表观转录元件溴结构域蛋白4抑制剂减轻心肌梗死后心脏损伤

目的:探究溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)在心肌梗死后心脏损伤中的作用。方法:通过分析公共数据,明确心肌梗死小鼠心脏组织中BRD4在整体和以及各细胞群中的表达变化。构建心肌梗死小鼠模型,设立空白对照组(WT组),心肌梗死组(MI组),药物组(JQ1组,ABBV-744组),术后第6天腹腔注射BRD4抑制剂JQ1或灌胃二代抑制剂ABBV-744,持续22天。MI术后4周,小动物超声影像系统检测小鼠心功能,检测小鼠质量、心脏质量与胫骨长度,天狼星红染色评估梗死区纤维化程度,WGA染色检测心肌细胞横截面积。结果:与心肌梗死组相比,BRD4抑制剂组能够显著改善术后心功能障碍(P<0.01)。转录组学数据表明,BRD4在心肌梗死损伤区域持续高表达。单细胞数据显示,心肌梗死后,成纤维细胞中BRD4阳性细胞比例显著增加,并且在心肌梗死后7、14、30d的成纤维细胞中,BRD4表达持续上调。与心肌梗死组相比,BRD4抑制剂组显著减轻心脏纤维化(P <0.01)。与一代药物组相比,二代药物组心脏纤维化程度显著降低(P<0.01)。结论:抑制表观转录因子BRD4可减轻心肌梗死后心脏损伤,抑制心脏纤维化,并改善心功能。

含溴结构域蛋白4在心血管疾病发病机制中的研究进展

心血管疾病(cardiovascular diseases)一直以来都是我国乃至全球疾病负担的主要原因,其生存率低,发病率一直呈现上升趋势[1]。据推测,我国目前心血管疾病患者高达3亿,导致的死亡人数约占全国死亡人数的40%,有数据显示,我国每年因心血管疾病产生的费用高达1700亿元,给医疗卫生保健资源带来了极大的负担[2-3]。心血管疾病涉及冠心病、心律失常、高血压、心肌病和心力衰竭等,虽然临床表现存在差异,但在发病机制中仍有许多相似之处。溴结构域和额外终端域(bromodomain and extra-terminal domain,BET)家族蛋白是一种表观遗传调控蛋白,由含溴结构域蛋白2(bromodomain-containing protein 2,BRD2)、BRD3、BRD4和睾丸特异性含溴结构域蛋白(testis-specific bromodomain-containing protein,BRDT)组成[4]。

溴结构域蛋白4及其抑制剂在炎症性疾病中的研究进展

溴结构域(bromodomain,BD)是一种高度保守的蛋白质结构域,具有特异性识别结合乙酰化赖氨酸残基的生物学功能。溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)是溴结构域和超末端结构(bromodomain and extra-terminal domain,BET)家族成员之一,因对基因转录具有强大的调控能力而受到较多关注。目前,靶向BRD4的小分子抑制剂在抗炎和抗癌领域展现出巨大的潜力。本文介绍了BRD4的生物学功能和在人体组织中的表达分布,结合BRD4抑制剂的药物研发现状重点阐述BRD4抑制剂在炎症性疾病中的作用。

