因阳性大肠杆菌在地域分布上具有多态性和高度多样性特点。 展开更多
关键词 多黏菌素 耐药性 耐药基因 mcr-1基因阳性菌 福建省
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人源性大肠癌抗原基因噬菌体表达文库的构建及鉴定 被引量:7
17
作者 刘宇虎 张振书 +7 位作者 钟东 武金宝 但汉雷 杨兴龙 杨晓强 陈学清 赖卓胜 肖冰 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第6期538-541,545,共5页
目的构建人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库.方法从人大肠癌组织中提取总RNA,用RT-PCR合成cDNA第1链,用LD-PCR合成cDNA第2链,除去小于500p的小片段,与去磷酸化的λTriplEx2噬菌体左、右臂连接,体外包装,构建成cDNA噬菌体表达文库... 目的构建人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库.方法从人大肠癌组织中提取总RNA,用RT-PCR合成cDNA第1链,用LD-PCR合成cDNA第2链,除去小于500p的小片段,与去磷酸化的λTriplEx2噬菌体左、右臂连接,体外包装,构建成cDNA噬菌体表达文库.转化E.coli XL1-B1ue感受态细胞,滴定文库的滴度,确定文库容量大小;用ITPG诱导和X-gal显色测定重组率;用Sfi Ⅰ酶切鉴定插入的cDNA片段大小.结果构建成含2.39×106pfu/ml重组噬菌体的人大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库,重组率为97.5%,插入cDNA片段大小范围从600~4000bp,平均长约1400bp.结论成功构建高质量人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库,适合于大批量筛选cDNA克隆的大肠癌相关抗原基因. 展开更多
关键词 性大肠癌抗原基因 噬菌体 表达文库 构建 鉴定 结肠直肠肿瘤
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油茶种子发育期油脂合成积累的源汇基因协同表达 被引量:1
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作者 吴波 阮成江 +4 位作者 丁健 杜维 李景滨 闫蕊 刘祾悦 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2483-2488,共6页
为探讨油茶种子油脂的合成积累与源汇基因表达间的关系,以高油品系‘MY003’和低油品系‘MY008’的不同发育时期(6月2日、7月4日、8月5日、9月3日)种子为材料,利用氯仿甲醇法测定含油率,采用qRT-PCR技术分析油脂合成源基因(GPD1)和汇基... 为探讨油茶种子油脂的合成积累与源汇基因表达间的关系,以高油品系‘MY003’和低油品系‘MY008’的不同发育时期(6月2日、7月4日、8月5日、9月3日)种子为材料,利用氯仿甲醇法测定含油率,采用qRT-PCR技术分析油脂合成源基因(GPD1)和汇基因(DGAT1和DGAT2)在高低油种子间的表达差异及其对油脂合成积累的影响,为进一步研究油茶种子油脂合成积累的分子机制提供理论依据。结果显示:(1)油茶种子含油率均处于逐渐上升趋势(0.16%~24.1%),并在7月4日以后开始迅速上升,且‘MY003’种子含油率一直高于‘MY008’。(2)在‘MY003’种子中GPD1、DGAT1和DGAT2基因表达量均明显高于‘MY008’,DGAT1和DGAT2在源基因GPD1高水平表达后仍出现表达高峰;源基因GPD1在种子发育初期高表达,促进了TAG前体G3P的高效合成,而汇基因DGAT1和DGAT2在种子发育后期高表达,则促进了TAG的高效积累,GPD1与DGAT1、DGAT2之间呈正相关关系。研究表明,油茶种子油脂的合成积累来源于源基因GPD1和汇基因DGAT1与DGAT2的协同高表达。 展开更多
关键词 油茶 油脂合成 源基因 基因 表达分析
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粪便取样对亚洲黑熊脑源性神经营养因子基因全长序列分析 被引量:4
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作者 张志敏 王慧娟 +1 位作者 刘中来 熊国梅 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期665-671,共7页
沿用本室改进的粪便提取方法,参照马来熊BDNF基因序列设计引物,首次从亚洲黑熊粪便DNA中扩增和克隆到包含完整核BDNF基因的753 bp片段,以毛发作阳性对照并进行重复实验,获得稳定一致结果。序列分析表明,亚洲黑熊的BDNF基因非常保守,与... 沿用本室改进的粪便提取方法,参照马来熊BDNF基因序列设计引物,首次从亚洲黑熊粪便DNA中扩增和克隆到包含完整核BDNF基因的753 bp片段,以毛发作阳性对照并进行重复实验,获得稳定一致结果。序列分析表明,亚洲黑熊的BDNF基因非常保守,与人相比,一致性达94.5%,与大熊猫比达98.9%。在推导的多肽序列中,其成熟区氨基酸序列与所有已报道哺乳动物的完全一致;对亚洲黑熊及其相关物种BDNF基因序列的比较分析,发现大熊猫与包括黑熊在内的熊科动物亲缘关系更近,而与小熊猫较远。文章首次采用非损伤性取样法在分子生物学水平对亚洲黑熊基因组核BDNF基因进行分析,不仅为亚洲黑熊的保护和繁育提供重要参考资料,为非损伤性取样在珍稀濒危野生动物研究中的应用拓宽了思路,也为亚洲黑熊及其近缘种的系统分类研究提供分子证据。 展开更多
关键词 亚洲黑熊 粪便DNA 性神经营养因子基因 非损伤性取样
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脑源性神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞初步观察 被引量:10
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作者 刘谦虚 谢鼎华 陈观贵 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期252-255,共4页
目的探讨骨髓间充质干细胞(bone-marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)转染人脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因后在体外分化为神经元样细胞的功能。方法克隆人BDNF基因并构建其真核表达载体;分离培养5... 目的探讨骨髓间充质干细胞(bone-marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)转染人脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因后在体外分化为神经元样细胞的功能。方法克隆人BDNF基因并构建其真核表达载体;分离培养5只豚鼠BMSCs,观测其形态并用流式细胞仪鉴定;将人BDNF基因电穿孔法转染BMSCs,G418筛选后用维甲酸诱导分化,免疫细胞化学法对分化细胞进行鉴定。结果分离培养的细胞具有典型的BMSCs形态和标志,转染诱导后的细胞表达神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白(Nestin)和胶质纤维酸性蛋白,并能分泌BDNF。结论BDNF基因转染的BMSCs在体外能分化为神经元样细胞,电穿孔法能提高转染率,RA有促诱导作用。 展开更多
关键词 性神经营养因子基因 骨髓间充质干细胞 诱导分化 神经元样细胞
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