高溶纤酶活性枯草芽孢杆菌的分离筛选与鉴定

从多个枯草样品中分离纯化得到 2 0株芽孢杆菌 ,并进行了鉴定。通过对固体发酵所产生的溶纤酶的研究 ,发现均能不同程度地产生溶纤酶 ,其中菌株FM S1、FM S2、FM S8、FM S6、FM S1 1产生的溶纤酶活性均高于日本的纳豆杆菌。同时对筛选的菌株的形态和菌落形态、生理生化特性进行鉴定 ,确认所筛选到产酶菌株均属于枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis。另外 ,对FM

蚯蚓纤溶酶活性影响因子的研究

目的 :对提取过程中影响蚯蚓纤溶酶活性的 5种因子进行了分析 ,以提高纤溶酶的提取活性。方法 :分别采用 0 .9%NaCl抽提、10 %蔗糖抽提、75 %酒精抽提出粗酶。酶活测定方法采用尿激酶琼脂糖 纤维蛋白平板法。硒含量的测定方法采用 3,3′ 二氨基联苯胺比色法 ;砷含量的测定方法采用二乙氨基二硫代甲酸银比色法。结果 :饲养在牛粪饵料中的蚯蚓纤溶酶活性比饲养于生活垃圾中的蚯蚓纤溶酶活性更高 ,蚯蚓体内砷的含量与纤溶酶活性呈正相关 ,而蚯蚓体内硒的含量对纤溶酶活性影响不大。在采用 3种不同的蚯蚓纤溶酶的抽提方法中 ,75 %酒精抽提效率最高 ,0 .9%氯化钠次之 ,10 %蔗糖最低 ;在蚯蚓纤溶酶纯化过程中 ,透析比超滤对蚯蚓纤溶酶的活性影响更小一些。结论 :通过将蚯蚓饲养在适宜的饵料中 ,使用合适的提取手段和提纯方法 。

蚯蚓纤溶酶基因(Efp-Ⅰ)在大肠杆菌中的克隆、表达及活性分析

从GenBank查询到的蚯蚓纤溶酶(earthworm fibrinolyti cenzyme,EFE)基因序列中,只有AY438624翻译的蛋白质序列与天然EfP-Ⅰ在N-端具有较高的相似性。根据该基因的5′与3′序列设计引物,通过RT-PCR从赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)获得一个完整的基因(GenBank,DQ418454)。序列分析证明,由该基因编码蛋白质的N-末端与天然EfP-Ⅰ的N-末端的氨基酸顺序完全相同。ScanProsite prediction programs分析显示,该基因与AY438624相似性极高,二者均属于胰蛋白酶家族;不同的是,该基因编码蛋白质的序列中含有N-糖苷键的结构域,所以DQ418454是EfP-Ⅰ中的一个新基因。在此基础上,构建了该基因的原核表达载体pMAL-c2X-Efp-Ⅰ,并进行了转化、诱导和表达。Western blotting证明,表达产物同时具有MBP和EfP-Ⅰ的抗原特异性,是MBP和EfP-Ⅰ的融合蛋白(MBP-EfP-Ⅰ)。经亲和层析分离纯化的MBP-EfP-Ⅰ,在酪蛋白平板和纤维蛋白平板上表现出明显的纤溶酶活性。

老年冠心病患者血清同型半胱氨酸与纤溶酶活性(英文)

背景:同型半胱氨酸已成为动脉粥样硬化的独立危险因子,它可能通过破坏内皮细胞的结构和功能从而导致动脉粥样硬化。目的:探讨同型半胱氨酸对老年冠心病患者纤溶酶活性的影响。设计:以冠心病患者为研究对象,健康人群为对照组的病例-对照。单位:一所大学医院的综合科及心内科。对象:本研究于首都医科大学附属北京朝阳医院综合科及心内科完成。选择2001-12/2003-8本院心内科及综合科门诊及住院患者177例,根据冠状动脉造影结果分为:冠心病组91例,其中男50例,女41例,平均年龄(66±6)岁;冠状动脉造影阴性组86例,其中男43例,女43例,平均年龄(60±6)岁。正常对照组为同期于本院门诊体检的健康中年人85例,其中男43例,女42例,平均年龄(55±5)岁。方法:收集外周血,检测血浆中的组织型纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活物抑制剂1和血管性血友病因子的活性,用酶免疫试验法测同型半胱氨酸,并计算纤溶酶原激活物抑制剂1/组织型纤溶酶原激活剂活性比值。主要观察指标:血清同型半胱氨酸水平及血浆组织型纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活物抑制剂1、血管性血友病因子活性,纤溶酶原激活物抑制剂1/组织型纤溶酶原激活剂的比值。结果:冠状动脉病变组同型半胱氨酸,纤溶酶原激活物抑制剂1,纤溶酶原激活物抑制剂1/组织型纤溶酶原激活剂,

