表观转录元件溴结构域蛋白4抑制剂减轻心肌梗死后心脏损伤

目的:探究溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)在心肌梗死后心脏损伤中的作用。方法:通过分析公共数据,明确心肌梗死小鼠心脏组织中BRD4在整体和以及各细胞群中的表达变化。构建心肌梗死小鼠模型,设立空白对照组(WT组),心肌梗死组(MI组),药物组(JQ1组,ABBV-744组),术后第6天腹腔注射BRD4抑制剂JQ1或灌胃二代抑制剂ABBV-744,持续22天。MI术后4周,小动物超声影像系统检测小鼠心功能,检测小鼠质量、心脏质量与胫骨长度,天狼星红染色评估梗死区纤维化程度,WGA染色检测心肌细胞横截面积。结果:与心肌梗死组相比,BRD4抑制剂组能够显著改善术后心功能障碍(P<0.01)。转录组学数据表明,BRD4在心肌梗死损伤区域持续高表达。单细胞数据显示,心肌梗死后,成纤维细胞中BRD4阳性细胞比例显著增加,并且在心肌梗死后7、14、30d的成纤维细胞中,BRD4表达持续上调。与心肌梗死组相比,BRD4抑制剂组显著减轻心脏纤维化(P <0.01)。与一代药物组相比,二代药物组心脏纤维化程度显著降低(P<0.01)。结论:抑制表观转录因子BRD4可减轻心肌梗死后心脏损伤,抑制心脏纤维化,并改善心功能。

溴结构域蛋白4及其抑制剂在炎症性疾病中的研究进展

溴结构域(bromodomain,BD)是一种高度保守的蛋白质结构域,具有特异性识别结合乙酰化赖氨酸残基的生物学功能。溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)是溴结构域和超末端结构(bromodomain and extra-terminal domain,BET)家族成员之一,因对基因转录具有强大的调控能力而受到较多关注。目前,靶向BRD4的小分子抑制剂在抗炎和抗癌领域展现出巨大的潜力。本文介绍了BRD4的生物学功能和在人体组织中的表达分布,结合BRD4抑制剂的药物研发现状重点阐述BRD4抑制剂在炎症性疾病中的作用。

房颤患者血清溴结构域蛋白4的表达及临床意义

目的探讨房颤(AF)患者血清溴结构域蛋白4(BRD4)的表达及临床意义。方法选取AF患者和阵发性室上性心动过速患者分别作为AF组[n=74,分为阵发性AF(阵发)组和持续性AF(持续)组]和对照(PSVT)组(n=73),取所有患者清晨空腹静脉血,采用实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)法检测血清BRD4水平,采用胸超声心动图测量AF组和PSVT组患者术前左心房前后径(LAAPD)及左心室射血分数(LVEF);采用食道超声心动图检测AF组患者术前24 h的左心耳最大排空流速(LAA-PEV);采用左心房高密度基质标测检测AF组患者术中左心房局部双极电压,据双极电压大小分为左心房低电压(LAVs)组(双极电压<0.5 mV)和正常电压(NLAVs)组(双极电压≥0.5 mV),其中LAVs组AF患者根据LAVs数量多少分为轻度组(1个LAVs)及中度组(2个及以上LAVs);随访AF组患者术后第3~12个月AF的复发情况,据术后随访复发情况分为复发组(reAF组)和未复发组(SR组);采用Spearman分析AF组患者血清BRD4与LAAPD、LVEF、LAA-PEV、左心房低电压、术后复发等指标的相关性。结果AF组患者血清BRD4、LAAPD均高于PSVT组(P<0.05),LVEF低于PSVT组(P<0.05);持续组AF患者术后复发例数、左房低电压例数、BRD4水平及LAAPD高于阵发组(P<0.05),LVEF及LAA-PEV低于阵发组(P<0.05);LAVs组AF患者外周静脉血BRD4水平、LAAPD高于NLAVs组(P<0.05),LVEF、LAA-PEV低于NLAVs组(P<0.05);中度组LAVs患者外周静脉血BRD4水平高于轻度组(P<0.05),LVEF低于轻度组(P<0.05);reAF组AF患者左房低电压例数、BRD4水平、LAAPD均高于SR组(P<0.05),LVEF、LAA-PEV低于SR组(P<0.05)。结论AF患者血清BRD4表达升高,可能对AF严重程度及术后复发具有一定的预测价值。

