五带虻溶纤活性蛋白的纯化和性质

五带虻ＴａｂａｎｕｓｑｕｉｎｑｕｅｃｉｎｃｔｕｓＲｉｃａｒｄｏ腹部匀浆液经硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶层析、Ｆｉｂｒｉｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析和电泳制备等方法纯化后，获得在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现单一区带的溶纤活性蛋白。该蛋白质既具有纤溶酶作用，又具有激活纤溶酶原的作用，其分子量为４０ｋＤ，等电点为４．５，最适作用ｐＨ为９．０，最适作用温度为２８℃，３７℃处理２ｈ活性完全丧失，Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｈｇ２＋和ＰＭＳＦ能抑制其活性。

华广虻(Tabanusamaenus Walker)溶纤活性蛋白的纯化及生物活性分析

经过 ７５％ 饱和度硫酸铵沉淀、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５ 凝胶过滤层析、 Ｌｙｓ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ 亲和层析和电泳制备洗脱，从华广虻（ Ｔａｂａｎｕｓ ａｍ ａｅｎｕｓ Ｗ ａｌｋｅｒ）腹部组织匀浆液中分离纯化出分子量约为 ６７ｋ Ｄ 的溶纤活性蛋白 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ经纤维蛋白平板测定表明， Ｔ Ａ Ｆ Ｐ 只具有纤溶酶作用，不具有激活纤溶酶原的作用；但 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ 能分解纤溶酶原激活剂的生色底物—— Ｃｈｒｏｍ ｏｚｙｍ Ｕ Ｋ 及 Ｓ２２８８还能水解胰蛋白酶专一底物 Ｂｚ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｎ Ａ 及 Ｃ Ｂ Ｚ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｎ Ａ，表明 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ具有类胰蛋白酶活性，专一水解精氨酸形成的酰胺键（或肽键） Ｔ Ａ Ｆ Ｐ无胰凝乳蛋白酶活性

华广虻溶纤活性蛋白(TAFP)的性质和对大鼠血液流变学的影响

华广虻溶纤活性蛋白 (TAFP)经血纤蛋白平板法和试管凝块法测定表明 ,TAFP只具有纤溶酶作用 ,不具有激活纤溶酶原的作用 .TAFP的最适 p H为 7.5,且在 p H为 6.0时最稳定 .蛋白水解酶抑制剂对 TAFP的抑制作用显示 :STI>antipain>SBBI>antitrypsin>TLCK>leupeptin>bacteracin>PMSF>TPCK,金属蛋白酶抑制剂 1 ,1 0 - phenanthroline对 TAFP没有抑制作用 .TAFP能显著的延长大鼠出血时间、抑制血小板聚集性 ;显著降低血浆中血纤蛋白原含量、全血粘度、血浆粘度、红细胞压积 ;

胸腔微创置管辅助尿激酶联合地塞米松对结核性胸膜炎患者血清T淋巴细胞相关细胞因子、纤溶活性的影响

目的:探讨胸腔微创置管辅助尿激酶联合地塞米松对结核性胸膜炎患者血清T淋巴细胞相关细胞因子、纤溶活性的影响。方法:选取2019年4月至2023年4月该院收治的结核性胸膜炎患者90例,采用随机数字表法分为地塞米松组、联合组,各45例。地塞米松组患者使用胸腔微创置管辅助地塞米松治疗,联合组患者使用胸腔微创置管辅助尿激酶联合地塞米松治疗。对比两组患者临床症状改善情况、胸膜厚度;检测两组患者肺功能指标[最大呼气流量(MEF)、用力肺活量(FVC)和第1秒用力呼气容积(FEV_(1))]、超敏C反应蛋白(hs-CRP)和肿瘤坏死因子(TNF-α),T淋巴细胞CD4^(+)、CD3^(+),组织型纤溶酶原活化剂(t-PA)/纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)水平;对比两组患者的治疗效果。结果:联合组患者胸闷消失时间、胸腔积液消失时间和退热时间短于地塞米松组,胸膜厚度低于地塞米松组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,联合组患者MEF、FVC和FEV_(1)水平高于地塞米松组,hs-CRP、TNF-α和PC-Ⅲ水平均低于地塞米松组,CD4^(+)、CD3^(+)和t-PA/PAI-1水平高于地塞米松组,差异均有统计学意义(P<0.05)。联合组患者的总有效率为95.56%(43/45),高于地塞米松组的80.00%(36/45),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:使用胸腔微创置管辅助尿激酶联合地塞米松对结核性胸膜炎患者进行治疗,能够有效减轻患者临床症状,改善肺功能,减轻炎症反应,提高免疫功能,改善纤溶活性,治疗效果显著。