大黄(庶虫)虫丸对小鼠血浆6-酮-前列腺素1α、血栓素B_2含量和纤溶酶原活性、红细胞SOD活性的影响

据报道,大黄（?）虫丸的醇提取物具有显著的抑制血小板聚集、改善血液流变性和体内外抗血栓形成的药理作用。我们观察了大黄廑虫丸对小鼠血浆6-酮-前列腺素 F1α(6-keto-PGF1α)、血栓素 B2（TXB2）含量及纤溶酶活性的影响,测试了药物对小鼠红细胞超氧化物岐化酶（SOD）活性的促进作用,从生物分子水平探讨了大黄（?）虫丸活血祛瘀作用的生物基础。

54例白血病血浆纤溶酶原及纤溶酶活性测定的临床意义

对54例白血病患者进行血浆纤溶酶原(PLG)及纤溶酶(PL)活性测定。结果表明:急性白血病患者血浆PLG含量低于正常对照(P<0.01),血浆PL活性高于正常对照(P<0.01);有临床出血的急性白血病患者PL活性显著高于无出血组(P<0.01)。患者血浆PL活性与纤维蛋白(原)降解产物(FDP)呈正相关(r为0.867,P<0.01),与纤维蛋白原(FG)含量呈负相关(r为-0.831,P<0.01)。6例慢性粒细胞白血病(CML)血浆PLG和PL活性与正常对照比较无显著性差异(P>0.05)。文中对急性白血病时血浆PLG及PL活性变化的可能原因及临床意义进行了讨论。

重组TFPI-2抑制纤溶酶活性的酶促动力学实验方法研究

目的:建立重组TFPI-2抑制纤溶酶活性的测定方法。方法:应用酶促动力学分析方法,建立TFPI-2抑制纤溶酶的测定方法并进行抑制动力学分析。结果:重组TFPI-2对液相纤溶酶均有显抑抑制作用,且呈剂量-效应关系。结论:重组TFPI-2具有强烈抑制纤溶酶活性的作用,为进一步体外探讨TFPI-2在相关领域的应用,提供了可靠的测定方法。

蚯蚓纤溶酶对犬纤溶酶活性和血小板聚集功能的影响

目的研究口服蚯蚓纤溶酶（ＥＦＥ）对纤溶系统和血小板聚集功能的影响。方法正常雄性Ｂｅａｇｌｅ犬，体重６．５～９ｋｇ，经口给蚯蚓纤溶酶，经前肢静脉取血。以Ｓ－２２５１为发色底物，测定血浆纤溶酶活性；５０μｍｏｌ／ＬＡＤＰ为诱导剂测定血小板聚集率。结果（１）单剂量ＥＦＥ４０、８０ｍｇ／ｋｇ后血浆纤溶酶活性升高（Ｐ＜０．０５），８０ｍｇ／ｋｇ组高于４０ｍｇ／ｋｇ组（Ｐ＜０．０５）。连续给药１０ｄ，４０、８０ｍｇ／ｋｇ组均有多个时间点纤溶酶活性升高（Ｐ＜０．０５），但两组间无差异。（２）单剂量ＥＦＥ４０ｍｇ／ｋｇ，或经口给阿司匹林８ｍｇ／ｋｇ后３ｈ，血小板聚集均被抑制（Ｐ＜０．０５）；而在单剂量ＥＦＥ８０ｍｇ／ｋｇ或经口给淀粉后３ｈ，血小板聚集功能均无变化。结论ＥＦＥ经口给药可提高血浆纤溶酶活性，并在一定剂量下可抑制血小板的聚集。