房颤患者血清溴结构域蛋白4的表达及临床意义

目的探讨房颤(AF)患者血清溴结构域蛋白4(BRD4)的表达及临床意义。方法选取AF患者和阵发性室上性心动过速患者分别作为AF组[n=74,分为阵发性AF(阵发)组和持续性AF(持续)组]和对照(PSVT)组(n=73),取所有患者清晨空腹静脉血,采用实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)法检测血清BRD4水平,采用胸超声心动图测量AF组和PSVT组患者术前左心房前后径(LAAPD)及左心室射血分数(LVEF);采用食道超声心动图检测AF组患者术前24 h的左心耳最大排空流速(LAA-PEV);采用左心房高密度基质标测检测AF组患者术中左心房局部双极电压,据双极电压大小分为左心房低电压(LAVs)组(双极电压<0.5 mV)和正常电压(NLAVs)组(双极电压≥0.5 mV),其中LAVs组AF患者根据LAVs数量多少分为轻度组(1个LAVs)及中度组(2个及以上LAVs);随访AF组患者术后第3~12个月AF的复发情况,据术后随访复发情况分为复发组(reAF组)和未复发组(SR组);采用Spearman分析AF组患者血清BRD4与LAAPD、LVEF、LAA-PEV、左心房低电压、术后复发等指标的相关性。结果AF组患者血清BRD4、LAAPD均高于PSVT组(P<0.05),LVEF低于PSVT组(P<0.05);持续组AF患者术后复发例数、左房低电压例数、BRD4水平及LAAPD高于阵发组(P<0.05),LVEF及LAA-PEV低于阵发组(P<0.05);LAVs组AF患者外周静脉血BRD4水平、LAAPD高于NLAVs组(P<0.05),LVEF、LAA-PEV低于NLAVs组(P<0.05);中度组LAVs患者外周静脉血BRD4水平高于轻度组(P<0.05),LVEF低于轻度组(P<0.05);reAF组AF患者左房低电压例数、BRD4水平、LAAPD均高于SR组(P<0.05),LVEF、LAA-PEV低于SR组(P<0.05)。结论AF患者血清BRD4表达升高,可能对AF严重程度及术后复发具有一定的预测价值。

甲状腺乳头状癌患者组织中表皮生长因子受体、维生素D受体、溴结构域蛋白4表达水平及其临床意义

目的:探究甲状腺乳头状癌(PTC)患者组织中表皮生长因子受体(EGFR)、维生素D受体(VDR)、溴结构域蛋白4(BRD4)的表达水平和其临床意义。方法:选取2022年2月—2024年3月广州医科大学附属妇女儿童医疗中心增城院区收治的PTC患者54例作为研究对象,取患者的癌组织及癌旁正常组织,采用免疫组织化学技术检测组织中EGFR、VDR和BRD4蛋白表达水平,并分析EGFR、VDR、BRD4阳性表达与临床病理特征的关系。结果:PTC患者癌组织中EGFR、VDR及BRD4蛋白表达阳性率均高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.001)。不同临床病理特征的EGFR阳性表达情况比较,差异无统计学意义(P>0.05);瘤体>1 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期者VDR阳性率高于瘤体≤1 cm、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期者,差异有统计学意义(P<0.05);瘤体>1 cm、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期者BRD4阳性率高于瘤体≤1 cm、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期者,差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR蛋白表达与VDR、BRD4蛋白表达呈正相关(r=0.462、0.513,P<0.001);VDR蛋白与BRD4蛋白表达呈正相关(r=0.407,P<0.001)。结论:EGFR、VDR和BRD4在PTC患者组织中呈显著高表达,与PTC的形成及临床病理特征有一定相关性,可作为治疗PTC的监测指标。

慢性根尖周炎模型大鼠表观遗传分子:溴结构域蛋白4的表达变化

背景:根尖周炎是一种由感染牙髓内的细菌引起的根尖周组织的炎性疾病。溴结构域蛋白4在表观遗传的传递中起核心作用,研究表明溴结构域蛋白4在炎症及骨破坏中起到了重要的作用,但是其在慢性根尖周炎中的作用尚未见报道。目的:通过建立根尖周炎大鼠模型,探究溴结构域蛋白4在根尖周炎发展中的作用。方法:选取30只SD大鼠,随机分为5组,分别为0周组、1周组、2周组、3周组以及4周组,每组各6只。于左侧下颌第一磨牙行开髓术,暴露牙髓,分别于术后0,1,2,3,4周麻醉处死。多聚甲醛固定后取下颌骨,拍摄Micro-CT鉴定根尖周炎动物模型是否构建成功。脱钙1个月后制作冰冻切片,免疫组化法检测溴结构域蛋白4在慢性根尖周炎发展中的作用。结果与结论:①Micro-CT结果显示,大鼠根尖周炎动物模型在术后一两周出现牙周膜增宽及根尖阴影,根尖阴影面积随时间推移而增加;3周组和4周组阴影面积增加明显,差异有显著性意义(P<0.05);1周组、2周组、3周组以及4周组根尖阴影面积均高于0周组,差异有显著性意义(P<0.05),3周组及4周组相比差异无显著性意义(P>0.05);②免疫组化结果显示,1周组、2周组、3周组以及4周组的溴结构域蛋白4表达水平均高于0周组,差异有显著性意义(P<0.05);溴结构域蛋白4在2周组表达最高,差异有显著性意义(P<0.05);溴结构域蛋白4在1周组和4周组表达无明显差异(P>0.05);③提示溴结构域蛋白4在根尖周炎发生发展中起到了一定的作用,溴结构域蛋白4参与了慢性根尖炎的发展。

