3种方法对临床菌血症样本细菌DNA提取的比较

目的寻找一种简单、有效的提取临床菌血症样本细菌DNA的方法.方法分别用碱液加热裂解法、溶菌酶法和商品DNA提取液法提取细菌DNA,用临床常见病原菌特异性引物,进行PCR扩增.结果 (1)商品DNA提取液法提取革兰阴性菌DNA,经PCR扩增后得到特异性目的片段,但未扩增出革兰阳性菌的特异性目的片段;(2)碱液加热裂解法、溶菌酶法提取革兰阴、阳性菌DNA,经PCR扩增后均得到特异性目的片段,但碱液加热裂解法比溶菌酶法能扩增到更低浓度的细菌DNA目的片段.结论碱液加热裂解法是3种方法中最简单有效的细菌DNA提取方法,适用于临床病原菌基因组DNA提取.

鱿鱼肌肉组织细菌基因组DNA提取方法的优化

采用十二烷基苯磺酸钠(SDS)法结合十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、SDS法结合溶菌酶法和CTAB法结合溶菌酶法对鱿鱼肌肉组织中细菌基因组DNA的提取效果进行比较。结果表明,SDS法结合CTAB法和SDS法结合溶菌酶法提取细菌总DNA的效果相近,CTAB法结合溶菌酶法提取细菌总DNA的效果相对较差,3种方法所提取的细菌总DNA纯度均较高,无需纯化即可进行进一步PCR扩增试验。变性梯度凝胶电泳结果说明,SDS法结合CTAB法较另两种方法能更真实地揭示待测样本中微生物的实际组成。

番鸭唾液乳杆菌外膜蛋白提取方法的优化

为获得较大浓度的唾液乳杆菌外膜蛋白,试验对唾液乳杆菌外膜蛋白的提取方法进行了筛选和优化,比较了Sarkosy l法、PMSF法和溶菌酶法,筛选出最佳提取方法,并通过单因素试验和正交试验优化提取条件。结果表明:溶菌酶法所提取的蛋白量大,目的条带清晰,表明溶菌酶法优于PMSF法和Sarkosyl法;各提取因素影响的大小顺序为氯化锂水浴温度>溶菌酶浓度>氯化锂浓度>氯化锂水浴时间>溶菌酶反应时间>溶菌酶反应温度;溶菌酶法的最佳提取条件为2.5 mg/mL溶菌酶,23℃水浴90 min,0.5 mol/mL氯化锂处理,30℃水浴25 h。

螺旋藻基因组DNA制备方法的摸索与比较

为了得到高质量的螺旋藻基因组DNA,采用超声波法和溶菌酶法两种方法提取基因组DNA,并对实验方法进行了摸索与比较。结果表明:影响螺旋藻基因组DNA制备质量和得率的重要因素之一是螺旋藻细胞壁的破壁程度。本实验中采用两种破壁方法均可得到高质量高得率的螺旋藻基因组DNA,但超声波法破壁不易掌控,而适当浓度的溶菌酶法可获得较理想的结果。

不同裂解方式对微生物DNA提取的影响

分子生物学试验中的细胞裂解及DNA提取是试验的第1步,但是由于细胞种类多样、细胞壁成分复杂,DNA提取的效果容易受到提取方法的影响。针对以上问题,主要研究溶菌酶、蛋白酶K、十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,简称CTAB)等4种化学方法对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌以及大肠杆菌3种代表性细菌细胞的裂解效果。结果表明:溶菌酶+SDS法对3种微生物的裂解效果都不错,但可能造成蛋白质污染且DNA碎片较多;溶菌酶+热冻法对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的裂解效果较好且蛋白质污染较少;蛋白酶K+CTAB法仅对金黄色葡萄球菌的裂解提取效果较好;溶菌酶+蛋白酶K法的提取效果最差。在试验中可以根据需要选择不同的裂解方式,从而达到操作性、重现性及经济性的统一。

Spectrophotometric studies on the interaction between chlorogenic acid, neochlorogenic acid, cryptochlorogenic acid and lysozyme

The interactions of chlorogenic acid （CA）, neochlorogenic acid （NCA） and cryptochlorogenic acid （CCA） with lysozyme （LYSO） were investigated in physiological buffer by fluorescence spectroscopy. The mechanism study indicated that CA, NCA and CCA could strongly quench the intrinsic fluorescence of LYSO through static quenching procedures with one binding site. Thermodynamic data show that the major force in the binding processes of CA to LYSO was hydrophobic interactions; for NCA, it was the hydrogen bonds and van der Waals forces, as for the CCA system, the mainly force is electrostatic force.