溶菌酶C及其生物学功能

在已知6类溶菌酶中,溶菌酶C是唯一存在于脊椎动物、原索动物和无脊椎动物中的类型,也是当前研究最广泛、最透彻的类型。该文从基因数目、基因表达、基因进化和基因功能几个方面详细介绍溶菌酶C的分子生物学研究进展,并认为未来的研究重点已经不是溶菌酶的杀菌作用,而是其消化功能和其他未知的生物学功能。

海参溶菌酶C端多肽在毕赤酵母中的重组表达

为构建并筛选具有抑菌活性的重组海参溶菌酶C端(SjLys-C)多肽的毕赤酵母基因工程菌,根据已构建的pMD18-T-SjLys-C质粒为模板,设计特异性引物,扩增出带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的海参溶菌酶C端多肽基因,将其亚克隆到真核表达载体pPIC9K上,构建重组表达质粒pPIC9K-SjLys-C。该重组质粒经BglⅡ线性化后,采用电转化方式将线性DNA转化至毕赤酵母GS115中,经含不同浓度抗生素G418的YPD培养基筛选鉴定转化子,再经1%甲醇诱导表达,共筛选出4株高拷贝重组海参溶菌C端多肽基因工程菌。结果表明,该酵母基因工程菌经甲醇诱导72h,其目的蛋白表达量最高,并对革兰阳性菌和阴性菌均具有抑菌活性,尤其对通常引起水产动物严重病害的病原菌副溶血弧菌和铜绿假单胞菌具有明显的抗菌效果。

SCD-1、LYSC在干眼症病人结膜上皮细胞及泪液中表达及意义

目的:探究干眼症(DES)病人结膜上皮细胞及泪液中硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)、溶菌酶C(LYSC)的表达及意义。方法:随机抽取在医院干眼门诊就诊的DES病人55例(DES组)及非妊娠健康人群50例(对照组),利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测两组研究对象结膜上皮细胞及泪液中SCD-1水平,利用微量快速比浊法测定LYSC含量,比较DES组及对照组结膜上皮细胞及泪液中SCD-1、LYSC水平,DES组治疗前后SCD-1、LYSC水平及各项临床指标的变化,利用Pearson分析DES病人结膜上皮组织及泪液中SCD-1、LYSC水平与各项临床指标变化的相关性。结果:DES组病人结膜上皮细胞、泪液中SCD-1、LYSC水平与对照组相比均显著降低(P<0.05);与治疗前相比,DES组病人治疗后结膜上皮细胞及泪液中SCD-1、LYSC水平升高(P<0.05),BUT延长,SIT值增加,CFS评分降低(P<0.05);Pearson结果显示,结膜上皮组织及泪液中所含SCD-1、LYSC水平与BUT、SIT结果呈正相关(P<0.05),与CFS评分呈负相关(P<0.05)。结论:DES病人结膜上皮细胞和泪液中SCD-1、LYSC水平均低于健康对照组,治疗后SCD-1、LYSC水平均高于治疗前,提示SCD-1、LYSC水平变化可能与泪液中的脂质存在某种关系,参与DES症状的发生、发展。

槟榔江水牛胃型LYZ C基因分离鉴定及功能生物信息学分析

【目的】溶菌酶是一种由动物产生的抗微生物酶,构成动物体先天免疫系统的一部分,在反刍动物的皱胃中还具有消化功能。迄今,普通牛溶菌酶C基因家族的分子遗传特征已被深入解析,但有关水牛溶菌酶C的研究报道较少。【方法】采用PCR产物直接测序技术,对槟榔江水牛胃型溶菌酶C基因编码区进行了分段扩增测序、序列组装和开放阅读框的确定,并结合已发表的其他牛科物种同源序列进行了生物信息学分析。【结果】序列分析表明:水牛胃型溶菌酶C基因编码区长444 bp,编码1个由147个氨基酸残基组成的多肽,包含1个N端信号肽和1段由129个氨基酸组成的成熟肽。水牛胃型溶菌酶C成熟肽分子量为14.41 ku,等电点为6.32,含有1个alpha-lactalbumin/lysozyme C保守结构域(19~145AA),不含有跨膜结构域,为亲水蛋白,在胞外发挥生物功能;在三维结构上与普通牛的溶菌酶模板(2z2f.1.A)有99.22%的一致性;在基于氨基酸序列构建的系统树上,水牛与普通牛、瘤牛、野牦牛和野牛聚在一起,且有较高的支持率(88%)。【结论】槟榔江水牛与其他牛科物种的胃型溶菌酶具有相似的功能。