溴结构域蛋白4在哮喘上皮-间质转化中作用的研究进展

气道炎症和气道重塑是支气管哮喘的重要特征,慢性气道炎症可以通过诱导上皮-间质转化(EMT)参与支气管哮喘气道重塑过程。溴结构域蛋白4(BRD4)是哺乳动物体内一种重要转录调节因子,近年越来越多证据表明,其可能是通过核因子-κB/Rel A信号通路调控哮喘气道重塑过程。本文总结了BRD4调控哮喘EMT的研究进展,旨在进一步探讨哮喘的分子机制,为哮喘的防治提供新的策略。

溴结构域蛋白4抑制剂对前列腺癌细胞组蛋白巴豆酰化修饰以及增殖、迁移的影响

目的·探讨溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein4,BRD4)抑制剂I-BET762对前列腺癌细胞组蛋白巴豆酰化修饰以及前列腺癌细胞增殖、迁移的影响。方法·选取3种人前列腺癌细胞系LNCaP、C4-2B和PC-3,分别以各自的半数抑制浓度的I-BET762处理,Western blotting检测组蛋白上巴豆酰化修饰以及乙酰化酶的表达。CCK-8、Transwell迁移实验和划痕实验分别测定I-BET762对于LNCaP、C4-2B和PC-3细胞的增殖、迁移的影响。结果·I-BET762可以抑制组蛋白乙酰化酶P300和GCN5的表达,降低组蛋白巴豆酰化修饰表达。Transwell迁移实验和划痕实验结果表明,I-BET762可以抑制前列腺癌细胞系LNCaP、C4-2B和PC-3的迁移能力(均P<0.01);CCK-8实验结果表明,I-BET762处理后,3种前列腺癌细胞系的增殖能力被抑制。结论·前列腺癌细胞中I-BET762能够降低组蛋白巴豆酰化修饰水平,抑制细胞增殖和迁移。

miR-204-5p靶向溴结构域蛋白4对舌鳞状细胞癌细胞SCC25增殖和迁移侵袭的影响研究

目的探讨miR-204-5p对溴结构域蛋白(BRD)4的靶向作用机制以及对舌鳞状细胞癌SCC25细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测舌鳞状细胞癌组织以及不同细胞株系间的miR-204-5p和BRD4 mRNA的表达水平;miR-204-5p转染SCC25细胞后,细胞计数试剂盒(CCK)8法检测其对细胞增殖的影响,Transwell小室法检测miR-204-5p对SCC25迁移和侵袭的影响;使用TargetScan和荧光素酶实验分析并验证miR-204-5p与BRD4的靶向调控关系;RT-qPCR和Western blot检测miR-204-5p模拟物和抑制剂对BRD4表达水平的影响;Transwell小室法和CCK8法检测miR-204-5p调控BRD4对SCC25增殖和迁移侵袭的影响。结果miR-204-5p在舌鳞状细胞癌组织和SCC25细胞中表达下调,BRD4在舌鳞状细胞癌组织和SCC25细胞中表达上调;提高miR-204-5p表达量抑制SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭;TargetScan和荧光素酶实验证实miR-204-5p与BRD4具有靶向负调控关系;miR-204-5p模拟物抑制BRD4表达,miR-204-5p抑制剂促进BRD4表达上调;当在SCC25细胞中同时过表达miR-204-5p和BRD4时,BRD4能够回补miR-204-5p对SCC25细胞的抑制作用。结论miR-204-5p能够通过靶向负调控BRD4抑制舌鳞状细胞癌SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭。