溴结构域蛋白4经PTEN/PI3K/AKT通路对甲状腺乳头状癌细胞摄碘相关指标影响的研究

目的研究溴结构域蛋白4(BRD4)在甲状腺乳头状癌(PCT)中的表达水平及其抑制剂JQ1对PCT细胞增殖、迁移能力的影响,进一步探索影响摄碘能力的调控机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术及蛋白质印迹法分别检测BRD4在正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1及人PCT细胞TPC-1、K1的表达水平。采用CCK-8及划痕实验分别检测JQ1对TPC-1、K1细胞增殖及迁移能力的影响。采用高内涵细胞成像与分析系统观察TPC-1、K1细胞在JQ1作用下的形态及数目变化。采用qRT-PCR技术检测影响PCT摄碘能力相关基因的表达。结果BRD4在PCT细胞及癌组织中高表达。JQ1对TPC-1、K1细胞增殖能力呈时间及浓度依赖性抑制。TPC-1、K1细胞的48 h半抑制浓度分别为(9.045±0.772)、(14.169±1.406)μmol/L。JQ1可以抑制TPC-1、K1细胞的迁移,且具有统计学意义(P<0.05)。JQ1分别作用于TPC-1、K1细胞48 h后,实验组BRD4、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的mRNA表达水平降低。第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)、钠-碘转运蛋白的mRNA表达升高。结论BRD4在PCT中呈现高表达状态。JQ1可有效抑制BRD4的表达,并影响PTEN/PI3K/AKT通路从而抑制PCT细胞的增殖及迁移,使得其摄碘能力增加。

抑制剂对溴结构域蛋白4的两个溴结构域选择机制的多副本分子动力学模拟和自由能分析

溴结构域蛋白4在细胞周期调节中至关重要,已成为治疗各种癌症的潜在靶标、溴结构域蛋白4包含两个溴结构域,即BD1和BD2.研究表明,选择性地抑制BD1或BD2可能提供更有效的治疗方案.因此,了解抑制剂对BD1和BD2结合的选择性机制对于开发BD1和BD2的高选择性抑制剂至关重要.本文利用多副本分子动力学模拟研究了抑制剂SG3-179、GSK778和GSK620对BD1和BD2的结合选择性.结果显示,BD1比BD2具有更强的结构灵活性,而且BD1和BD2表现出不同的内部动力学.对自由能景观的分析表明,BD1和BD2的构象分布存在明显的差异.结合自由能预测表明,熵变、静电相互作用和范德华相互作用是SG3-179、GSK778和GSK620对BD1和BD2选择性结合的关键因素.单个残基能量贡献的计算表明,(BD1,BD2)中的残基(W81,W374)、(P82,P375)、(Q85,K378)、(V87,V380)、(L92,L385)、(N93,G386)、(L94,L387)、(C136,C429)、(N140,N433)、(K141,P434)、(D144,H437)和(I146,V439)在SG3-179、GSK778和GSK620与BD1和BD2的结合中产生明显的能量差异,它们可以作为开发针对BD1或BD2的高选择性抑制剂的有效靶点.相关信息可为提高抑制剂对BD1和BD2的选择性提供重要的理论指导.

含溴结构域蛋白4加重高糖诱导的内皮细胞损伤机制探讨

目的 探讨含溴结构域蛋白4(BRD4)对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制。方法 培养脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、高糖刺激组(HG)、BRD4沉默组(BRD4 siRNA组)、BRD4沉默的HG组(BRD4 siRNA+HG组)。采用ELISA法检测各组炎症细胞因子水平,采用试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)水平,采用试剂盒检测各组超氧化物歧化酶2(SOD2)和谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)活性以及丙二醛(MDA)水平,采用一氧化氮(NO)检测试剂盒检测NO含量,采用免疫荧光染色检测核因子E2相关因子2(NRF2)的表达以及核转位情况。结果 对照组和BRD4 siRNA组细胞促炎症因子、ROS、MDA、NO水平、SOD2和Gpx活性、细胞活性、细胞凋亡数量、NRF2表达及核转位水平差异无统计学意义(P>0.05)。HG组及BRD4 siRNA+HG组细胞促炎症因子、ROS、MDA水平高于对照组,SOD2、Gpx、NO水平、细胞活性、NRF2表达以及核转位水平低于对照组,且BRD4 siRNA+HG组细胞促炎症因子、ROS、MDA水平低于HG组,SOD2、Gpx、NO水平、细胞活性、细胞NRF2表达以及核转位水平高于HG组(P<0.05)。HG组及BRD4 siRNA+HG组细胞凋亡数量多于对照组,与HG组相比,BRD4 siRNA+HG组细胞凋亡数量减少(P<0.05)。结论 BRD4通过抑制NRF2的核转位加重高糖诱导的内皮细胞损伤,BRD4可能参与糖尿病并发症的发生发展。

