溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ调节HER2促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制研究

目的探讨溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ调节HER2促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制研究。方法用不同滴度G47(MOI=0.00,MOI=0.01,MOI=0.1)处理乳腺癌MCF-7/HER2过表达组(ER+,HER2-high)、MCF-7/HER2低表达组(ER+,HER2-low)和MCF-7对照组(ER+)细胞,CCK-8法检测检测细胞成活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色法检测乳腺癌细胞凋亡形态;Western blot检测溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ作用后乳腺癌细胞中HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达。结果随着溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ给药剂量的增大,MCF-7/HER2过表达组、MCF-7/HER2低表达组和MCF-7对照组细胞存活率明显降低,细胞凋亡率显著上升,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与病毒G47ΔMOI=0.01处理MCF-7对照组相比,MCF-7/HER2低表达组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著下降,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显下降;MCF-7/HER2过表达组存活率显著降低,细胞凋亡率显著上升,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显上升;与病毒G47ΔMOI=0.1处理MCF-7对照组相比,MCF-7/HER2低表达组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著下降,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显下降;MCF-7/HER2过表达组存活率显著降低,细胞凋亡率显著上升,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ有效诱导HER2过表达乳腺癌MCF-7细胞发生细胞凋亡作用;溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ可以呈浓度依赖性地促进HER2蛋白降解,诱导乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡。

转基因溶瘤性单纯疱疹病毒对人类乳腺癌细胞及其干细胞的溶瘤作用

【目的】通过体外实验观察溶瘤性单纯疱疹病毒(HSV)载体G47Δ对人类原代乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞毒效应,探讨其对人乳腺癌的治疗作用。【方法】选取6例浸润性导管癌组织,体外培养人原代乳腺癌细胞及人原代乳腺癌干细胞,将G47Δ按不同感染复数(MOI),即MOI=0.01和MOI=0.1加入各实验组中,观察每天细胞的生长情况。G47Δ含有LacZ基因,其表达产物可被X-gal染色检测。【结果】G47Δ病毒在乳腺癌细胞中可复制和传播通过X-gal染色法得以证实。G47Δ对人原代乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞都具有杀伤作用,对乳腺癌细胞更加敏感。在MOI=0.01组及0.1组中,感染病毒后第4d,人原代乳腺癌细胞被杀灭的比例分别是91%及96%,乳腺癌干细胞被杀灭的比例分别是43%及78%;感染病毒后第6天,两组中人原代乳腺癌细胞接近全部被杀灭,乳腺癌干细胞被杀灭的比例分别是92%、98%。【结论】G47Δ可有效杀灭人乳腺癌细胞及其干细胞;乳腺癌细胞比乳腺癌干细胞对G47Δ更具有敏感性。

转基因溶瘤性单纯疱疹病毒对人类乳腺癌的治疗作用

目的通过观察溶瘤性单纯疱疹病毒(HSV)载体G47Δ对人类乳腺癌细胞系SK-BR-3、MDA-MB-453和MDA-MB-231的细胞毒效应,探讨其对人乳腺癌的治疗作用。方法体外培养人乳腺癌细胞SK-BR-3、MDA-MB-453和MDA-MB-231,将G47Δ按不同滴度(MOI)加入培养液中,每天观察细胞的生长状态。G47Δ含有LacZ基因,其在被感染细胞中的表达可用X-gal染色检测。结果较低MOI(0.01)的G47Δ对SK-BR-3和MDA-MB-453具有较高的毒性,但对MDA-MB-231没有杀伤作用。在MOI=0.01的实验组,感染病毒后第5天,超过90%的SK-BR-3和MDA-MB-453细胞已被杀灭;但在MOI=0.01组及MOI=0.10组,MDA-MB-231感染G47Δ后细胞数量与对照组相比均无差异。采用X-gal染色证实了病毒在癌细胞中复制和传播。结论近期构建的HSV载体-G47Δ可有效杀灭人乳腺癌细胞SK-BR-3和MDA-MB-453,但未显示出对MDA-MB-231的影响。G47Δ的有效性及缺陷为新型溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ用于乳腺癌治疗的临床试验提供有力依据,但其应用尚需进一步研究。

