溴化乙啶致染色体畸变作用的AFM分析

目的:研究杂环类有机化合物溴化乙啶(EB)的生物致突性,为研究由EB及其它杂环类有机化合物诱导的生物体的癌变机制提供新的视角和数据。方法:利用原子力显微镜(AFM)的高空间分辨率从可视化的角度在3个层次即DNA、染色体及胚胎干细胞(ESCs)分析了EB对它们形态结构的影响。结果:经EB作用前后DNA的平均高度降低了0.5nm,染色体臂由着丝点处断裂,细胞膜表面的分子聚集形成团状及环状结构,与大剂量EB作用后的细胞团已死亡并崩塌成网状形态。结论:EB具有强烈的生物毒性,能明显破坏DNA及染色体的表面结构,且能破坏ESCs的形态结构并导致其死亡。EB可同时从基因水平和细胞水平对细胞或生物体产生损伤及形态结构畸变。

溴化乙啶-端粒重复扩增法检测端粒酶活性

为了建立一种能够适合于临床需要的检测端粒酶活性的方法， 我们以溴化乙啶染色来显示ＰＣＲ产物的电泳结果， 并将对结果有显著影响的实验条件进行优化。确定了本法的最佳实验条件为： ３７ °Ｃ的延伸温度， ＰＣＲ循环数为４０ 次， 样品所含蛋白浓度为０７５ ｇ／Ｌ。实验结果表明本法特异性好（９０％ ）、灵敏度高（８７％ ）、时间短、费用低、易操作、无放射性危害，便于广泛开展。

用溴化乙啶处理制备人类高分辨染色体

用溴化乙啶处理制备人类高分辨染色体宁夏宁安医院王威，韩仲媛人类染色体技术的研究是７０年代开始的新技术，８０年代进入新的发展阶段。高分辨染色体显带技术使人类染色体技术达到了较高水平。１９８７年李麓芸等发表了人类染色体８５０～１０００条带的高分辨技术￣［...

HMC毒素诱导玉米同核C、N细胞质细胞凋亡的荧光显微观察

【目的】研究玉米小斑病菌C小种毒素(HMC-toxin)诱导同核异质体玉米的离体根冠细胞发生凋亡的差异性及凋亡规律。【方法】采用吖啶橙(AO)与溴化乙啶(EB)荧光复染以及Hoechst 33258荧光染色的方法检测。【结果】HMC毒素诱导根冠细胞发生凋亡,出现凋亡小体与染色体边集形态特征。在3种毒素浓度、3种处理时间下,Mo17-C的根冠细胞死亡率均高于Mo17-N。采用AO与EB复染方法,在150μg.mL-1HMC毒素处理7 h时,Mo17-C细胞凋亡率达最高值,为68.7%,而Mo17-N仅为29%;经Hoechst 33258染色后,在150μg.mL-1HMC毒素处理下,Mo17-C也于7 h时达最大凋亡率,为57.3%,而Mo17-N为27.7%。【结论】在毒素"伤害"细胞致死过程中,C细胞质的细胞死亡率远高于N细胞质;在"诱导"细胞凋亡程序中,C细胞质的细胞凋亡率也远高于N细胞质的。凋亡率随诱导浓度和诱导时间的增加而增加。AO、EB复染与Hoechst 33258染色相比,两者细胞凋亡率接近,准确度均高,图像清晰,且费用相当,但前者可以区分早期和晚期凋亡细胞而后者不能区分。

一种快速定性分析消毒剂中季铵盐的方法

目的研究一种能够快速定性鉴别消毒剂中季铵盐的简便方法。方法采用特定试样和指示剂与试物反应显色技术用肉眼直接观察的方法进行了实验室研究。结果季铵盐与显色指示剂反应后,使水层由蓝色透明变为无色透明,氯仿层由无色透明变为蓝色透明;空白对照组则出现相反现象。20 g/L戊二醛,5 g/L醋酸氯己定,75%乙醇和45%异丙醇等4种消毒剂中含100 mg/L季铵盐成分,不干扰该指示剂定性检测。用本研究显色指示剂检测10种品牌市售消毒剂,能明确地定性检出3种含季铵盐类消毒剂,另7种消毒剂经验证试验确认不含季铵盐成分。结论本研究复合指示剂能通过肉眼观察对含季铵盐消毒剂作定性检测,既可鉴定单方季铵盐也可用于复方季铵盐类消毒剂的定性鉴别。

SYTO/EB双重染色法测定皮肤活力

目的:建立一种简便、快速和灵敏的皮肤组织原位活力检测方法。方法:采用SYTO 13和溴化乙啶(EB)两种核酸染色剂对皮肤组织进行双重染色,荧光显微镜下通过颜色不同判断细胞的活力状态并计算出活力百分比。本研究利用SYTO/EB法和一种快速、灵敏的间接活力测定方法WST-1法同时对4℃保存不同时间的皮肤进行活力的检测,并将结果进行比较。结果:两种方法测定的结果均显示皮肤在一定的保存液中4℃保存后两周时活力为新鲜皮肤的30%左右,两个结果在各时相点均未有明显差异。结论:SYTO/EB测定皮肤的活力快速、灵敏且简便,并可原位观察皮肤内各种细胞的活力,不失为一种可取的皮肤活力检测方法。