溴结构域蛋白4在糖尿病及其并发症中的作用研究进展

糖尿病是一组由多病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢性疾病,是由于胰岛素分泌不足和(或)利用缺陷所引起的。体内长期碳水化合物、脂肪、蛋白质代谢紊乱,可引起多系统损害,导致眼、肾、神经、心脏、血管等组织器官出现慢性进行性病变、功能减退及衰竭。研究发现,溴结构域蛋白4(Bromodomain-containing protein 4,BRD4)在糖尿病及其并发症中发挥重要作用,它可识别并结合于靶基因的启动子区域,促进目的基因表达,从而调控糖尿病及其并发症的发生发展。因此,靶向抑制BRD4的表达,可能为治疗糖尿病提供了一种新的治疗途径。本文对BRD4在糖尿病及其并发症中的作用进行总结,强调针对BRD4的表观遗传学治疗策略在糖尿病及其并发症治疗中的潜力。

溶液中ATAD2溴结构域聚集行为的研究

三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)是一种染色质调节因子.它的异常表达与多种恶性肿瘤的发生和发展密切相关,因此还被称为致癌转录辅助因子.ATAD2由ATP酶结构域和溴结构域组成.其中,溴结构域可以特异性识别并结合组蛋白末端的乙酰化赖氨酸位点,调控染色体重构和转录,但其功能相关的很多结构特征并未可知.我们首先发现ATAD2溴结构域在溶液中易发生聚集.然后以核磁共振(NMR)和圆二色谱(CD)为主要研究手段,从环境因素和结构因素两方面对ATAD2溴结构域的聚集机理进行了初步探讨,发现该聚集行为伴有结构变化,并可能与功能相关.本研究可能为ATAD2溴结构域抑制剂的研发提供新的思路.

溴结构域蛋白4与口腔鳞癌HN4细胞系增殖与迁移能力的关系

目的研究溴结构域蛋白4(BRD4)与口腔鳞癌细胞增殖与迁移能力的关系。方法回顾性选取2019年3月至2020年8月锦州医科大学附属第二医院收治的4例口腔鳞状细胞癌患者,收集患者的口腔颌面部肿瘤组织样本。培养口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞和人口腔黏膜正常上皮细胞株HOK细胞,采用蛋白质印迹法检测BRD4蛋白在OSCC组织、邻近的非肿瘤组织中、正常上皮细胞株及OSCC细胞株中的表达水平。采用免疫荧光法检测BRD4在正常上皮细胞株及OSCC细胞株中的表达水平。采用免疫荧光法检测BRD4在HN4细胞中的表达水平。BRD4 siRNA转染HN4细胞干扰BRD4表达,然后Ki67和CCK-8实验检测HN4细胞增殖活力;采用Transwell实验和划痕实验检测BRD4 siRNA处理后的HN4细胞的迁移能力。采用蛋白质印迹法测定上皮间充质转化(EMT)标志蛋白的表达水平。实验中根据研究内容设置对照组和实验组。结果蛋白质印迹法检测结果显示,BRD4在OSCC组织中的相对表达水平为1.330±0.453,远高于其在邻近的非肿瘤组织中的相对表达水平(0.732±0.242),差异有统计学意义(P<0.005)。与HOK细胞相比,BRD4在OSCC细胞系中具有较高的表达水平。qRT-PCR结果显示,BRD4在HOK中的表达水平为1.000±0.321,在OSCC细胞系包括HN4、CAL27、KB、SCC9和SCC25细胞中的相对表达水平分别为7.917±0.784、7.442±0.693、4.852±0.488、7.317±0.534、7.451±0.642,BRD4在HOK中的表达水平均显著低于其在OSCC细胞系中的表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光结果显示,BRD4可表达于HN4细胞的细胞核和细胞质中。经BRD4 siRNA转染后,HN4细胞中BRD4的相对表达水平为0.352±0.041,显著低于NC siRNA转染后HN4细胞中BRD4表达水平(0.746±0.002),差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光实验结果显示,BRD4 siRNA处理HN4细胞48、72 h后,与对照组相比,细胞的增殖活力差异均无统计学意义(P>0.05);CKK8实验结果也显示,BRD4 siRNA处理HN4细胞24、48和72 h后,与对照组相比,细胞的增殖活力差异均无统计学意义(P>0.05)。划痕实验结果显示,BRD4 siRNA处理HN4细胞12、24和36 h后,与对照组比较,划痕面积差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验结果显示,BRD4 siRNA处理HN4细胞12、24 h后,实验组细胞迁移数分别为9.883±0.792、20.110±2.981,显著低于对照组(15.487±1.729、37.389±3.288),差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,BRD4 siRNA处理HN4细胞后,E-cadheirn表达水平增加,而N-cadheirn、Vimentin和BRD4蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论BRD4在口腔鳞癌细胞中表达水平高于正常细胞,BRD4基因沉默后,不会影响肿瘤细胞的增殖,但仍然会促进口腔癌细胞迁移和EMT进程。

