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题名APOBEC3G蛋白的原核表达及纯化
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作者
隋洪帅
李林
鲍作义
李敬云
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机构
军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心
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出处
《生物技术通讯》
CAS
2008年第2期163-166,共4页
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基金
国家自然科学基金项目(30471496)
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文摘
目的:原核表达重组APOBEC3G蛋白,为其功能及免疫原性研究奠定基础。方法:提取H9细胞全细胞基因组RNA,通过RT-PCR获得目的基因,经纯化、酶切后克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得表达工程菌株,并对表达条件和纯化条件进行优化;利用WesternBlot分析鉴定目的蛋白。结果:构建了APOBEC3G蛋白的原核表达载体Apo-His-pET32a,并在大肠杆菌中获得高表达,目的蛋白以可溶性蛋白形式存在;经Ni-NTA亲和层析柱一步纯化,获得了高纯度的重组APOBEC3G蛋白,蛋白浓度可达1.2mg/mL;WesternBlot显示获得了目的蛋白。结论:在原核表达系统中表达、纯化了可溶性APOBEC3G蛋白,为进一步对其进行免疫原性和功能研究奠定了基础。
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关键词
APOBEC3G蛋白
原核表达
蛋白纯化
溶茵酶裂解
超声破碎
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Keywords
APOBEC3G protein
prokaryotic expression
protein purification
lysozyme lysis
ultrasonic disintegration
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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