1株山鸡源致病性大肠杆菌的分离鉴定

为查明秦皇岛市某山鸡养殖场山鸡大批量死亡病因,试验对分离到的致病优势菌株进行生化鉴定和16S rRNA基因序列分析,并测试分离菌对21种抗生素的敏感性,进一步采用PCR方法检测分离菌的耐药基因。利用清洁级昆明小鼠和SPF鸡胚分别对分离菌进行致病性试验,并采用PCR方法检测分离菌的毒力基因。结果显示:分离菌为革兰氏阴性杆菌,在伊红美蓝培养基上生长出有金属光泽的菌落,生化特性与大肠杆菌生化特性符合率高达99%。BLAST分析发现,分离菌16S rRNA序列与大肠杆菌的基因相似性高达99.8%。分离菌对恩诺沙星和阿米卡星高度敏感,对青霉素、头孢曲松等15种药物耐药。分离菌的磺胺类、β-内酰胺类、四环素类的耐药基因与耐药表型基本相符,其余耐药基因与耐药表型不符,提示该分离菌可能存在其他的耐药机制。致病性试验结果显示,分离菌具有较强致病性,共检测到12种大肠杆菌主要毒力基因。研究表明,分离菌为山鸡源致病性大肠杆菌,且耐药情况复杂,具有较强的毒力和致病性。

猪源致病性大肠杆菌基因组比较与毒力因子分析

不同菌株猪源致病性大肠杆菌的致病力有较大差异,通过着重研究菌株基因组中携带的毒力因子种类和数量,以解析猪源大肠杆菌致病的分子机制。利用二代高通量DNA测序技术测定猪源致病性大肠杆菌的基因组DNA序列,通过生物信息学方法,分析不同毒力菌株的基因组结构特征、进化类型、携带的毒力因子基因及其碱基变异,采用PCR方法对候选毒力因子基因进行验证。猪源致病性大肠杆菌不同毒力菌株的基因组全长范围为4.62-5.3 Mb,含有3364-3557个编码基因,菌株的系统进化群和多位点序列分型多属于A群和ST10克隆复合群。6株菌携带112-280个毒力因子基因,强毒菌株的毒力因子基因尤其是毒素基因多于弱毒菌株,且各菌株分泌系统基因的数量变异较大。此外,毒力因子基因中检测到插入缺失、移码突变和无义突变等高影响碱基变异。采用PCR验证了代表性毒力因子基因及其变异。猪源致病性大肠杆菌的毒力与基因组长度、编码基因的数量和变异相关,与GC含量、前噬菌体和CRISPR序列没有必然联系。

广西猪源致病性大肠杆菌对抗菌药物的耐药性变化分析

【目的】分析2007和2016年广西猪源致病性大肠杆菌对抗菌药物的耐药性差异,为兽医临床用药防治猪大肠杆菌病提供参考依据。【方法】2016年初从广西25个猪场采集腹泻仔猪的肠内容物、直肠棉拭子或肠系膜淋巴结等200份样品,分离大肠杆菌后进行致病力试验,选取103株致病性大肠杆菌用于体外药敏试验,将药敏试验结果与2007年的相关结果进行对比分析。【结果】从腹泻仔猪的体内共分离获得大肠杆菌178株,分离率为89%,其中有143株大肠杆菌可致试验小鼠死亡。与2007年相比,2016年广西猪源致病性大肠杆菌对50%的抗菌药物(9种)的敏感率上升,50%的抗菌药物的敏感率下降,上升最明显的为壮观霉素,升高34.9%,下降最明显的为氟苯尼考,降低46.9%;除头孢曲松和强力霉素的中介率与2007年相比基本无变化外,其余16种抗菌药物的中介率均降低,最明显的为头孢拉啶,降低55.2%;耐药率降低的抗菌药物只有阿米卡星、壮观霉素和强力霉素3种,降低12.3%~15.5%,耐药率升高的抗菌药物有15种,上升率为1.2%~62.1%,其中阿莫西林上升62.1%,氟苯尼考上升57.0%。耐药谱方面,2007年以5~11重耐药为主,占受试菌总数的75.7%,2016年以11重耐药以上为主,占74.8%。【结论】当前广西猪源致病性大肠杆菌以广谱耐药为主,敏感性降低,中介率降低,耐药率明显升高,生产中可选用阿米卡星和壮观霉素进行猪大肠杆菌病防治。