转基因溶瘤性单纯疱疹病毒对人鼻咽癌细胞裸鼠皮下种植瘤的治疗作用

目的观察转基因溶瘤性单纯疱疹病毒载体G47Δ对人鼻咽癌裸鼠皮下种植瘤的治疗效果,探讨G47Δ对人鼻咽癌的治疗作用。方法体外培养人鼻咽癌细胞CNE2,选取Balb-c裸鼠12只,分为病毒组和对照组,每组6只。于裸鼠双侧皮下注射人鼻咽癌细胞CNE2构建鼻咽癌皮下种植瘤模型,右侧为对照侧,左侧为处理侧。待肿瘤直径约5 mm时,病毒组每周2次于处理侧皮下瘤内注射4×104/μl G47Δ,共注射4次,对照侧不做处理;对照组处理侧每周两次注射磷酸盐缓冲液(PBS),共注射4次,对照侧不做处理。接种后第4、7、11、14、17、21、24、28、32天测量肿瘤最大长径(a)值和最大宽径(b)值,并计算肿瘤体积(V=a×b2/2)。病毒组裸鼠于接种后90 d处死裸鼠,对照组皮下肿瘤最长径达18 mm时处死裸鼠,采用方差分析比较2组裸鼠双侧肿瘤的大小,采用KaplanMeier法比较2组的生存时间。结果病毒载体治疗第21天,2组裸鼠皮下肿瘤体积已有明显差异,病毒组接种后28 d,治疗侧肿瘤体积继续缩小,至接种后32 d,该侧肿瘤消退。病毒组处理侧与病毒组对照侧、病毒组处理侧与对照组处理侧的处理主效应、时间主效应、处理效应与时间效应交互作用均有统计学意义,表明病毒组处理侧的治疗效果优于病毒组对照侧及对照组处理侧。病毒治疗组裸鼠的生存时间明显长于对照组裸鼠,差异具有统计学意义(χ2=12.11,P <0.01)。结论瘤内注射溶瘤性单纯疱疹病毒载体G47Δ可有效治疗鼻咽癌皮下种植瘤。

转基因溶瘤性单纯疱疹病毒对人鼻咽癌细胞裸鼠皮下种植瘤的治疗作用

目的 观察转基因溶瘤性单纯疱疹病毒载体G47Δ 对人鼻咽癌裸鼠皮下种植瘤的治疗效果,探讨G47Δ 对人鼻咽癌的治疗作用.方法 体外培养人鼻咽癌细胞CNE2,选取Balb-c裸鼠12只,分为病毒组和对照组,每组6只.于裸鼠双侧皮下注射人鼻咽癌细胞CNE2构建鼻咽癌皮下种植瘤模型,右侧为对照侧,左侧为处理侧.待肿瘤直径约5 mm时,病毒组每周2次于处理侧皮下瘤内注射4×104/μl G47Δ,共注射4次,对照侧不做处理;对照组处理侧每周两次注射磷酸盐缓冲液(PBS),共注射4次,对照侧不做处理.接种后第4、7、11、14、17、21、24、28、32天测量肿瘤最大长径(a)值和最大宽径(b)值,并计算肿瘤体积(V=a×b2/2).病毒组裸鼠于接种后90 d处死裸鼠,对照组皮下肿瘤最长径达18 mm时处死裸鼠,采用方差分析比较2组裸鼠双侧肿瘤的大小,采用Kaplan-Meier法比较2组的生存时间.结果 病毒载体治疗第21天,2组裸鼠皮下肿瘤体积已有明显差异,病毒组接种后28 d,治疗侧肿瘤体积继续缩小,至接种后32 d,该侧肿瘤消退.病毒组处理侧与病毒组对照侧、病毒组处理侧与对照组处理侧的处理主效应、时间主效应、处理效应与时间效应交互作用均有统计学意义,表明病毒组处理侧的治疗效果优于病毒组对照侧及对照组处理侧.病毒治疗组裸鼠的生存时间明显长于对照组裸鼠,差异具有统计学意义(χ2=12.11,P<0.01).结论 瘤内注射溶瘤性单纯疱疹病毒载体G47Δ 可有效治疗鼻咽癌皮下种植瘤.