文摘根据Imbereehts等报道的EHEC F18菌毛主要亚单位(fedA)基因序列设计一对引物,以重庆地区仔猪水肿病流行强毒株W96基因组DNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增到约500bp的核酸片段。用常规DNA重组技术将该片段克隆到表达载体pET28b(+)的SalI-Hindm位点之间构建重组表达质粒pET28fedA,序列测定结果显示该克隆片段长447bp,同源性分析表明该基因片段与GenBank报道的fedA核苷酸序列有99.4%的同源性,W96株fedA基因三处核苷酸发生变异,其中两个为无义突变,另一个导致Q100R突变。将pET28fedA转入BL21(DE3)中进行诱导表达,经SDS—PAGE电泳检测上清存在约20KD的蛋白,6xHis affinity tag IMAC亲和层析显示该蛋白能被亲和纯化,说明是含有组氨酸标签的融合目的蛋白。