有机溶剂/去污剂处理血浆的研究进展

有机溶剂 /去污剂处理技术已广泛用于血液制剂的病毒灭活。本文对此项技术用于血浆中病毒灭活的可靠性、处理血液制剂的安全性以及处理血浆的临床应用作了简要介绍。

溶剂/去污剂处理法对人凝血因子Ⅷ中指示病毒灭活效果的验证研究

人凝血因子Ⅷ（humancoagulationfactorⅧ，FⅧ）等血液制品在和平／战争时期的急创伤救治及特定疾病防治中发挥重要作用，但其病毒安全性不容忽视，对血液制品进行有效的病毒灭活可明显降低因输注血液制品而传播病毒性疾病的风险，并保证血液制品的病毒安全性。为尽可能降低血液制品的病毒传播风险，国内、外颁布了相关指导原则，对制品的病毒灭活／去除作出了具体要求。

S/D法灭活血液制剂中脂包膜病毒效果验证的研究

选用不同核酸的脂包膜病毒，其中RNA病毒为水疱性口炎病毒（VSV），DNA病毒为伪狂犬病毒（PRV），将两种指示病毒分别用于验证S／D法处理对纤维蛋白原、凝血酶原复合物、凝血因子Ⅷ、静注丙种球蛋白、免疫血浆等血液制剂的病毒灭活效果。结果该法对所有被处理的血液制剂中的PRV及VSV灭活能力分别为≥3.38－5.88和≥3.50－4.75logTCID50／0．1ml，表明S／D法对两种病毒核酸类型的脂包膜病毒有良好的灭活效果。

四种病毒灭活方法用于登革病毒灭活效果的比较

目的评价常用病毒灭活方法对血液制品中登革病毒(DENV)的灭活效果。方法将单采新鲜冰冻血浆(FFP),人凝血因子Ⅷ(FⅧ)和静脉注射免疫球蛋白(IVIG)3种血浆及其制品中加入高滴度(8.00-9.25)的登革病毒液,分别采用亚甲蓝(MB)光化学法灭活FFP、有机溶剂/去污剂(S/D)法灭活FⅧ、低pH常温孵化法和巴氏消毒法灭活IVIG;以1×10~6/mL A549细胞接种于T25的培养瓶中作为病毒传代及滴度滴定指示细胞,将灭活前后的血浆及制品接种于A549细胞并检测其DENV滴度,并通过qRT-PCR对DENV RNA做定量检测;评估不同的灭活方法对DENV的灭活效果。结果 DENV滴度下降:MB光化学法灭活FFP下降滴度≥5.92 log,S/D法灭活FⅧ下降滴度≥5.17 log、巴氏法和低pH法灭活IVIG均下降滴度≥5.92 log,其中MB光化学法灭活FFP、SD灭活FⅧ及巴氏法灭活IVIG后DENV RNA(cp/mL)降低1.25 log-2.25 log,低pH法灭活IVIG后DENV RNA(cp/mL)降低0.17 log。所有血浆和血液制品样品经灭活后,在DENV宿主细胞上3代盲传后均未检测到DENV RNA。结论 4种常用病毒灭活方法均能有效灭活血浆及血液制品中的DENV。

运用S/D法和膜过滤法对人凝血因子Ⅸ中辛德毕斯病毒和猪细小病毒灭活/去除效果的验证

目的验证运用有机溶剂/去污剂(S/D)处理法和膜过滤法对人凝血因子Ⅸ中辛德毕斯病毒(Sindbis virus)和猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的灭活/去除效果。方法采用S/D处理法灭活人凝血因子Ⅸ中添加的Sindbis virus,噬斑滴定法检测灭活前后的病毒滴度;膜过滤法去除添加的PPV,细胞病变法检测去除前后的病毒滴度。结果经S/D处理法灭活后,3批人凝血因子Ⅸ中Sindbis virus降低量分别为>4.62 lgPFU/mL、>4.64 lgPFU/mL、>4.50 lgPFU/mL。经Planova 15N膜过滤后,3批人凝血因子Ⅸ中PPV降低量分别为≥4.50 lgTCID50/0.1 mL、≥4.56 lgTCID50/0.1 mL、≥4.38 lgTCID50/0.1 mL。结论通过对指示病毒的验证效果评估,证明运用S/D法和膜过滤法对人凝血因子Ⅸ中的Sindbis virus和PPV均有较好的灭活/去除效果。

猪纤维蛋白原生产工艺中病毒灭活效果验证

目的验证和评价猪纤维蛋白原生产工艺中有机溶剂/去污剂(solvent/detergent,S/D)法联合干热法灭活病毒的有效性.方法以辛德比斯病毒、乙型脑炎病毒和伪狂犬病毒为指示病毒,验证猪血浆S/D法灭活病毒的有效性;以脑心肌炎病毒和猪细小病毒为指示病毒,验证猪纤维蛋白原冻干制剂干热法灭活病毒的有效性.结果S/D法中,辛德比斯病毒、乙型脑炎病毒和伪狂犬病毒清除滴度下降均大于4 lg;干热法中,脑心肌炎病毒和猪细小病毒清除滴度下降均大于4 lg.结论S/D法和干热法联合能有效灭活上述指示病毒,可提高猪纤维蛋白原产品的安全性.

人抗凝血酶Ⅲ生产工艺中病毒灭活/去除效果的验证

目的验证和评价人抗凝血酶Ⅲ(human antithrombinⅢ,AT-Ⅲ)生产工艺中有机溶剂/去污剂(solvent/detergent,S/D)法联合纳米膜过滤法灭活/去除病毒的可行性。方法采用S/D法作为AT-Ⅲ病毒灭活工艺,纳米膜过滤法(20 nm孔径)作为其病毒去除工艺,分析病毒灭活/去除工艺对AT-Ⅲ活性的影响;以伪狂犬病毒、辛德毕斯病毒、猪细小病毒、脑心肌炎病毒作为指示病毒,对上述工艺进行病毒灭活/去除工艺效果的验证。结果S/D法联合纳米膜过滤法可有效灭活/去除脂包膜病毒和非脂包膜病毒,指示病毒滴度下降均>4 lg;且AT-Ⅲ的生物活性及其他各项指标未发生明显改变,活性变化<10%。结论研究建立的S/D法联合纳米膜过滤法可有效灭活/去除AT-Ⅲ中的指示病毒,该方法为凝血因子类制品的病毒灭活验证工艺提供了参考。