结直肠癌组织中溴结构域蛋白4表达水平与病人临床病理特征及预后的相关性

目的分析结直肠癌(CRC)组织中溴结构域蛋白4(BRD4)的表达,探讨其与病人临床病理特征及预后的关系。方法选取2014年11月~2017年5月本院收治的CRC病人,从病人根治切除术中切取CRC组织及癌旁组织。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法、免疫组化法分别检测CRC组织及癌旁组织中BRD4 mRNA及BRD4蛋白表达情况;采用Kaplan-Meier生存曲线分析BRD4表达与病人预后的关系;采用Cox回归分析影响CRC病人预后的危险因素。结果与癌旁组织相比,CRC组织BRD4 mRNA表达水平及BRD4蛋白阳性表达率均升高(P<0.05)。BRD4 mRNA表达水平与CRC病人区域淋巴结转移(N)、远处转移(M)相关(P<0.05),BRD4蛋白表达与CRC病人组织分化程度、N、M相关(P<0.05)。Kaplan-Meier法分析显示,BRD4 mRNA高表达、BRD4蛋白阳性表达病人5年无进展生存率分别显著低于BRD4 mRNA低表达(P<0.05)、BRD4蛋白阴性表达(P<0.05)病人;BRD4 mRNA高表达、BRD4蛋白阳性表达病人5年累积生存率分别显著低于BRD4 mRNA低表达(P<0.05)、BRD4蛋白阴性表达(P<0.05)病人。多因素Cox回归分析表明,N_(1)~N_(2)、M_(1)、BRD4 mRNA高表达、BRD4阳性表达是影响CRC病人预后的危险因素(P<0.05)。结论CRC组织中BRD4高表达,与病人N、M及预后具有一定的相关性,可作为CRC病人预后的判定指标之一。

溴结构域蛋白4在心血管疾病中的研究进展

溴结构域蛋白(bromodomain protein,BRD)4是溴结构域和额外终端域家族蛋白中的一员,因其在表观遗传学层面调控基因表达中起到重要作用而在癌症等研究领域受到广泛关注。本文对近年来BRD4在动脉粥样硬化、心肌梗死、心力衰竭和肺动脉高压等心血管疾病中的研究进展进行综述,为心血管疾病的研究提供新的认识和思考。

miR-204-5p靶向溴结构域蛋白4对舌鳞状细胞癌细胞SCC25增殖和迁移侵袭的影响研究

目的探讨miR-204-5p对溴结构域蛋白(BRD)4的靶向作用机制以及对舌鳞状细胞癌SCC25细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测舌鳞状细胞癌组织以及不同细胞株系间的miR-204-5p和BRD4 mRNA的表达水平;miR-204-5p转染SCC25细胞后,细胞计数试剂盒(CCK)8法检测其对细胞增殖的影响,Transwell小室法检测miR-204-5p对SCC25迁移和侵袭的影响;使用TargetScan和荧光素酶实验分析并验证miR-204-5p与BRD4的靶向调控关系;RT-qPCR和Western blot检测miR-204-5p模拟物和抑制剂对BRD4表达水平的影响;Transwell小室法和CCK8法检测miR-204-5p调控BRD4对SCC25增殖和迁移侵袭的影响。结果miR-204-5p在舌鳞状细胞癌组织和SCC25细胞中表达下调,BRD4在舌鳞状细胞癌组织和SCC25细胞中表达上调;提高miR-204-5p表达量抑制SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭;TargetScan和荧光素酶实验证实miR-204-5p与BRD4具有靶向负调控关系;miR-204-5p模拟物抑制BRD4表达,miR-204-5p抑制剂促进BRD4表达上调;当在SCC25细胞中同时过表达miR-204-5p和BRD4时,BRD4能够回补miR-204-5p对SCC25细胞的抑制作用。结论miR-204-5p能够通过靶向负调控BRD4抑制舌鳞状细胞癌SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭。