溴化乙锭在毛细管DNA传感器中的应用

目的:构建一种新型毛细管的DNA生物传感器。方法:实验于2004-10/2005-12在四川大学华西基础医学与法医学院生物化学实验室完成。毛细管内壁通过poly-l-lysine将20-mer-ssDNA(探针)固定,与互补靶核苷酸杂交后,通过溴化乙锭染色后检测与0.033 mmol/L靶核苷酸杂交后的荧光强度;同样浓度的靶核苷酸序列连续测定3次,进行重现性比较;及对不同杂交时间的荧光强度进行检测。结果:通过溴化乙锭对毛细管固定探针与互补靶DNA杂交进行染色,用RF5000荧光光度仪测定荧光值,测定组高于试剂空白组,差异有显著性意义[分别为(203.15±19.41),(133.05±11.82)s-1,t=4.1106,P<0.05]。杂交14h的荧光强度明显高于杂交12h,差异有显著性意义[分别为(203.06±17.36),(101.54±25.63)s-1,P<0.01],重现性较好。结论:在毛细管DNA传感器构建中,溴化乙锭可作为荧光标记物对模式寡核苷酸进行检测。

HMC毒素处理诱导玉米幼苗根冠细胞凋亡的结果观察

以玉米小斑病菌C小种毒素(HMC-toxin)分别诱导2对同核异质体玉米的幼苗根冠细胞(即:基因型为B37的玉米C型不育细胞质CB37和同核保持系NB37,基因型为Mo17的玉米C型不育细胞质CMo17和同核保持系NMo17),采用吖啶橙(AO)与溴化乙啶(EB)荧光复染的方法,研究细胞发生凋亡的差异性及凋亡规律。结果表明:CB37的幼叶接种PBS再经150mg/L的HMC毒素处理后,其根冠细胞凋亡率达最高值为45.3%,而NB37仅为15.3%;CMo17凋亡率最高达63.7%,NMo17仅为6.39%;C细胞质的细胞死亡率远高于N细胞质,凋亡率随诱导浓度和诱导时间的增加而增加。HMC毒素诱导根冠细胞发生凋亡,活细胞核发出绿色荧光,坏死细胞核则呈现橙红色荧光,且细胞核呈松散的颗粒状或新月状,凋亡细胞则发出黄绿色或绿色荧光,染色体固缩成新月状或颗粒状。

壳聚糖-DNA复合物形成机理研究

为了探讨壳聚糖-DNA复合物的形成机理,通过向Na2SO4、DNA和溴化乙啶(EB)的混合溶液中分别加入不同体积的壳聚糖溶液,运用荧光分光光度计检测溶液荧光值的变化,发现随着壳聚糖浓度的增加,荧光值下降,说明壳聚糖和EB DNA之间的结合存在竞争性;通过测定Na2SO4离子浓度对壳聚糖-EB-DNA体系的影响发现,随着离子浓度的增加,壳聚糖-EB-DNA三者形成的平衡体系整体荧光强度不断减弱,这说明,壳聚糖是以静电与DNA相互作用的。

溴化乙锭及放线菌素D对高分辨染色体的作用

应用胸苷同步化方法,对比分析了染色体凝缩抑制剂溴化乙锭及放线菌素D对高分辨染色体的影响。结果表明,溴化乙锭组高分辨分裂细胞比例高,染色体带纹稳定,染色体断裂率低。放线菌素D组染色体带纹出现不均匀凝缩现象,染色体断裂率增高。提示溴化乙锭是一种稳定的染色体凝缩抑制剂,优于放线菌素D。

以P2X7受体为靶标的高通量筛选方法

P2X7受体是嘌呤-配体门控离子通道受体家族P2X的一员.一些研究表明,P2X7受体主要在上皮细胞和免疫系统细胞中表达,参与免疫调节的过程,如炎性细胞因子释放、膜融合及细胞凋亡.P2X7受体是神经退行性疾病、类风湿关节炎、神经性疼痛药物筛选的重要靶标,已成为大型制药公司新的研究热点.构建表达人源P2X7受体(hP2X7R)的人胚肾细胞系HEK-293,利用荧光成像分析系统(FlexStation),针对P2X7受体特性,比较和验证了3种用于检测P2X7受体高表达细胞系药理学特征的高通量荧光检测方法,分别是膜电位检测法、溴化乙啶内吞检测法和钙内流检测法.对3种不同方法的比较研究表明,钙内流检测法简便、快捷,更适用于P2X7受体调节剂的低成本、高通量药物筛选.