绵阳地区猪源致病性大肠杆菌的耐药性监测

从四川省绵阳地区12个猪场患病仔猪病料中共分离到28株细菌。经生化鉴定和动物试验确定其中12株为致病性埃希氏大肠杆菌。药物敏感性试验表明，分离的大肠杆菌对氧氟沙星、头孢噻肟、环丙沙星、头孢拉定等敏感，对青霉素、链霉素、四环素、红霉素、庆大霉素、氨苄西林等出现不同程度的耐药性，其中耐药率较高的是青霉素（100％）、红霉素（100％）、四环素（100％）、庆大霉素（91．67％）、氨苄西林（91．67％）、链霉素（83．33％），而敏感性较高的有氧氟沙星（58．33％）、头孢噻肟（50．00％）。且菌株普遍呈多重耐药性，以7—9耐为主。

蟹源致病性拟态弧菌的编码鉴定及其特性分析

从病蟹体内分离到 1株致病菌 (H4株菌 ) ,经细菌编码鉴定法确定为拟态弧菌 (Vibrio mimicus)。对 H4株菌及其胞外产物的生物学特性检测结果显示 :(1) H4株菌对弧菌抑制剂 O/ 12 9、多粘菌素敏感 ,能在无盐胨水中生长 ,拉丝试验阳性 ,氧化酶阳性 ,VP阳性 ,发酵葡萄糖产酸不产气。这些生物学性状符合《伯杰氏细菌鉴定手册》中对拟态弧菌的描述 ,证实了编码鉴定结果的正确性 ;(2 ) H4株菌能粘附人及多种动物红细胞 ,使红细胞发生凝集 ,且该凝集现象不能被 D-甘露糖所抑制 ,推测红细胞膜上存在的血凝素受体不含有甘露糖结构 ;(3) H4株菌的胞外产物具有致死性、溶血性和蛋白酶活性 ,表明胞外产物中至少存在溶血素和胞外蛋白酶

林麝肺源致病性大肠杆菌O因子血清型鉴定及部分耐药基因的PCR检测

为调查林麝肺源致病性大肠杆菌O因子血清型以及相关耐药基因的流行状况,本试验采用玻板凝集反应法进行O因子血清型鉴定;同时用PCR方法检测耐药基因。结果显示:O血清型定型的有16株菌,分别属于9个不同的血清型,其中O78为优势血清型,占定型菌株的43.75%(7/16)。同时,29株菌皆携带多种耐药基因,其中磺胺类耐药基因sul1、sul2、sul3,喹诺酮类耐药基因aac(6')-Ib、qnrB,β-内酰胺酶类耐药基因blaTEM、blaCTX-M,氨基糖苷类耐药基因aac(3)-IIa、ant(3″)-Ia和四环素类耐药基因tet(B)检出率较高,检出率分别为100%、96.55%、96.55%、100%、86.21%、100%、65.52%、100%、96.55%和58.62%。本试验结果对林麝临床科学合理用药有重要指导意义。