尿激酶对结核性胸膜炎患者的疗效及对胸膜肥厚和纤溶活性的影响

探讨尿激酶对结核性胸膜炎患者的疗效及对胸膜肥厚和纤溶活性的影响。方法选取本院2021年6月至2023年6月收治的结核性胸膜炎患者56例,随机分为A组和B组,A组采用2 HRZE/4 HR抗结核治疗方案,B组在A组基础上增加胸腔内注射尿激酶,对比两组治疗效果以及胸膜肥厚与纤溶活性[组织纤维溶酶原激活物(t-PA)/纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)]变化。结果 B组的治疗有效率显著高于A组;治疗后B组的胸膜厚度为(1.73±0.19)mm,低于治疗前,并且低于A组的(2.35±0.21)mm,胸膜粘连发生率低于A组;治疗后B组的纤溶活性t-PA/PAI-1比值为(0.27±0.07),高于A组的(0.21±0.05),P<0.05。结论 在结核性胸膜炎患者治疗中,通过增加尿激酶注射治疗可显著提升治疗效果,改善患者的疾病情况,降低胸膜厚度与提高纤溶活性,实现对结核病的有效控制。

静脉注射不同剂量氨甲环酸对老年股骨转子间骨折行股骨近端防旋髓内钉固定术后炎症反应及纤溶活性的初步观察

目的探讨静脉注射不同剂量氨甲环酸(TXA)对老年股骨转子间骨折行股骨近端防旋髓内钉(PFNA)固定术后炎症反应及纤溶活性。方法选取2019年7月至2021年1月广东省普宁市人民医院收治的120例实施PFNA术的老年股骨转子间骨折患者作为研究对象,采用随机数字表法将患者分为A组(40例)、B组(40例)、C组(40例)。A组采用术前30 min静滴10 mg/kg TXA;B组采用术前30 min静滴15 mg/kg TXA;C组采用术前30 min静滴相等剂量的生理盐水。比较三组患者的失血量、血红蛋白、纤维蛋白酶降解产物(FDP)、D-二聚体(D-D)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)水平、深静脉栓塞发生率和输血率。结果三组患者的总失血量、术中失血量和隐性失血量比较,差异有统计学意义(P<0.05);三组患者术后第1、4天的血红蛋白、FDP和D-D水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);三组患者术后第1、4天的CRP和IL-6水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);三组患者术后第1、7天的深静脉血栓发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);三组患者的输血率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论术前静脉注射TXA可以减少老年性股骨转子间骨折行PFNA术围手术期出血量及隐性失血量,应用15 mg/kg剂量TXA的患者效果更为明显,其抗纤溶性及抗炎效果随剂量增加而增强,而剂量的增加不会增加术后双下肢发生静脉血栓的风险。

温脾活血汤治疗结核性胸膜炎作用及对胸膜肥厚、纤溶活性和胸腔积液ADA、MCP-1表达影响

目的观察温脾活血汤治疗结核性胸膜炎的作用及对胸膜肥厚、纤溶活性和腺苷脱氨酶(ADA)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法选择2020年3月—2021年3月于河北省胸科医院治疗的120例结核性胸膜炎患者,以随机数字表法分组,60例患者为对照组,60例患者为研究组,对照组给予2HRZE/4HR抗结核方案及胸腔穿刺抽液治疗,研究组给予2HRZE/4HR抗结核方案、温脾活血汤及胸腔穿刺抽液治疗,治疗前、后检测两组患者γ-干扰素诱导蛋白10(IP-10)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、ADA、MCP-1、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活剂抑制因子-1(PAI-1)、免疫球蛋白IgM、IgG、IgA水平,测量两组患者胸膜厚度,记录两组胸腔积液消失时间,给予两组患者中医证候积分,比较两组患者临床疗效,记录两组不良反应发生情况。结果研究组IL-17、IP-10、IFN-γ、TNF-α水平低于对照组(P<0.05),研究组TGF-β1、ADA、MCP-1水平低于对照组(P<0.05),研究组免疫球蛋白IgM、IgG、IgA水平高于对照组(P<0.05),研究组PCⅢ水平低于对照组(P<0.05),研究组t-PA/PAI-1水平高于对照组(P<0.05),研究组证候评分低于对照组(P<0.05),研究组胸膜薄于对照组(P<0.05),研究组胸腔积液消失时间短于对照组(P<0.05),研究组患者总有效率(96.67%)较对照组(85.00%)高(P<0.05),研究组不良反应发生率(8.33%)较对照组(33.33%)低(P<0.05)。结论温脾活血汤治疗结核性胸膜炎患者,可抑制患者炎症,减低TGF-β1、ADA、MCP-1水平,提升患者免疫力,增加胸腔积液纤溶活性,抑制胸膜肥厚,提升临床疗效,减少不良反应发生。

