tPA体外纤溶活性及半定量检测方法的确立

在原有的纤维蛋白平板溶圈法 (fibrin agarose plate assay,FAPA)检测系统中引入纤溶酶原 (plasminogen) ,使该法检测组织型纤溶酶原激活剂 (tissue plasminogen activator,t- PA)的灵敏度提高 30倍以上 ,达到 0 .0 1ng(约0 .0 0 1IU )水平 ;并对不同反应时间、纤维蛋白含量、琼脂糖凝胶厚度下的溶圈结果进行对比研究。结果表明 ,37℃温育18～ 2 4h可以得到较满意结果 ;其他因素虽不同程度地影响溶圈出现时间及大小 ,但对其溶圈梯度及标准曲线无明显影响。从而确立了以 FAPA为基础的快速、灵敏、可靠的重组 t- PA体外纤溶活性半定量检测方法。

瑞替普酶溶栓活性测定方法的比较研究

目的评估测定瑞替普酶溶栓生物活性的4种方法。方法分别使用凝块溶解法、平板溶圈法、发色底物法及气泡法4种方法,测定同一批瑞替普酶样品的生物活性。结果4种测活方法的误差分别为10%,3%,3%和6%,表明测定瑞替普酶体外生物活性的4种方法均有可比性。结论平板溶圈法和发色底物法测活的重复性较好,特异性好,灵敏度高,较适合测定瑞替普酶活性的要求。

重组葡激酶脂质体的制备、活性及包封率测定方法的研究

目的:研究重组葡激酶脂质体的制备、活性及其包封率的测定方法,为重组葡激酶脂质体的研究开发提供实验数据。方法:薄膜分散法制备重组葡激酶脂质体并用溶圈法测定其活性,分别采用超速离心和直接点样2种方法测定重组葡激酶脂质体的包封率。结果:溶圈法测定重组葡激酶活性的板内精密度的 RSD 为8.4%(n=5),板间精密度的 RSD 为12.4%(n=5)。直接点样法测定所制备的3批重组葡激酶脂质体包封率分别为54.36%,51.67%,54.67%;离心法测定所制备的3批重组葡激酶脂质体包封率分别为71.75%,67.43%,68.46%。所制备的重组葡激酶脂质体表面药物吸附量为15.65%。结论:溶圈法可用于重组葡激酶脂质体活性的测定;离心法测定的重组葡激酶脂质体包封率包括脂质体表面吸附药量;离心法与直接点样法测定包封率的差值为脂质体表面吸附药物量。

不同溶媒对瑞通立生物学活性影响的研究

目的 ：通过研究不同溶媒对瑞通立生物学活性的影响,为临床合理用药提供依据。方法取201301批次中瑞通立成品3支,分别用10m L注射用水、0.9%生理盐水、5%葡萄糖溶液进行溶解后2-8℃贮存,并于第1、3、5天分别对外观及生物学活性进行检测。运用平板溶圈法测定瑞通立生物学活性。结果 ：不同溶媒溶解后其生物学活性标示量变化不大（p〉0.05）,在规定允许的范围内。结论：分析可得用不同溶媒溶解瑞通立,5天之内其外观及生物学活性均无明显差异。

酶解水蛭地龙混合药渣的工艺研究及其产物的抗凝活性评价

[目的]考察蛋白酶酶解水蛭地龙混合药渣的工艺条件,评价其酶解产物的抗凝活性。[方法]分别采用碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶对混合药渣进行酶解实验。采用凝血酶滴定法和纤维蛋白原平板溶圈法评价酶解产物的体外抗凝活性,以确定最佳酶种类。溶液pH、酶底比、酶解时间、酶解温度为考察因素,单因素实验优化酶解工艺。[结果]与药渣对照组和蛋白酶对照组对比发现,水蛭地龙混合药渣酶解液显示出较强抗凝活性。其中,碱性蛋白酶酶解产物的抗凝效果最好。其最佳工艺条件为酶底比0.95%、pH 11.4、酶解温度45℃,酶解时间4 h。[结论]经碱性蛋白酶酶解后,水蛭地龙药渣酶解液的抗凝活性最强。实验为废弃药渣的再利用提供实验依据和开发方向。

重组葡激酶脂质体大鼠体内的药物动力学

目的比较重组葡激酶(r-Sak)溶液及其脂质体制剂大鼠静脉注射给药后体内药物动力学过程,为重组葡激酶脂质体的研究奠定基础。方法正常大鼠以0.9mg·kg-1剂量分别静脉注射重组葡激酶溶液及重组葡激酶脂质体,不同时间取血,应用溶圈法测定血浆中药物浓度,比较两种制剂在正常大鼠体内的药物动力学过程。利用三氯化铁法建立大鼠颈动脉血栓模型,以0.9mg·kg-1剂量尾静脉注射重组葡激酶脂质体,应用溶圈法测定不同时间血浆药物浓度,比较重组葡激酶脂质体在正常大鼠和血栓大鼠体内的药物动力学过程。用3p97药物动力学程序处理数据,求算各药物动力学参数。结果重组葡激酶溶液及其脂质体制剂静脉注射给药,在正常大鼠及血栓大鼠体内的平均血药浓度-时间数据经3p97拟和均符合二室模型。静脉注射重组葡激酶脂质体在正常大鼠体内消除半衰期和AUC分别为129.79min和4692.52mg·min·L-1,分别是其溶液剂的12.5和10.4倍,均具有显著性差异(p【0.001,p【0.001),而重组葡激酶脂质体在正常大鼠与血栓大鼠体内的消除半衰期和AUC无显著性差异(p】0.05,p】0.05)。结论脂质体作为重组葡激酶的载体,可以显著延长重组葡激酶的体内消除半衰期,增大AUC,对提高药物疗效具有实用意义。

2种测定TNK-tPA生物学活性测定方法的比对分析

目的:应用2种溶栓活性检测方法检测重组人组织型纤溶酶原激活剂TNK突变体(recombinant TNK mutant of human tissue-type plasminogen activator, TNK-tPA)生物学活性并统计分析两者结果是否一致。方法:采用纤维蛋白平板溶圈法和气泡上升法测定TNK-tPA生物学活性,并对结果进行统计分析。结果:纤维蛋白平板溶圈法测定结果几何均数为2.89×10~4 IU·支^(-1),气泡上升法测定结果几何均数为2.95×10~4 IU·支^(-1)。经t检验分析,2种方法检测结果无显著性差异(P>0.05)。经置换检验(permutation test)分析,2种方法检测结果数据相当(接受度概率约为90%)。结论:2种方法均可用于实验室的常规检验,但建议对于TNK-tPA的生物学活性检测使用气泡上升法。