禽源致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛亚单位蛋白的功能与基因控制

禽源致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛是禽大肠杆菌病的一种重要的致病因子，为一种蛋白质突起，具有良好的免疫原性。与人畜致病性大肠杆菌粘附素菌毛相比，禽源性大肠杆菌的菌毛研究起步稍晚，尤其对其亚单位（ＦｉｍＢ、ＦｉｍＥ、ＦｉｍＡ、ＦｉｍＩ、ＦｉｍＣ、ＦｉｍＤ、ＦｉｍＦ、ＦｉｍＧ、ＦｉｍＨ等）的功能及基因控制报道尚少，直到近年来，随着分子生物学等技术的发展和应用，人们对此才有较多的了解。近年研究表明，ＦｉｍＡ是Ⅰ型菌毛的主要结构蛋白，ＦｉｍＡ的表达受到一个“相变开关”的控制。ＦｉｍＢ蛋白可控制’相变开关”的“开”和“关”，ＦｉｍＥ只控制“相变开关”的“关”，二者的共同作用决定了ＦｉｍＡ的表达与否。ＦｉｍＤ是菌毛在菌体上定位所必需的。ＦｉｍＣ则与ＦｉｍＡ的生物合成有关。ＦｉｍＥ、ＦｉｍＦ、ＦｉｍＨ与菌毛的粘附特性有关，并且可能是控制菌毛长度和数量的调控因子。为了对Ⅰ型菌毛的进一步研究提供依据，作者对与禽源致病性大肠杆菌有关的Ⅰ型菌毛亚单位的功能与基因控制作一初步综述。

集在线荧光分析的连续流动反转录-聚合酶链式反应快速扩增检测食源致病性轮状病毒

采用含RNA反转录(Reverse transcription,RT)和在线荧光分析的连续流动聚合酶链式反应(Poly-merase chain reaction,PCR)微流控技术检测食源致病性轮状病毒。此RT-PCR微流控装置以加热铜块组成恒温带,以聚四氟乙烯毛细管微通道为反应体系构建而成。采用循环水冷却退火区,此装置能获得低至31℃的退火温度,而且温度控制及其稳定性良好,因而能满足不同PCR的要求。为了充分体现PCR微流控技术的优越性,在线荧光分析被用于检测PCR产物。当流速为7.5 mm/s时,轮状病毒RNA的cDNA扩增和在线荧光分析能在约12 min完成(扩增约10 min,在线分析约2 min)。在此集成化的RT-PCR微流控装置上,1 h可完成轮状病毒RNA的RT-PCR以及其扩增产物的在线荧光分析,样品检出限达到6.4×104 copies/μL。

尿道致病性大肠杆菌HEC4株和禽源致病性大肠杆菌E058株毒力相关特性的比较(英文)

对人尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)HEC4株和禽致病性大肠杆菌(avian pathogen-ic Escherichia coli,APEC)E058株进行毒力基因和其他相关特性的比较,结果显示,它们具有一些共同的毒力基因,包括一些存在于APEC中一个大的可传递质粒上的基因;同时,它们也具有一些相似的生化特性。对SPF鸡的致病性试验显示,这两株分离株具有相似的致病力。因此,对于APEC和UPEC的相关性,以及APEC是否有可能导致人尿道感染或者成为UPEC的毒力基因贮主,有待进一步研究。

猪源致病性大肠杆菌对抗菌药物的MIC及MBC测定

目前大多数猪场普遍发生的仔猪白痢、仔猪黄痢主要是由大肠杆菌引起,随着抗菌药物大量投入临床治疗,耐药菌株特别是多重耐药菌株越来越多,耐药程度也越来越严重,这些耐药菌株的存在,使得由其所引起的大肠杆菌病难以预防和控制。因此,对猪源致病性大肠杆菌耐药情况进行监测...

豫北地区猪源致病性大肠杆菌的耐药性研究

采用纸片扩散法，对豫北新乡、焦作、鹤壁、安阳等地的89株猪源致病性大肠杆菌用17种抗菌药物进行敏感性测定。结果表明，89株猪致病性大肠杆菌对头孢派酮、多粘菌素、卡那霉素等药物的高敏率为88．2％-93．7％；对先锋霉素、红霉素的中敏率为40％以上；对17种抗菌药物产生不同程度的耐药性，如复方新诺明为80％，氨苄青霉素89．8％，阿莫西林为77．5％，四环素为84．3％，氯霉素为80．％，氟派酸为88．2％．实验结果也发现，大肠杆菌主要为多重耐药，对5种以上抗生素产生耐药性的菌株至少占80％．在这些耐药菌株中，对一种抗生素产生耐药性的为2株，对10种以上抗生素产生耐药性的居多。所以，临床应用应首选高敏药物，头孢类抗生素效果比较好，慎重使用中敏药物，尽量不用氟派酸等高耐药性的药物。