血清脑源性神经生长因子、神经元PAS结构域蛋白4和神经元特异性烯醇化酶水平与急性缺血性脑卒中患者认知障碍的关系

目的探讨血清脑源性神经生长因子(BDNF)、神经元PAS结构域蛋白4(NPAS4)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平与急性缺血性脑卒中(AIS)患者认知障碍的关系。方法选择2018年6月至2020年6月重庆市丰都县人民医院收治的AIS患者128例为研究对象。根据患者入院治疗7~10 d时的简易精神状态量表(MMSE)评分结果将患者分为认知正常组(n=60,MMSE评分≥27分)和认知障碍组(n=68,MMSE评分<27分)。入院后1周,抽取2组患者晨起空腹外周静脉血5 mL,采用酶联免疫吸附试验检测血清中BDNF、NPAS4、NSE水平。采用Pearson相关分析BDNF、NPAS4、NSE水平与MMSE评分的关系,采用单因素分析和多因素logistic回归分析AIS患者发生认知障碍的危险因素。结果认知障碍组与认知正常组患者的年龄、性别、起病至入院时间、脑梗死部位及合并高血压、冠状动脉性心脏病、房颤的比例比较差异均无统计学意义(P>0.05);认知障碍组患者的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、受教育年限、梗死病灶大小、合并糖尿病情况及血清BDNF、NPAS4、NSE水平与认知正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。AIS患者血清NPAS4、NSE水平与MMSE评分呈正相关(r=0.442、0.486,P<0.05),血清BDNF水平与MMSE评分呈负相关(r=-0.395,P<0.05)。血清NPAS4、NSE水平及NIHSS、GCS评分和梗死病灶大小是AIS患者发生认知障碍的独立危险因素(P<0.05);血清BDNF水平和受教育年限是AIS患者发生认知障碍的保护因素(P<0.05)。结论AIS患者发生认知障碍受到多种因素的影响。血清NPAS4、NSE水平升高是AIS患者发生认知障碍的独立危险因素,血清中BDNF水平升高是AIS患者发生认知障碍的保护因素。

溴结构域蛋白4特异性抑制剂JQ-1对人增生性瘢痕的影响

目的·探究溴结构域蛋白4(BRD4)特异性抑制剂JQ-1对人增生性瘢痕的影响及其可能机制。方法·收集人皮肤增生性瘢痕标本,原代培养皮肤瘢痕成纤维细胞,并进行传代培养,予以0.1、0.5、1.0、2.0、2.5、12.5μmol/L不同浓度的JQ-1干预48 h,CCK-8试剂盒、细胞划痕试验和ELISA法分别检测JQ-1对成纤维细胞增殖、迁移、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)分泌量及TGF-β1的蛋白水平。36只裸鼠构建瘢痕动物模型,将临床上获得的瘢痕组织(1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm)移植于裸鼠背部皮下。继续饲养4周后,将裸鼠分成2组,JQ-1组和DMSO组,分别每日予以0.5μmol/L JQ-1及0.1%DMSO的瘢痕内多点注射,1 mL/只。天狼猩红染色和免疫组织化学法分别观察瘢痕中COLⅠ/Ⅲ及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化情况。结果·细胞实验表明:(1)0.5μmol/L及以上浓度JQ-1对成纤维细胞增殖有明显抑制作用(均P<0.01)。(2)JQ-1可抑制成纤维细胞的迁移活性(均P<0.01)。(3)JQ-1可抑制成纤维细胞COLⅠ的分泌及TGF-β1的产生(均P<0.01)。动物实验表明:(1)JQ-1组COLⅠ/Ⅲ总含量较DMSO组显著下降,且COLⅠ/Ⅲ比值下降(均P<0.05)。(2)JQ-1组α-SMA的含量较对照组明显下降(均P<0.05)。结论·JQ-1可抑制体外人瘢痕成纤维细胞的增殖、迁移、COLⅠ的分泌及TGF-β1的产生;其对裸鼠体内的人瘢痕组织中COLⅠ/Ⅲ的分泌及成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化亦有抑制作用。

