农杆菌介导的Lyz-GFP基因对匍匐翦股颖Penn A-1转化和表达的研究

以匍匐翦股颖Penn A-1成熟胚为供试材料,建立了其植株高效再生体系。利用农杆菌介导法将溶菌酶与绿色荧光蛋白Lyz-GFP双元基因转入匍匐翦股颖Penn A-1胚性愈伤组织中,经培养获得抗病转基因植株。并对Lyz-GFP双元基因转化Penn A-1的适宜条件进行了研究。研究结果表明,在2.0mg/L 2,4-D+0.1mg/L 6-BA的MS培养基上Penn A-1愈伤组织诱导率最高,可达36%,且质量最好。愈伤组织在MSO+0.5mg/L NAA上分化率最高,达42.5%;浓度为300mg/L的头孢霉素(Cef)可抑制农杆菌LBA4404的生长;Penn A-1胚性愈伤组织经携有pBI121-Lyz-GFP的农杆菌LBA4404(OD600值0.3～0.5)侵染10～15min,共培养3d后,转化愈伤组织生长状况良好,转化率达12.5%,且在后期的生长和转化苗的再生中有良好的表现,转化苗再生率为27.5%;转化植株有较强的荧光表达量,并经PCR检测,获得的2株匍匐翦股颖Penn A-1转化植株中均扩增出750bp的目标基因片断。

京海黄鸡LYZ基因外显子的遗传多态性及其与体重的关联分析

试验旨在研究鸡溶菌酶基因(LYZ)对鸡体重的影响。以200只京海黄鸡为研究群体,采用PCR-SSCP和DNA测序的方法检测LYZ基因单核苷酸多态性,并将所发现的SNPs与体重进行关联分析。结果发现,共3个突变位点,且均为沉默突变,未引起氨基酸序列的改变;经χ2适合性检验,除1411位点外,其他2个突变位点均显著偏离Hardy-Weinberg平衡;111位点AA基因型个体12和16周龄体重显著高于GG基因型个体(P<0.05),1411位点AA和GA基因型个体各周龄体重均高于GG基因型个体,且4周龄体重差异达到了显著水平(P<0.05),1426位点各基因型对体重没有显著影响(P>0.05)。单倍型分析结果显示,除4周龄外,ANC个体各周龄体重均较大,GAC个体4周龄体重较大,这与上述各位点基因型对体重影响的分析结果相一致,暗示在选种、育种过程中,可将鸡LYZ基因作为京海黄鸡体重候选基因应用于遗传标记辅助选择。

Lyz-GFP双元基因在苜蓿愈伤组织中的转化

利用农杆菌介导法将溶菌酶（Lyz）与绿色荧光蛋白（GFP）基因转入＂甘农1号＂杂花苜蓿（Medicago sativaMartyn）和＂甘农3号＂紫花苜蓿（Medicago sativaL.）品种中,获得含有该双元基因的苜蓿转基因愈伤组织;采用荧光检测和PCR扩增技术,检测到溶菌酶Lyz和绿色荧光蛋白GFP基因在苜蓿愈伤细胞中的表达;研究该双元基因在苜蓿品种＂甘农1号＂和＂甘农3号＂中转化的若干影响因素,确定适宜的转化条件以期提高基因转化效率。结果表明：75 mg.L-1的卡那霉素对苜蓿愈伤组织的生长具有显著抑制效应;300 mg.L-1头孢霉素能够有效地抑制农杆菌LBA4404的生长;OD600值为0.4~0.5的农杆菌适宜的侵染时间是10 min;经预培养3~4 d的材料侵染后再共培养3 d之后,在愈伤组织诱导培养基MS＋2,4-D 2.0 mg.L-1＋KT 0.5 mg.L-1＋0.6%琼脂＋2.5%蔗糖的培养基上诱导出抗性愈伤组织;＂甘农1号＂和＂甘农3号＂的抗性愈伤组织诱导率分别为35%和32%。