单曲霉菌与混合曲霉菌发酵对纤溶酶活性的影响

以三株经过筛选诱变得到的纤溶酶高产突变株作为实验菌株,以大豆为原料,选取诱变后纤溶酶活性较大的黑曲霉3.4309进行单因素实验,以纤溶酶活性为指标,确定其产纤溶酶活性的最适发酵温度为30℃、接种量为10%、料水比0.6mL/g、装料量20g/250mL、pH5.5,发酵72h纤溶酶活性达到1.16TAME U/mL。在此条件下,运用混料设计确定最适的混菌接入量为黑曲霉3.4309添加4.3%、米曲霉3.800添加2.1%、米曲霉3.5232添加3.6%,72h发酵纤溶酶活性最大达到1.311TAME U/mL,比最优条件下单菌发酵纤溶酶活性高13%。

用酶联免疫吸附试验测定血浆组织纤溶酶原激活物

目的研究酶联免疫吸附试验 (EL ISA)法与发色底物法对照测定血浆组织纤溶酶原激活物 (t- PA)。方法分别用发色底物法和 EL ISA法对正常组 48例与脑梗死组 32例进行 t- PA测定。结果 EL ISA法的线性范围为 1.2 5～ 80μg/L ,平均回收率为 99.7%。用 EL ISA法测得血浆值分别为正常组 (9.5± 3.7)μg/L、脑梗死组(16 .1± 5 .3)μg/L (P<0 .0 1) ;用发色底物法测得分别正常组 (0 .47± 0 .13)× 10 - 3U /L、脑梗死组 (0 .82± 0 .2 3)×10 - 3 U/L(P<0 .0 1)。并以发色底物法为坐标轴 x,EL ISA法为坐标轴 y,作直线回归分析 ,求得回归公式 y=19.70 5 x+0 .3892 ,相关系数 r=0 .92 2 1,P<0 .0 0 1。 EL ISA法阳性率正常组为 3.1% ,脑梗死组为 6 8.8% ,底物发色法阳性率正常组为 9.4% ,脑梗死组为 5 9.4% ,但其差异无统计学意义。结论两种方法是可以相互补充 ,从不同角度测定 t- PA,EL ISA法测定方便、快捷 。

黄瓜籽蛋白纤溶活性及抗凝溶栓作用研究

目的探讨黄瓜籽蛋白的纤溶酶活性、抗凝血和溶栓作用。方法纤溶酶活性测定采用纤维蛋白平板法;采用目内眦取血法和断尾法考察黄瓜籽蛋白对小鼠凝血和出血时间的影响;通过建立大鼠颈总动脉血栓模型,考察黄瓜籽蛋白的溶栓作用。结果黄瓜籽蛋白纤溶酶活性为:(1 632.26±117.33)IU/g;抗凝血实验对照组、黄瓜籽蛋白中、高剂量组小鼠出血时间和凝血时间均显著延长(p<0.01),表明黄瓜籽蛋白具有良好的抗凝血作用;溶栓实验结果表明,对照组、黄瓜籽蛋白低、中、高剂量组大鼠血栓湿重均显著减轻(P<0.01),对大鼠颈总动脉血栓形成具有明显的抑制作用。结论黄瓜籽蛋白具有较为显著的纤溶、抗凝血和溶解血栓的活性。

高纤溶活性黄芪豆豉发酵条件的优化

[目的]确定黄芪与大豆共发酵制备一种具有高纤溶活性黄芪豆豉的最优发酵工艺。[方法]以黄芪水提液浸泡大豆作为发酵基质,以淡豆豉来源的4株枯草芽孢杆菌作为发酵菌株,以纤溶酶活性为考察指标,通过对发酵菌株的筛选、黄芪提取液的浓度和比例以及发酵时间的考察,筛选最优发酵工艺。[结果]黄芪豆豉的最优发酵工艺:黄芪水提液浓度为75 mg/mL,黄芪水提液与大豆的比例为1∶1(mL∶g),最优发酵菌株为DCT-1,于37℃发酵36 h。[结论]黄芪与大豆共发酵制备黄芪豆豉,既提高了豆豉的纤溶酶活性,又兼具黄芪的补气功效,提供了一种具有益气活血作用的食疗产品。