含溴结构域和ET域蛋白抑制剂对结肠癌细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路和有氧糖酵解的影响

目的观察抑制含溴结构域和ET域(BET)蛋白能否影响结肠癌细胞的有氧糖酵解,并进一步探讨其影响机制是否通过下调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路活性实现。方法选择人结肠癌RKO、LS174T、HCT116细胞株。实验分成DMSO组和JQ1组。DMSO组分别于RKO、LS174T、HCT116细胞株中加入溶媒DMSO处理,JQ1组分别于RKO、LS174T、HCT116细胞株中加入BET蛋白抑制剂JQ1(将1μmol/L JQ1溶于DMSO中)处理,每组每个细胞株设3个副孔。测定两组各细胞株的乳酸含量和计算糖耗量,通过细胞计数观察RKO细胞的增殖密度。为研究JQ1能否协同低糖环境发挥其效应,另取未经处理的HCT116细胞株加入低糖DMEM培养基(葡萄糖浓度6.1 mmol/L)中培养,进行细胞计数。采用Western印迹法测定mTOR下游蛋白表达情况。结果JQ1组RKO、LS174T、HCT116细胞株的乳酸含量和糖耗量均显著低于DMSO组同细胞株(P值均<0.01)。JQ1组RKO细胞株和LS174T细胞株的细胞计数均显著少于DMSO组(P值均<0.01)。高糖或低糖培养基中,JQ1组HCT116细胞株的细胞计数均显著少于DMSO组(P值均<0.05)。光学显微镜下见,JQ1组RKO细胞增殖密度明显减少。Western印迹法结果显示,JQ1组RKO细胞株mTOR下游蛋白(抗磷酸化的核糖体S6蛋白)、HCT116细胞株mTOR下游蛋白(抗磷酸化的核糖体S6蛋白、抗4E结合蛋白1、抗S6蛋白激酶1蛋白)表达的灰度值均显著低于DMSO组(P值分别<0.05、0.01)。结论抑制BET蛋白可能通过抑制mTOR通路影响结肠癌细胞有氧糖酵解,从而抑制结肠癌细胞增殖。

氟西汀通过上调海马内溴结构域蛋白4的表达改善慢性束缚应激所致小鼠的抑郁样行为

目的探讨氟西汀(FLX)对慢性束缚应激(CRS)所致小鼠抑郁样行为及海马内溴结构域蛋白4(BRD4)表达的影响。方法 24只雄性昆明小鼠随机分为生理盐水对照(NS)组、抑郁模型(CRS)组、氟西汀干预(CRS+FLX)组。慢性束缚应激3周建立小鼠抑郁模型,应激的第8天至第21天CRS+FLX组于应激前30 min腹腔注射氟西汀(10 mg/kg),NS组及CRS组注射等体积生理盐水。采用糖水偏好实验、喷糖实验、强迫游泳实验、新旧事物识别实验和旷场实验检测各组小鼠行为变化;采用Western blotting及Real-time PCR法检测小鼠海马BRD4蛋白和mRNA的表达情况。结果与NS组相比,CRS组小鼠表现出明显的抑郁样行为,包括糖水偏好百分比显著降低(P<0.01),喷糖实验舔糖时间缩短(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.01),新事物辨别指数降低(P<0.0001),抗抑郁药FLX干预可逆转CRS所诱导的上述抑郁样行为表现(P<0.05);与NS组相比,CRS组小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达明显下调(1.0000±0.04577比0.08337±0.01658; 1.0000±0.04379比0.6672±0.03193,P<0.05),而FLX可上调抑郁小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达(0.08337±0.01658比0.4983±0.08574; 0.6672±0.03193比0.8572±0.03181,P<0.05)。结论氟西汀可能通过上调海马BRD4的表达改善小鼠抑郁样行为。