通俗环毛蚓、参环毛蚓、赤子爱胜蚓的分子鉴定及纤溶、抗凝活性对比

目的 鉴定参环毛蚓、通俗环毛蚓以及药典外研究较多的赤子爱胜蚓,再比较3种鲜体蚯蚓在两种不同提取方法下的纤溶和抗凝活性,并检测乙醇沉淀物的分子量。方法 采用DNA分子鉴定法鉴别3种蚯蚓。采用水提法提取鲜体蚯蚓蛋白,进一步采用乙醇沉淀法对水提物中的蛋白进行富集,利用纤维蛋白平板法和纤维蛋白原-凝血酶时间法(Fibg-TT法)测定纤溶活性和抗凝活性,利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测3种蚯蚓乙醇沉淀物的分子量。结果 以线粒体细胞色素c氧化酶亚基I(COI)基因片段为识别片段准确鉴定出了3种蚯蚓。比较3种蚯蚓水提液的抗血栓活性:参环毛蚓水提液的抗凝活性和纤溶活性最强,而赤子爱胜蚓水提液活性最弱;比较3种蚯蚓乙醇沉淀物的抗血栓活性:参环毛蚓乙醇沉淀物的纤溶活性最强,而通俗环毛蚓乙醇沉淀物的抗凝活性最强;赤子爱胜蚓的乙醇沉淀物纤溶和抗凝活性均最弱。参环毛蚓和通俗环毛蚓乙醇沉淀物的蛋白分子量主要分布在25~70 kDa,赤子爱胜蚓乙醇沉淀物的蛋白分子量主要分布在25~40 kDa。结论 药典地龙品种通俗环毛蚓和参环毛蚓的纤溶、抗凝活性远大于药典外的常用品种赤子爱胜蚓,3种蚯蚓中抗血栓活性蛋白有明显差异;乙醇沉淀法可有效富集抗血栓蛋白。

凝血指标及纤溶活性指标在骨科术后DVT中的诊断价值

探讨凝血指标及纤溶活性指标在骨科术后下肢深静脉血栓形成(DVT)中的诊断价值。方法:选取我院2019年5月-2022年5月就诊的78例骨科患者,根据术后3个月是否发生DVT分为观察组(DVT)和对照组(无DVT)。检测患者的纤溶活性、凝血指标,分析其与术后DVT的关系。结果:78例骨科患者术后发生DVT者为13例(16.67%),未发生DVT者为65例(83.33%)。观察组D-D、Fbg水平均显著高于对照组(P<0.05),PT、APTT水平显著低于对照组(P<0.05)。但2组TT水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。D-D诊断骨科术后DVT的AUC与Fbg、PT、APTT比较,差异无统计学意义(P>0.05);Fbg诊断骨科术后DVT的AUC与PT、APTT比较,差异无统计学意义(P>0.05);PT诊断骨科术后DVT的AUC与APTT比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与D-D、Fbg、PT、APTT单独诊断相比,联合检测对DVT的AUC高(P<0.05)。结论:骨科患者术后凝血、纤溶指标水平会出现异常,D-D、Fbg、PT、APTT对骨科术后DVT诊断有一定参考价值,诊断准确性可通过联合检测提高。

参豉糖蛋白提取工艺优化及纤溶活性研究

[目的]对参豉中糖蛋白的提取工艺进行考察,并对其纤溶活性进行评价。[方法]以糖蛋白提取率为指标,通过单因素法考察缓冲液、提取温度、料液比、提取时间和提取次数对其的影响,并运用响应面法分析优化参豉糖蛋白的提取工艺,采用蒽酮-硫酸法测定糖蛋白中多糖含量,SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳确定糖蛋白的分子量,利用琼脂糖纤维蛋白平板法测定纤溶活性。[结果]缓冲液、提取时间和料液比对糖蛋白提取率影响较大;响应面法优化获得参豉糖蛋白的最佳提取工艺条件为Tris-Base-NaCl缓冲溶液(pH=8.04)、料液比1∶10(g∶mL),于4℃提取6 h,参豉糖蛋白提取率为4.85%,其中多糖含量为12.34%;SDS-PAGE、Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,参豉糖蛋白分子量为4.1~27.0 kD;与豆豉糖蛋白相比,参豉糖蛋白纤溶活性提高了40.6%。[结论]经验证利用响应面法分析测得参豉糖蛋白与模型预测值接近,可用于参豉糖蛋白的提取,且参豉糖蛋白具有较高的纤溶活性,为其进一步开发利用提供依据。