地龙的鲜品和干品可溶性蛋白及纤溶酶活性的对比研究

目的:对比研究地龙的鲜品和干品的可溶性蛋白及纤溶酶活性。方法:采用Bradfold方法测定蛋白含量,SDS-PAGE进行蛋白谱带的分析,并采用琼脂糖-纤维蛋白平板法进行纤溶酶活性的测定。结果:以干燥品计,鲜品的蛋白提取率为(13.89±0.86)%,蛋白含量为(63.14±0.38)%,体外纤溶酶活性为(8 743±17)IU·g-1;干品蛋白提取率为(9.82±0.75)%,蛋白含量为(45.16±0.12)%,体外纤溶酶活性为(206±14)IU·g-1;SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,鲜品共显示12条蛋白谱带,干品的谱带较少,且不清晰。结论:鲜地龙的可溶性蛋白提取率、含量及体外纤溶酶活性均明显高于干品,且蛋白组分有较大的差异。

单、双菌发酵淡豆豉不同发酵期纤溶酶活性

目的采用单菌种或双菌种发酵制备淡豆豉,对比分析不同发酵阶段发酵产物的纤溶酶活性。方法以黄豆和黑豆为发酵基料,采用枯草芽胞杆菌(1号菌)、伞枝梨头霉(2号菌)、米曲霉(3号菌)单菌种和双菌种发酵(包括前酵和后酵)。采用琼脂糖—纤维蛋白平板法测定不同发酵阶段发酵产物的纤溶酶活性。结果以黄豆为基料,以枯草芽胞杆菌单菌种37℃发酵7d,再经42℃后酵3d,其纤溶酶活性达到最高值804.61IU/g,显著高于其以黑豆为基料发酵的纤溶酶活性。1号菌单独发酵的淡豆豉纤溶酶活性高于2号和3号菌单独发酵及三者两两组合发酵淡豆豉的纤溶酶活性。结论以纤溶酶活性为考察指标,淡豆豉最佳发酵条件为:以黄豆为基料,以枯草芽胞杆菌单菌进行发酵,通过37℃前酵7d,再经42℃后酵3d其纤溶酶活性最高。

酶快速反应法测纤溶酶抑制剂活性的方法学探讨

目的 建立测定PI活性的酶快速反应法 ,并探讨其在脑梗死、重症肝病等疾病中的临床意义。方法 用酶快速反应法对 2 6例健康对照者和 83例病人血浆中的PI活性进行分析。结果 酶快速反应法特异性好 ,重复性好 ,灵敏度高 ,线性范围宽。结论 酶快速反应法测定PI活性具有可靠性 ,更能正确的反映血中PI水平 。

血栓前体蛋白及D-二聚体检测在脑梗塞诊断及治疗中的应用

近年,急性脑梗死病人在我国发病率及死亡率越来越高[1].急性脑梗死的基本病理改变是脑血栓形成,最新观察发现,血栓前体蛋白(TpP)是急性血栓形成的特异性指标.TpP升高提示体内动态血栓形成.血浆D-二聚体(D-D)是纤溶酶水解交联纤维蛋白形成的特异性降解产物,当血管内血栓形成时产生大量交联纤维蛋白,纤溶酶活性继发性增强,血浆D-D含量增高.

中医对冠心病心绞痛的诊治(二)

1．精制冠心胶囊，由丹参、川芎、赤芍、降香、红花组成，每次1片，每日3次。本方经证实确有抗心绞痛、抗血小板聚集和提高纤溶酶活性的作用，对血瘀证象突出者尤好。

解淀粉芽孢杆菌发酵豆腐工艺条件优化及营养功能研究

采用高产纤溶酶菌株解淀粉芽孢杆菌CAUNDJ118对豆腐进行发酵,经单因素实验优化获得产纤溶酶活性最优发酵条件:初始水分60%、菌落浓度10~7 CFU/mL、接种量10%、37℃发酵36 h,纤溶酶活性达86.1 FU/g。经发酵后豆腐中总氨基酸含量降低至374.96 mg/g、游离氨基酸和脂肪酸含量分别增加58.8倍和1.1倍,不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸比值保持不变。豆腐发酵过程中,其总酚、多肽、还原糖含量、抗凝血活性及DPPH自由基清除活性随着发酵时间延长而增加。因此,解淀粉芽孢杆菌CAUNDJ118发酵豆腐对心血管疾病具有预防或改善作用。