7,7-二甲基-2-对溴苯基-4-苯基-5-氧代-1,4,5,6,7,8-六氢化-6H-喹啉的合成及晶体结构

标题化合物C23H22BrNO是由1-(4-溴苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮与5,5-二甲基-1, 3-环己二酮在N, N-二甲基甲酰胺(DMF)中在NH4OAc催化下反应而得。结构通过单晶X-射线衍射分析确定,其晶体属于单斜晶系,空间群C2/C, a = 19.678(4),b = 13.571(2),c = 17.311(3) 牛琤 = 118.74(1),Mr = 408.33, V = 4055(1) ?,Dc = 1.338 g/cm3, Z = 8, m (MoKa) = 2.038 mm-1, F(000) = 1680, R = 0.0539,wR = 0.1369。X-衍射分析表明,六元环C(10)C(13)C(16)C(17)采用半椅式构象:原子C(10),C(11),C(12),C(16)和C(17)在同一个平面内,而原子C(13)远离平面为0.3282 牛闷矫嬗?个苯环的夹角分别为41.09, 81.97,2个苯环的夹角为75.87。另外在晶体结构中,存在1个分子间氢键。

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B反式激活基因的克隆化研究

目的 应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)技术构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 4B(NS4B)转染细胞差异表达cDNA消减文库 ,克隆HCVNS4B蛋白反式激活相关基因。方法 以HCVNS4B表达质粒pcDNA3 .1( ) NS4B转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 .1( )为对照 ,制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,进行抑制性消减杂交分析。将富集的二次PCR产物与T A载体连接 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑取克隆聚合酶链反应 (PCR)扩增后进行测序及同源性分析。结果 文库扩增后得到 3 3个阳性克隆 ,经菌落PCR分析显示其中 2 8个克隆含有大小不等的 2 0 0～ 10 0 0bp插入片段。测序及同源性分析显示 ,12种已知基因编码蛋白 ,包括一些与细胞周期、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因 ,可能是NS4B反式激活靶基因。结论 成功构建了HCVNS4B反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,为进一步阐明HCVNS4B反式调节的靶基因在肝炎。

溴结构域蛋白4经PTEN/PI3K/AKT通路对甲状腺乳头状癌细胞摄碘相关指标影响的研究

目的研究溴结构域蛋白4(BRD4)在甲状腺乳头状癌(PCT)中的表达水平及其抑制剂JQ1对PCT细胞增殖、迁移能力的影响,进一步探索影响摄碘能力的调控机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术及蛋白质印迹法分别检测BRD4在正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1及人PCT细胞TPC-1、K1的表达水平。采用CCK-8及划痕实验分别检测JQ1对TPC-1、K1细胞增殖及迁移能力的影响。采用高内涵细胞成像与分析系统观察TPC-1、K1细胞在JQ1作用下的形态及数目变化。采用qRT-PCR技术检测影响PCT摄碘能力相关基因的表达。结果BRD4在PCT细胞及癌组织中高表达。JQ1对TPC-1、K1细胞增殖能力呈时间及浓度依赖性抑制。TPC-1、K1细胞的48 h半抑制浓度分别为(9.045±0.772)、(14.169±1.406)μmol/L。JQ1可以抑制TPC-1、K1细胞的迁移,且具有统计学意义(P<0.05)。JQ1分别作用于TPC-1、K1细胞48 h后,实验组BRD4、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的mRNA表达水平降低。第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)、钠-碘转运蛋白的mRNA表达升高。结论BRD4在PCT中呈现高表达状态。JQ1可有效抑制BRD4的表达,并影响PTEN/PI3K/AKT通路从而抑制PCT细胞的增殖及迁移,使得其摄碘能力增加。