溴结构域蛋白4在哮喘上皮-间质转化中作用的研究进展

气道炎症和气道重塑是支气管哮喘的重要特征,慢性气道炎症可以通过诱导上皮-间质转化(EMT)参与支气管哮喘气道重塑过程。溴结构域蛋白4(BRD4)是哺乳动物体内一种重要转录调节因子,近年越来越多证据表明,其可能是通过核因子-κB/Rel A信号通路调控哮喘气道重塑过程。本文总结了BRD4调控哮喘EMT的研究进展,旨在进一步探讨哮喘的分子机制,为哮喘的防治提供新的策略。

原发性肝癌组织中溴结构域蛋白4的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的探讨原发性肝癌(PHC)组织中溴结构域蛋白4(BRD4)的表达及与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2015年7月—2018年7月青海省人民医院收治的PHC患者83例作为研究对象,均行手术切除,术后随访3年。采用免疫组织化学法检测BRD4蛋白的表达,对比癌组织、癌旁组织中BRD4蛋白的表达,分析PHC癌组织中BRD4蛋白表达与患者临床病理特征的关系,影响PHC患者预后的因素,癌组织中BRD4蛋白表达与PHC患者预后的关系。结果PHC患者癌组织中BRD4阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。有微血管侵犯、肿瘤包膜不完整、临床分期Ⅲ期、低分化癌组织BRD4蛋白阳性表达率较高(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,微血管侵犯[RR=5.379(95%CI:3.487,13.005)]、肿瘤包膜[RR=5.614(95%CI:3.986,16.115)]、临床分期[RR=5.312(95%CI:3.307,12.413)]、分化程度[RR=4.187(95%CI:2.893,10.006)]、BRD4蛋白表达[RR=5.799(95%CI:4.156,17.235)]是PHC患者复发的独立影响因素(P<0.05);肿瘤包膜[RR=3.152(95%CI:2.150,8.795)]、临床分期[RR=4.998(95%CI:2.695,11.003)]、分化程度[RR=5.650(95%CI:3.803,17.001)]、BRD4蛋白表达[RR=5.987(95%CI:4.384,18.828)]是PHC患者生存的独立影响因素(P<0.05)。BRD4蛋白阳性表达患者与阴性表达患者的无病生存率、总生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05),BRD4蛋白阴性表达患者的无病生存率、总生存率均高于BRD4蛋白阳性表达患者。结论PHC患者癌组织中BRD4蛋白表达与临床病理特征及预后有关,BRD4蛋白阳性表达者预后不良风险高。

慢性根尖周炎模型大鼠表观遗传分子:溴结构域蛋白4的表达变化

背景:根尖周炎是一种由感染牙髓内的细菌引起的根尖周组织的炎性疾病。溴结构域蛋白4在表观遗传的传递中起核心作用,研究表明溴结构域蛋白4在炎症及骨破坏中起到了重要的作用,但是其在慢性根尖周炎中的作用尚未见报道。目的:通过建立根尖周炎大鼠模型,探究溴结构域蛋白4在根尖周炎发展中的作用。方法:选取30只SD大鼠,随机分为5组,分别为0周组、1周组、2周组、3周组以及4周组,每组各6只。于左侧下颌第一磨牙行开髓术,暴露牙髓,分别于术后0,1,2,3,4周麻醉处死。多聚甲醛固定后取下颌骨,拍摄Micro-CT鉴定根尖周炎动物模型是否构建成功。脱钙1个月后制作冰冻切片,免疫组化法检测溴结构域蛋白4在慢性根尖周炎发展中的作用。结果与结论:①Micro-CT结果显示,大鼠根尖周炎动物模型在术后一两周出现牙周膜增宽及根尖阴影,根尖阴影面积随时间推移而增加;3周组和4周组阴影面积增加明显,差异有显著性意义(P<0.05);1周组、2周组、3周组以及4周组根尖阴影面积均高于0周组,差异有显著性意义(P<0.05),3周组及4周组相比差异无显著性意义(P>0.05);②免疫组化结果显示,1周组、2周组、3周组以及4周组的溴结构域蛋白4表达水平均高于0周组,差异有显著性意义(P<0.05);溴结构域蛋白4在2周组表达最高,差异有显著性意义(P<0.05);溴结构域蛋白4在1周组和4周组表达无明显差异(P>0.05);③提示溴结构域蛋白4在根尖周炎发生发展中起到了一定的作用,溴结构域蛋白4参与了慢性根尖炎的发展。