通过定点突变提高纳豆激酶纤溶活性和热稳定性

纳豆激酶(Nattokinase, NK)是一种纤溶酶,可溶解血栓,常用于治疗心血管疾病(CVDs)。然而,野生型NK往往表现出很少的纤溶能力和较低的热稳定性,针对如何提高NK的热稳定性和活性开展研究。使用重叠延伸PCR法将NK中位于194位的Ser替换为Pro,为验证突变后的热稳定性,将野生型NK和突变体S194P均在不同温度下孵育相同时间,使用纤维蛋白板法测定二者酶活,验证热稳定性。成功构建了pET-26b-NK_(s194p),测量酶活结果显示,野生型NK和突变体S194P酶活分别达到101.30 IU/mL和123.23 IU/mL,结果表明突变体S194P的酶活比野生型NK高(18.10±2)%,将野生型NK和突变体S194P在60~65℃温度下孵育30 min后测量酶活,野生型NK在63℃时丧失酶活,突变体S194P在65℃时丧失酶活,耐热温度提高2℃。结果表明,突变体S194p的蛋白结构在突变后发生了改变,使NK提高了耐热温度。

少棘蜈蚣纤溶活性蛋白的抗血栓作用

目的研究少棘蜈蚣(Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch)纤溶活性蛋白的抗血栓作用。方法采用离子交换层析和分子筛等制备法从少棘蜈蚣中纯化到蜈蚣纤溶酶(Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch fibrinolyti cenzyme,SSFE),用纤维蛋白平板检测酶活力,常规方法检测了SSFE溶血性和出血性,进行了SSFE体外溶栓和体内溶栓实验,并检测了凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)3个标准化指标。结果PAGE显示SSFE为单一组分,具有纤溶活性;证明SSFE无致出血性且无致溶血活性,低、中、高剂量SSFE使小鼠APTT和TT均明显延长,中剂量SSFE对PT有延长作用,而高剂量作用不明显。结论蜈蚣纤溶酶具有抗血栓作用。

高溶纤酶活性枯草芽孢杆菌的分离筛选与鉴定

从多个枯草样品中分离纯化得到 2 0株芽孢杆菌 ,并进行了鉴定。通过对固体发酵所产生的溶纤酶的研究 ,发现均能不同程度地产生溶纤酶 ,其中菌株FM S1、FM S2、FM S8、FM S6、FM S1 1产生的溶纤酶活性均高于日本的纳豆杆菌。同时对筛选的菌株的形态和菌落形态、生理生化特性进行鉴定 ,确认所筛选到产酶菌株均属于枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis。另外 ,对FM

中药影响纤溶系统活性的实验研究

中药影响纤溶系统活性的实验研究谢文光魏钰书王会信周良玉周承富蒋滋慧（四川川北医学院附属医院南充６３７０００）为了探讨中药对纤溶系统的调节作用，我们分别用尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｕＰＡ），组织型纤溶酶原激活剂（ｔＰＡ）激活纤溶酶原的纤溶试验，观...

胸腔内注射尿激酶对结核性胸膜炎患者纤溶活性及胸膜肥厚的影响

目的观察胸腔内注射尿激酶对结核性胸膜炎患者纤溶活性及胸膜肥厚的影响。方法 60例结核性胸膜炎患者分成尿激酶组和对照组,两组均予胸腔置管引流,并予3HRZE/9HR方案抗结核治疗,尿激酶组同时予胸腔内注射尿激酶。两组均于引流前后检测胸腔积液纤溶酶原激活剂抑制因子-1、组织型纤溶酶原激活物、Ⅲ型前胶原(PCⅢ),并于治疗结束时测定胸膜厚度。结果尿激酶组治疗后胸腔积液纤溶活性增高,PCⅢ下降。对照组治疗前后纤溶活性无明显变化,PCⅢ虽下降,仍高于尿激酶组。尿激酶组在胸膜厚度及粘连发生率均显著低于对照组。结论胸腔内注射尿激酶能增高胸腔积液纤溶活性及降低PCⅢ浓度,能减轻胸膜肥厚及减少胸膜粘连。