氟西汀通过上调海马内溴结构域蛋白4的表达改善慢性束缚应激所致小鼠的抑郁样行为

目的探讨氟西汀(FLX)对慢性束缚应激(CRS)所致小鼠抑郁样行为及海马内溴结构域蛋白4(BRD4)表达的影响。方法 24只雄性昆明小鼠随机分为生理盐水对照(NS)组、抑郁模型(CRS)组、氟西汀干预(CRS+FLX)组。慢性束缚应激3周建立小鼠抑郁模型,应激的第8天至第21天CRS+FLX组于应激前30 min腹腔注射氟西汀(10 mg/kg),NS组及CRS组注射等体积生理盐水。采用糖水偏好实验、喷糖实验、强迫游泳实验、新旧事物识别实验和旷场实验检测各组小鼠行为变化;采用Western blotting及Real-time PCR法检测小鼠海马BRD4蛋白和mRNA的表达情况。结果与NS组相比,CRS组小鼠表现出明显的抑郁样行为,包括糖水偏好百分比显著降低(P<0.01),喷糖实验舔糖时间缩短(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.01),新事物辨别指数降低(P<0.0001),抗抑郁药FLX干预可逆转CRS所诱导的上述抑郁样行为表现(P<0.05);与NS组相比,CRS组小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达明显下调(1.0000±0.04577比0.08337±0.01658; 1.0000±0.04379比0.6672±0.03193,P<0.05),而FLX可上调抑郁小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达(0.08337±0.01658比0.4983±0.08574; 0.6672±0.03193比0.8572±0.03181,P<0.05)。结论氟西汀可能通过上调海马BRD4的表达改善小鼠抑郁样行为。

原发性肝癌组织中溴结构域蛋白4的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的探讨原发性肝癌(PHC)组织中溴结构域蛋白4(BRD4)的表达及与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2015年7月—2018年7月青海省人民医院收治的PHC患者83例作为研究对象,均行手术切除,术后随访3年。采用免疫组织化学法检测BRD4蛋白的表达,对比癌组织、癌旁组织中BRD4蛋白的表达,分析PHC癌组织中BRD4蛋白表达与患者临床病理特征的关系,影响PHC患者预后的因素,癌组织中BRD4蛋白表达与PHC患者预后的关系。结果PHC患者癌组织中BRD4阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。有微血管侵犯、肿瘤包膜不完整、临床分期Ⅲ期、低分化癌组织BRD4蛋白阳性表达率较高(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,微血管侵犯[RR=5.379(95%CI:3.487,13.005)]、肿瘤包膜[RR=5.614(95%CI:3.986,16.115)]、临床分期[RR=5.312(95%CI:3.307,12.413)]、分化程度[RR=4.187(95%CI:2.893,10.006)]、BRD4蛋白表达[RR=5.799(95%CI:4.156,17.235)]是PHC患者复发的独立影响因素(P<0.05);肿瘤包膜[RR=3.152(95%CI:2.150,8.795)]、临床分期[RR=4.998(95%CI:2.695,11.003)]、分化程度[RR=5.650(95%CI:3.803,17.001)]、BRD4蛋白表达[RR=5.987(95%CI:4.384,18.828)]是PHC患者生存的独立影响因素(P<0.05)。BRD4蛋白阳性表达患者与阴性表达患者的无病生存率、总生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05),BRD4蛋白阴性表达患者的无病生存率、总生存率均高于BRD4蛋白阳性表达患者。结论PHC患者癌组织中BRD4蛋白表达与临床病理特征及预后有关,BRD4蛋白阳性表达者预后不良风险高。

表观调控蛋白BRD4及其抑制剂在心肌纤维化中的研究进展

心肌纤维化是许多心血管疾病的早期改变,如高血压、心肌梗死、病毒性心肌炎、动脉粥样硬化、糖尿病等[1];心肌纤维化可致心力衰竭、心律失常和心源性猝死等严重并发症,因此预防和逆转心肌纤维化是临床治疗中的关键点之一。已有研究[2]表明表观遗传学参与调控炎症、免疫反应以及与心血管并发症有关的基因的转录。BRD4是表观调控蛋白BET家族的一员,其作用底物广泛,可与多种蛋白相互作用,参与细胞的增殖、凋亡、炎症反应等生物过程,因此BRD4与许多疾病的发生和发展密切相关[3]。