溴结构域蛋白4特异性抑制剂JQ-1对人增生性瘢痕的影响

目的·探究溴结构域蛋白4(BRD4)特异性抑制剂JQ-1对人增生性瘢痕的影响及其可能机制。方法·收集人皮肤增生性瘢痕标本,原代培养皮肤瘢痕成纤维细胞,并进行传代培养,予以0.1、0.5、1.0、2.0、2.5、12.5μmol/L不同浓度的JQ-1干预48 h,CCK-8试剂盒、细胞划痕试验和ELISA法分别检测JQ-1对成纤维细胞增殖、迁移、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)分泌量及TGF-β1的蛋白水平。36只裸鼠构建瘢痕动物模型,将临床上获得的瘢痕组织(1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm)移植于裸鼠背部皮下。继续饲养4周后,将裸鼠分成2组,JQ-1组和DMSO组,分别每日予以0.5μmol/L JQ-1及0.1%DMSO的瘢痕内多点注射,1 mL/只。天狼猩红染色和免疫组织化学法分别观察瘢痕中COLⅠ/Ⅲ及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化情况。结果·细胞实验表明:(1)0.5μmol/L及以上浓度JQ-1对成纤维细胞增殖有明显抑制作用(均P<0.01)。(2)JQ-1可抑制成纤维细胞的迁移活性(均P<0.01)。(3)JQ-1可抑制成纤维细胞COLⅠ的分泌及TGF-β1的产生(均P<0.01)。动物实验表明:(1)JQ-1组COLⅠ/Ⅲ总含量较DMSO组显著下降,且COLⅠ/Ⅲ比值下降(均P<0.05)。(2)JQ-1组α-SMA的含量较对照组明显下降(均P<0.05)。结论·JQ-1可抑制体外人瘢痕成纤维细胞的增殖、迁移、COLⅠ的分泌及TGF-β1的产生;其对裸鼠体内的人瘢痕组织中COLⅠ/Ⅲ的分泌及成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化亦有抑制作用。

溴结构域蛋白4抑制剂对前列腺癌细胞组蛋白巴豆酰化修饰以及增殖、迁移的影响

目的·探讨溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein4,BRD4)抑制剂I-BET762对前列腺癌细胞组蛋白巴豆酰化修饰以及前列腺癌细胞增殖、迁移的影响。方法·选取3种人前列腺癌细胞系LNCaP、C4-2B和PC-3,分别以各自的半数抑制浓度的I-BET762处理,Western blotting检测组蛋白上巴豆酰化修饰以及乙酰化酶的表达。CCK-8、Transwell迁移实验和划痕实验分别测定I-BET762对于LNCaP、C4-2B和PC-3细胞的增殖、迁移的影响。结果·I-BET762可以抑制组蛋白乙酰化酶P300和GCN5的表达,降低组蛋白巴豆酰化修饰表达。Transwell迁移实验和划痕实验结果表明,I-BET762可以抑制前列腺癌细胞系LNCaP、C4-2B和PC-3的迁移能力(均P<0.01);CCK-8实验结果表明,I-BET762处理后,3种前列腺癌细胞系的增殖能力被抑制。结论·前列腺癌细胞中I-BET762能够降低组蛋白巴豆酰化修饰水平,抑制细胞增殖和迁移。

睾丸特异性含溴结构域的蛋白作为潜在男性抗生育药物靶标的研究进展

哺乳动物的四种含溴结构域蛋白(BET)基因在精子发生不同阶段均有表达,其中睾丸特异表达的bromodomain-containing protein(BRDT)对精子发生必不可少。BRDT在核染色质重组中起关键作用,也参与基因转录和共转录调节。BRDT的第一个溴结构域缺失导致圆形精子细胞错误伸长、精子形态严重缺陷,而圆形精子细胞的错误伸长与减数分裂之后染色质结构异常相关。另外,BRDT是形成圆形精子细胞染色质核仁所必需的;精母细胞和精子细胞缺乏全长的BRDT将会导致转录和可变剪接过程发生改变。动物实验证实一种小分子的BRDT抑制剂(JQ1),具有良好的抗生育作用,这为进一步开发可逆的男性抗生育药物开辟了新思路。