SN/T2980-2011在动物源性成分检测中的适用性分析

目的探讨行业标准SN/T2980-2011《动物产品中牛、山羊和绵羊源性成分三重实时荧光PCR检测方法》在动物源性成分检测中的适用性。方法基于中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2980-2011和国家标准GB/T 25165-2010《明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法实时荧光PCR法》对鲜肉组织及加工肉制品进行动物源性成分检测实验,建立依托上述标准的动物源性成分检测能力。结果SN/T2980-2011中牛源性成分检测特异性不佳,山羊源性成分检测特异性良好,绵羊探针仅适用于单通道实时荧光PCR检测;GB/T25165-2010中的牛、羊源性成分检测均展示出良好的特异性。结论建议SN/T2980-2011行业标准的起草单位及起草人重新设计适用于三重实时荧光PCR的牛、绵羊引物及探针,既要保证引物和探针的特异性也要保证适用性。

基于高通量测序的动物源性成分检测技术研究

本文主要针对解决目前肉类市场关于掺假肉(制)品成分检测效率低、检出限高、工作量大等问题和技术难题,对检测样品尤其是未知样品,进行定性、定量检测,开发出高效准确、高样本通量的动物源性成分及含量的鉴定方法,大大降低检出限,减少人工、经济、时间投入。

基于G-四联体比色生物传感器检测肉制品中羊源性成分

近年来,肉制品掺假现象已成为社会关注的热点,鉴定畜产品中动物源性成分是打击掺假的一种重要技术手段。基于此,利用不对称PCR技术(asymmetric PCR,As-PCR),并结合G-四联体的功能特点,建立了一种G-四联体比色生物传感器以鉴定肉制品中羊源性成分。以羊的基因组DNA为模板,并在限制性正向引物的5′端加上一段G-四联体的反向互补序列,通过As-PCR扩增出大量含有G-四联体序列的单链DNA(single strand,ssDNA),生成的ssDNA在K+的作用下可与氯高铁血红素(hemin)结合形成具有DNA核酶(DNAzyme)活性的G-四联体-hemin复合物。该复合物可催化H2O2与2,2′-联氮-双(3-乙基-苯并噻唑琳-6-磺酸)二胺盐[2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt,ABTS 2-]的反应,从而生成绿色的反应产物,结果可用肉眼观察,无需电泳、测序等常规检测步骤。通过对As-PCR反应条件和体系的优化,该生物传感器可实现对肉制品中羊源性成分准确、快速的鉴定,可稳定检测出的混合肉样中羊源性成分的最低质量分数为5%。研究所建立的G-四联体比色生物传感器具有简便、灵敏、可视化、低成本等优点,可用于肉制品中动物源性成分的检测,为肉制品的安全检测提供了强有力的技术支撑。

骨胶原蛋白肽粉中DNA的提取及猪、羊源性成分的检测

目的优化深加工骨胶原蛋白肽粉中DNA的提取方法,鉴定检测其动物源性成分。方法采用2种试剂盒法,并对试剂盒部分步骤进行适度修改后提取骨胶原蛋白肽粉中的基因组DNA,分别用猪、羊引物和探针对提取的DNA片段进行实时荧光PCR扩增检测。结果只有DNeasy Blood&Tissue Kit提取试剂盒法提取的DNA纯度较好,A260/A280比值为1.73,浓度为8.2 ng/μL,并且经18S rDNA片段的PCR扩增结果表明样品中含有哺乳动物DNA,且DNA中不含抑制PCR反应物质。检测结果表明该骨胶原蛋白肽粉中含有猪源性成分。结论采用试剂盒法提取深加工骨胶原蛋白肽粉中DNA时,需对部分步骤做修改后才可进行。

肉及肉制品中动物源性成分核酸检测方法研究进展

民以食为天,食以安为先。肉类为人类的生命活动提供了丰富的蛋白质、脂肪和B族维生素等,是人们生活的重要食品。但在利益的驱动下肉制品行业内掺假事件时有发生,严重侵害了消费者权益,并造成了不良的经济和社会影响。因此加强研究肉类产品动物源性成分的检测技术,广泛开展肉及肉制品中动物源性成分的检验意义重大。本文综合论述了目前已有的肉及肉制品中动物源性成分的核酸检测技术,并对有应用前景的新技术做了简要介绍。

牛肉及其制品中掺入鸡肉、鸭肉和猪肉的多重数字PCR快速检测方法研究

利用微滴式数字PCR,建立针对牛、猪、鸡和鸭肉的多重数字PCR检测技术。结果表明,所选择的4个物种的引物和探针特异性良好,能够快速对样品中是否存在这4种肉类成分做出快速判断。数字PCR分析中,FAM和HEX两个通道的荧光信号能很好地区分,在对9个实际样品的检测中,所在样品的微滴生成数都在10 000以上,满足数字PCR中泊松公式分析的要求,同时9个样品的检测结果与已知信息完全相符。

肉类掺假检测技术研究进展

肉类掺假现象严重威胁公共卫生安全。快速、准确、可靠的动物源性成分检测技术是有效监管与检测肉类掺假的关键。总结了常见的掺假形式,并对物理技术、光谱技术、免疫学技术、DNA分析等检测方法进行了全面的总结归纳和比较分析,尤其是对当前热门的DNA分析方法,详细阐述了常规PCR、实时荧光定量PCR、数字PCR和等温扩增PCR这4种主要分子检测技术的优缺点和应用情况,旨在为未来动物源性检测技术的发展指明方向。