林麝肺源致病性大肠杆菌O78株crl毒力基因缺失株的构建及其生物学特性研究

大肠杆菌Crl和Rpo S蛋白的相互作用能够直接促进curli菌毛操纵子的表达,curli菌毛对宿主细胞的黏附性及侵袭性密切相关。为研究林麝肺源致病性大肠杆菌(LPEC)O78株crl毒力基因缺失对其生物学特性和毒力特性的影响,本研究采用λ-Red同源重组的方法构建了林麝LPEC O78 crl毒力基因缺失株LPEC O78-crl-,并通过生化特性、生长速率、红细胞凝集性、毒力特性对缺失株进行鉴定。结果表明,与野生株LPEC O78相比较,LPEC O78-crl-对林麝LPEC O78的生化特性和生长速率影响差异不显著;LPEC O78-crl-的红细胞凝集效价为2^(-4),比LPEC O78降低了2倍,其LD50为3.2×10~9 cfu/m L,与野生株LPEC O78相比下降约7倍。本研究构建了林麝LPEC O78-crl-,为进一步研究林麝LPEC的致病机理奠定基础。

猪源致病性大肠杆菌分离与鉴定方法研究

简要介绍了猪源致病性大肠杆菌的鉴定与检测方法,并通过对小白鼠致病性实验的介绍更为直观地体现了猪源致病性大肠杆菌对于人类和动物的潜在威胁。

猪源致病性大肠杆菌的流行调查及药敏实验

为了摸清本地区规模化养殖场猪源大肠杆菌的发病情况及耐药性,从四个规模化养殖场采集85份检样进行细菌的分离鉴定,结果共分离到79(92.9%)株大肠杆菌,其中55(69.6%)株对小白鼠有致病性。对55株猪源致病性大肠杆菌进行血清型鉴定,确认本地区养殖场流行的大肠杆菌的血清型为O8、O139、O54、O141、O138,其中O8、O139、O54为主要的血清型占总量的89.1%。对55株大肠杆菌进行药敏实验结果表明,细菌耐药率由高到低,差异明显。其中刚开始在兽医临床中使用的头孢噻圬也呈现耐药的趋势。为了降低细菌对抗生素产生耐药性,在临床使用中应该交替使用高敏的抗生素。

PCR-RFLP检测猪源致病性沙门氏菌gyrA基因点突变

四川农业大学谭炳乾、王红宁和叶如俊等先生利用PCR-RFLP法检测猪源致病性沙门氏菌gyrA基因点的突变。他们测定了16株猪源致病性沙门氏菌对5种常用氟喹诺酮类药物的最低抑菌浓度（MIC）。结果表明对此5种药物的耐药率在31．2％～56．2％。分别以质粒和染色体为模板，应用PCR扩增16株沙门氏菌的gyrA基因，以后所有菌株均获得以染色体为模板的扩增产物，还从1株鼠伤寒沙门氏菌获得了以质粒为模板的扩增产物。

一株兔源大肠埃希氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

为了筛选高效裂解兔源致病性大肠埃希氏菌的宽谱噬菌体,用滴定法和双层平板法分离纯化出1株噬菌体vB-EcoS-tE10,用透射电镜观察该噬菌体的形态特征,并研究其生物学特性。结果表明,在透射电镜下其头部呈20面体,长径约为52.5 nm,横径约为51.6 nm,尾部长约86.9 nm,有明显的颈部。最佳感染复数为0.1,潜伏期为20 min,暴发期为80 min,裂解量为608 PFU/cell,在30~60℃作用0.5~1 h,其活性不受影响,在pH为6~9可保持很高的效价,能裂解9株兔源大肠埃希氏菌、1株鸡源大肠埃希氏菌和1株产肠毒素性大肠埃希氏菌K99,属于高效裂解性宽谱噬菌体,在大肠埃希氏菌噬菌体及裂解酶的开发和利用方面有较高价值。

