一种改进的凝胶分离后蛋白质溶液酶解方法

报道了改进的凝胶电泳分离后蛋白质溶液酶解方法。将凝胶分离后的蛋白转移到PVDF膜上,直接用碳酸氢铵中和从膜上的蛋白洗脱溶液至弱碱性,并在此溶液中直接进行蛋白酶解。方法避免了胶内杂质对质谱鉴定蛋白质的干扰。用标准蛋白进行了验证,并在此基础上鉴定了中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系中的16个蛋白点。与已报道的方法比较,本方法蛋白回收率提高到90%左右;与传统的胶内酶解方法比较,本方法具操作简单,实验流程较短;涉及的试剂较胶内酶解少,因此带来的杂质影响小;在蛋白转印以后还可与许多其它实验方法相结合,比如免疫印迹等优点。

两种用于液质联用分析的蛋白质酶解处理效果比较

【目的】分析和评估两种蛋白质溶液酶解方法,为蛋白质组学研究中的大规模质谱鉴定分析建立一种稳定的样品制备技术。【方法】分别使用TEAB法(实验组A)和TFE法(实验组B)对牛血清白蛋白(BSA)进行还原、烷基化和溶液酶解,再用LTQ-Orbitrap高分辨率质谱仪采集BSA酶切肽段信息,比较两种方法得到的数据信息,分析肽段数目、可变修饰位点和蛋白质覆盖率。【结果】实验组A(TEAB法)获得36个肽段、39个修饰位点,蛋白质平均覆盖率为59.31%;实验组B(TFE法)获得27个肽段、27个修饰位点,蛋白质平均覆盖率为47.83%,实验组A的数据指标与实验组B差异显著。【结论】采用TEAB法酶切体系能实现蛋白质高效率酶切,达到获得较高肽段覆盖率的目的,可为蛋白质组学后期的质谱分析鉴定奠定实验基础。

胶原蛋白海绵生产中的病毒灭活工艺效果观察

目的研究胶原蛋白海绵生产中病毒灭活工艺及其灭活病毒的效果。方法采用细胞培养法,对酸性酶解溶液和60Co-γ射线辐照法灭活病毒的效果进行了检测。结果酸性酶解溶液处理2 h,对接种在胶原蛋白海绵中的水疱性口炎病毒、伪狂犬病毒、脊髓灰质炎病毒和猪细小病毒灭活对数值分别为5.54、5.71、6.30和5.13。用照射剂量为25 kGy的60Co-γ射线对胶原蛋白冻干品中的水疱性口炎病毒、伪狂犬病毒、脊髓灰质炎病毒和猪细小病毒灭活对数值分别为6.00、5.75、6.00和5.00。灭活后的样品经细胞感染盲传3代均未见细胞病变。结论胶原蛋白海绵生产中采用酸性酶解溶液处理72 h或25kGy60Co-γ射线辐照灭菌工艺均可有效灭活所试验的4种指示病毒。