海洋溶珊瑚弧菌VcChit56几丁质酶的蛋白质工程改造

外泌几丁质酶在溶珊瑚弧菌生活史中发挥重要作用。本研究从蛋白质序列角度分析了多种来源于溶珊瑚弧菌的几丁质酶,并选其中蛋白质结构相对简单,容易进行序列改造和大肠杆菌重组表达、纯化的几丁质酶开展研究:(1)在保留野生型弧菌C端几丁质结合域的同时,N段增加陆生微生物几丁质结合域;(2)获得高表达重组几丁质酶的大肠杆菌菌株,采用一步层析柱工艺,重组蛋白纯度达90%以上;(3)不经过复杂脱盐换液处理,几丁质酶活性仍维持较高水平。经过对以上条件的优化,本研究确立了几丁质酶重组表达的工艺路线,分析了此重组酶活性匹配的含盐缓冲液条件,为今后几丁质酶大规模生产积累理论研究基础。

金银花、连翘对溶珊瑚弧菌及其生物膜活性的影响

目的研究金银花、连翘对溶珊瑚弧菌及其生物膜活性的影响。方法采用纸片扩散法测定抑菌圈,采用结晶紫法检测金银花、连翘对溶珊瑚弧菌生物膜的作用。结果金银花为低敏药物,连翘为不敏药物。生物膜抑制率与质量浓度有剂量依赖的正相关关系,31、62.5、125 mg/mL金银花和连翘供试药液与菌膜对照组的差异有统计学意义(P<0.05);生物膜破坏试验发现,31、62.5、125 mg/mL金银花和连翘供试药液与菌膜对照组生物膜活菌百分比的差异有统计学意义(P<0.05)。结论金银花有良好的抑菌、抑制细菌生物膜形成和破坏细菌生物膜活性;而连翘有良好的破坏溶珊瑚弧菌的生物膜活性和较好的抑制生物膜形成活性。

溶珊瑚弧菌hapR基因的敲除及功能研究

溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)是多种珊瑚的致病菌。hapR是弧菌群体感应系统核心的泛调控基因。前期实验中发现,溶珊瑚弧菌在感染佳丽鹿角珊瑚时,致病力与其接种密度密切相关,推测溶珊瑚弧菌的群体感应系统可能是调控其毒力的关键因子。笔者利用同源重组技术成功构建了溶珊瑚弧菌hapR缺失株△hapR-Vc450和回补株ChapR-Vc450,表型测试结果表明,hapR的缺失影响溶珊瑚弧菌的菌落形态,但不影响细菌的运动性和鞭毛结构;hapR缺失后,细菌最大生长量明显减少,但生物膜的形成量显著增加;用溶珊瑚弧菌人工感染鹿角珊瑚,结果显示,hapR缺失后菌株毒力增加,表明hapR在溶珊瑚弧菌中可能具有与霍乱弧菌hapR相似的功能,可以抑制毒力基因的级联激活。

杂色鲍幼苗“急性死亡脱落症”病原菌分析

从“急性死亡脱落症”发病期的杂色鲍幼苗体内和病苗附着的薄膜上,共分离到4株优势菌,即NA0301、NA0302、NA0303和NA0304。经人工浸泡感染实验证明,从病幼苗体内和苗附着的薄膜上分离到的优势菌株NA0301和NA0302是杂色鲍幼苗的致病菌,它们均为革兰氏阴性、短杆状、极生鞭毛,能运动。常规生理生化和Biolog细菌鉴定系统测试结果表明,菌株NA0301与溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)的亲缘关系最近,而菌株NA0302与溶藻弧菌(Vib-rio alginolyticus)的亲缘关系最近。为了进一步确定它们的分类学地位,分别测定了溶珊瑚弧菌和溶藻弧菌的16S rDNA序列,分析相关细菌相应序列的同源性,并构建系统进化树。结果表明,菌株NA0301与溶珊瑚弧菌的亲缘关系最近,菌株NA0302与溶藻弧菌的亲缘关系最近。因此,菌株NA0301和菌株NA0302分别鉴定为:溶珊瑚弧菌和溶藻弧菌。[中国水产科学,2006,13(4):655-661]