黄芩苷对猪源肠外致病性大肠杆菌的体内保护作用

为探究黄芩苷对猪源肠外致病性大肠杆菌(Extraintestinal pathogenic Escherichia coli,ExPEC)感染小鼠后的保护作用,采用小鼠存活率试验和组织载菌量试验评估黄芩苷对小鼠的保护作用,比较感染组和黄芩苷治疗组小鼠临床表现、存活率、组织载菌量及病理变化。结果表明,猪源肠外致病性大肠杆菌感染后小鼠状态萎靡不振、食欲下降,黄芩苷治疗组小鼠状态较感染组状态好;黄芩苷治疗组小鼠存活率相对于感染组有一定提升;黄芩苷治疗组小鼠心脏、肝脏、脾脏和肾脏中组织载菌量及病理变化相对于感染组均极显著降低(P<0.01)。

邢台地区鸡源致病性沙门氏菌的耐药性分析

为了调查河北省邢台地区鸡源致病性沙门氏菌的耐药情况,试验采用Kirby-Bauer法对186株沙门氏菌进行了16种抗菌药物的敏感性测定。结果表明:所有分离株均表现出不同程度的致病性及耐药性,对阿莫西林的耐药率为100%;其次是氨苄西林,耐药率为85%;对其余药物也表现出不同程度的耐药。说明邢台地区鸡源致病性沙门氏菌的耐药情况较为严重,多重耐药率较高。

生物被膜对鸡源肠外致病性大肠埃希氏菌耐药表型的影响

探讨鸡源肠外致病性大肠埃希氏菌(ExPEC)生物被膜(BF)形成能力及BF与耐药性之间的相关性,采用96孔微量板法和正交试验测定10株鸡源ExPEC的BF形成能力和BF强阳性菌株的最佳成膜条件,使用二倍倍比稀释法测定β-内酰胺类抗生素对生物被膜态与浮游态鸡源ExPEC的最小抑菌浓度(MIC)。结果显示,10株鸡源ExPEC的BF阳性率为90%,E-26、E-28、E-43为弱阳性菌株(+);E-27、E-30、E-42为中等阳性菌株(++),E-39、E-40、E-41为强阳性菌株(+++),E-20为阴性菌株;3株强阳性菌株BF最佳成膜条件不相同;3株BF强阳性鸡源ExPEC的BF形成后,对β-内酰胺类抗生素耐药性有不同程度增加,同种抗生素对不同菌株的MIC变化可能不同,不同抗生素对同一菌株变化也不同。因此,鸡源ExPEC的BF阳性率较高,但各菌株形成BF的能力存在差异,不同菌株形成BF所需的条件不完全相同,BF形成会使鸡源ExPEC对抗生素的耐药水平增强,但同为BF阳性鸡源ExPEC,形成BF后β-内酰胺类抗生素耐药水平变化存在差异。

银川地区鸡源致病性大肠杆菌耶尔森菌强毒力岛相关基因的检测及序列分析

为了研究耶尔森菌强毒力岛(HPI)在银川地区鸡源致病性大肠杆菌中的分布情况,试验根据HPI相关基因irp2和fyuA的参考序列设计引物,采用双重PCR方法对分离的20株鸡源致病性大肠杆菌进行这两种基因的扩增和检测,以及基因克隆和核苷酸序列分析。结果表明:irp2和fyuA基因在鸡源致病性大肠杆菌分离株中的阳性率均为40%(8/20);这两种毒力岛相关基因的核苷酸序列与GenBank中报道的基因核苷酸同源性高达98%以上。说明irp2和fyuA基因具有较高的保守性。