纳豆激酶分离纯化及纤溶活性研究

经过生理盐水浸提、(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析等纯化步骤,从纳豆中获得层析纯的纳豆激酶,纯化倍数15.6,回收率10.2%,SDS-PAGE电泳显示为二个组分,分子量在29000左右。对其纤溶性质研究表明:纳豆激酶活性的最适pH为8.0,pH6～10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆生理盐水浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。

糖尿病患者血小板活化状态和纤溶活性的变化

目的：观察糖尿病患者血小板活化状态和纤溶活性的变化。方法：分别采用放射免疫法、比浊法和发色底物显色法，检测２０例正常人和４０例Ⅱ型糖尿病患者（２２例无微血管病变，１８例有微血管病变）的血小板α颗粒膜蛋白（ＧＭＰ１４０）、血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、６酮前列腺素Ｆ１α（６ｋｅｔｏＰＧＦ１α）、血小板聚集率（ＰＡｇＲ）和血浆组织纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）及抑制物（ＰＡＩ１）的变化。结果：糖尿病患者ＧＭＰ１４０、ＴＸＢ２、ＰＡｇＲ、ＰＡＩ１显著高于正常对照组，６ｋｅｔｏＰＧＦ１α和ｔＰＡ则明显下降，伴微血管病变者比无微血管病变者变化更明显，且ＧＭＰ１４０与ＰＡｇＲ、ＴＸＢ２呈显著正相关，而与６ｋｅｔｏＰＧＦ１α呈显著负相关。结论：血小板活化状态和纤溶活性的测定对糖尿病微血管病变的早期诊断和病情分析有重要的临床参考价值。

一种具有纤溶活性的枯草杆菌蛋白激酶的初步研究

从纳豆和豆豉中分离、筛选出２株能产生明显纤溶活性的枯草杆菌蛋白激酶（简称枯激酶）的枯草杆菌菌株（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）。并用两种柱层析（ＳｅｗｐｈａｄｅｘＧ－１００和ｂｅｐｈａｅｒｙｌＳ－２００）纯化出纯的酶。测定出其分子量３０２００Ｄ，ＰＩ为８．６±０．３，同时进行了家兔的动物实验。结果表明对家兔实验性血栓有显著的溶解作用。在一定范围内，表明有很好的量－效关系。因此枯激酶的深入研究，有可能开发成一种新的溶栓药物。

地鳖纤溶活性蛋白(EFP)的分离纯化、红外光谱分析及抑制鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成研究

以传统中药材地鳖为原料,采用匀浆、盐析、硫酸铵分段沉淀、透析和DEAE-52纤维素离子层析等纯化方法,从其体内分离纯化得到一种纤溶活性蛋白(Fibrinolyric protein of Eupolyphaga sinensis Walker,EFP),采用SDS-PAGE电泳法对该蛋白进行了分子量和纯度测定,结果表明,从地鳖中提取纯化的EFP为相对分子量为41300的单一成分,具有明显的纤溶活性,由蛋白质和糖的红外光谱特征吸收峰可推断EFP为一种糖蛋白.EFP对鸡胚尿囊膜新生血管生成有良好的抑制作用,比阳性对照组(地塞米松组)对鸡胚生长发育影响要小.地鳖虫纤溶活性蛋白组分具有抑制血管生成的作用,有可能用于肿瘤治疗.

地鳖纤溶活性蛋白对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的探讨地鳖纤溶活性蛋白(fibrinolytic protein from Eupolyphaga sinensis Walker,EFP)对H22荷瘤小鼠的抑瘤功效。方法采用水提取法对地鳖进行成分分离;皮下接种肿瘤细胞建立荷瘤小鼠动物模型;灌胃和皮下注射法观察EFP的抑瘤作用;ELISA法检测血清抗H22抗体水平;记录各组体重变化、脾脏和胸腺等免疫器官的器官系数,检测肝脏丙二醛(MDA)水平、肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性、肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)以及血清谷丙转氨酶(GPT)活力等生理生化指标。结果EFP具有明显的抑瘤活性。经EFP灌胃和皮下注射后的荷瘤小鼠,与对照组荷瘤小鼠相比其胸腺指数、脾指数明显增加;抗H22抗体水平以及MDA、SOD、GPT、GOT活性明显增加;肿瘤生长缓慢。结论EFP是地鳖抗肿瘤作用的主要有效成分,EFP在动物体内具有抗肿瘤作用,能通过增强荷瘤小鼠参与免疫抗体以及相关酶的活性而发挥抗肿瘤作用。