溴结构蛋白4在食管鳞癌中的表达及JQ-1对其活性的抑制作用

目的探讨溴结构蛋白(BRD)4在食管鳞癌中的表达特征及靶向抑制内源性BRD4的活性对食管鳞癌细胞增殖的影响及作用机制。方法免疫组化染色检测80例食管鳞癌和配对癌旁组织中BRD4的表达情况,分析BRD4的表达与临床病理特征的关系,分析其在预后评估中的价值。小分子抑制剂JQ-1作用于食管鳞癌细胞EC109,MTT分析抑制内源性BRD4的活性对细胞增殖的影响;流式细胞术分析JQ-1干预对细胞凋亡的影响;Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白表达的变化。结果 BRD4阳性表达于细胞质和细胞核,癌组织较癌旁组织表达显著增高;BRD4的表达与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移和病理分期显著相关(P<0.01),BRD4高表达的患者预后不良。JQ-1显著抑制食管鳞癌细胞的增殖;JQ-1干预24 h,EC109细胞的凋亡率显著上升;细胞凋亡执行蛋白cleaved-caspase3和cleaved-PARP1表达显著上调。结论 BRD的表达与食管鳞癌疾病进展明确相关,是潜在的预后评估标记物;抑制内源性BRD的活性通过诱导细胞凋亡抑制食管鳞癌细胞的增殖。因此,BRD4是潜在的食管鳞癌治疗靶点。

溴结构域蛋白4抑制剂JQ1对肝癌细胞活性的影响

目的:探讨溴结构域蛋白4(bromodomaincontaining protein 4,BRD4)抑制剂JQ1对两种不同肝癌细胞系增殖、凋亡的影响.方法:用B R D4抑制剂J Q1处理H e p G2,Bel-7402细胞株,磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)染色检测细胞活力;Ed U(5-ethynyl-2'-deoxyuridine)嵌入和Hoechst 33342染色法检测细胞增殖;以流式细胞术和Annexin V-FITC/PI双染法分别分析细胞周期、细胞凋亡;最后用Western blot法观察JQ1介导抗增殖作用主要下调蛋白C-myc在蛋白水平上的变化,进一步验证JQ1抑制肝癌细胞增殖的作用.同时探讨JQ1与目前肝癌细胞治疗药物甲苯磺酸索拉非尼片对肝癌细胞的比较和联合作用.结果:BRD4抑制剂JQ1可以以剂量依赖的方式显著抑制HCC细胞系:Hep G2细胞和B e l-7402细胞的活力,具体表现为:抑制其细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双染法分析发现能促进其凋亡;同时C-myc蛋白表达的也被显著抑制.与JQ1、索拉非尼片单药应用相比,小剂量的JQ1与索拉非尼片联合应用,HCC细胞的生长抑制率增加,凋亡率也增加,提示BRD4抑制剂JQ1联合索拉非尼片对细胞生长的抑制作用要强于JQ1或索拉非尼片单独用药.结论:BRD4抑制剂JQ1可能是一种潜在的可治疗肝细胞癌的新型药物.

溴结构域蛋白4表达与肝癌患者预后的关系及其对HCCLM3细胞增殖和凋亡的影响

目的检测溴结构域蛋白4(BRD4)在肝癌组织中的表达,分析其表达与预后的关系,探讨沉默BRD4表达对肝癌HCCLM3细胞增殖和凋亡的影响。方法收集208例肝癌患者手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组化法检测BRD4表达,比较BRD4高表达和低表达患者的肿瘤复发率、术后生存期。选取BRD4高表达的HCCLM3细胞,将其分为空白组、空载组、shRNA-1抑制组,shRNA-1抑制组转染对应的BRD4慢病毒抑制基因序列抑制BRD4表达,空载组加入慢病毒空载体及转染试剂,空白组只加入转染试剂。采用Western blotting法检测各组BRD4表达,CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果肝癌组织中BRD4高表达率高于癌旁组织(P <0. 01)。BRD4高表达患者的肿瘤复发率较低表达患者升高,术后生存期较低表达患者缩短(P均<0. 01)。shRNA-1抑制组与其他两组相比较,细胞增殖OD值降低,细胞凋亡率升高(P均<0. 01)。结论高表达BRD4的肝癌患者预后较差;抑制BRD4表达可抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。